H-reflex는 신경 회로의 무결성에 대한 전기생리학적 검증을 가능하게 합니다. 우리는 생쥐의 앞발 신경에서 직접 H-반사를 정량화하는 말단 프로토콜을 제시합니다. 기존의 다소 신경-특이적이지 않은 경피적 기록과 달리 결과는 마우스와 측정일 간에 덜 가변적입니다.
환자의 H-반사 기록과 유사하게 정확한 정량화를 통해 척수 손상 및 뇌졸중과 같은 질병 모델에서 전기생리학적 특성을 분석할 수 있습니다. 이 프로토콜은 생쥐의 수술 장비를 다루는 데 견고한 실험 기술이 필요합니다.
결합 조직과 혈관에서 신경을 분리하는 방법을 잘 모르겠다면 먼저 연습하십시오. 이 절차를 시연하는 것은 제 연구실의 박사 과정 학생 인 Frederique Wieters가 담당합니다. 시작하려면 마취된 성인용 8-16주 된 C57 black/6J 마우스를 덮개가 있는 가열 패드에 놓고 마우스가 진정되고 호흡이 안정되며 반사 신경이 없을 때까지 기다립니다.
마우스를 뒤로 돌립니다. 그런 다음 앞발을 테이프로 고정하십시오. 측정 전극이 앞발에 쉽게 삽입되도록 테이프를 배치합니다.
마우스의 온도를 측정하려면 직장 프로브를 삽입하고 테이프로 고정하십시오. 눈이 건조해지는 것을 방지하기 위해 눈 연고를 바르십시오. 핀셋으로 피부를 들어 올리면서 가늘고 둥근 가위로 털을 조심스럽게 제거하십시오.
그런 다음 앞발의 복후축을 따라 피부에 1cm 절개를하고 둥근 가위로 만듭니다. 결합 조직을 조심스럽게 제거하고 아래 근육과 신경을 노출시킵니다. 그런 다음 집게를 사용하여 노출된 흉근 천저근을 제거하여 정중 신경을 평가합니다.
부드러운 티슈 페이퍼로 소량의 혈액과 조직액을 제거하십시오. 다음으로 유방이나 겨드랑이 근육을 위에서 아래로 조심스럽게 잘라 신경 다발을 노출시킵니다. 약 1.5 센티미터의 길이에 걸쳐 결합 및 근육 조직에서 신경 다발을 제거하십시오.
구부러진 유리 피펫을 사용하여 앞발의 척골과 정중 신경을 조심스럽게 분리하십시오. 상부 신경은 척골 신경이고 하부 신경은 정중 신경입니다. 자극기 후크 전극을 0.5mm에서 1mm의 거리에서 평행하게 배열하고 미세 매니퓰레이터를 사용하여 이중 후크를 신경 가까이에 배치합니다.
유리 후크를 사용하여 척골 신경을 자극 후크 전극으로 들어 올립니다. 그런 다음 신경이 있는 전극을 뒤로 당겨 다른 신경과 분리합니다. 근육 사이의 누화를 줄이기 위해 발의 장축을 따라 전극을 배치하십시오.
신경에 부착 된 전극 후크를 표면적으로 건조시키고 주사기를 사용하여 바셀린을 적용하여 인접 조직으로부터 전기 절연을 제공합니다. H-반사를 측정하려면 근전도 전극을 앞발에 근육 주사로 배치합니다. 그런 다음 기준 전극을 뒷다리에 피하로 배치하고 미니어처 악어 클립으로 고정합니다.
자극기가 켜지면 앞발의 작은 경련으로 성공적인 자극을 관찰하십시오. 앞발에서 M파와 눈에 보이는 작은 경련을 유도하기 위한 최소 자극 전류는 10에서 50마이크로암페어 사이입니다. 각각 0.2밀리초 길이의 펄스로 신경 자극을 15회 수행합니다.
자극 세트 사이에 2 분 동안 일시 중지하면 주파수가 0.1, 0.5, 1.0, 2.0에서 5 헤르츠로 증가합니다. Hoffman 반사 및 근육 반응을 측정하기 위해 경로에 설정된 녹음의 그림이 여기에 나와 있습니다. H파와 M파 진폭 사이의 비율을 평가했습니다.
자극 및 각각의 자극 아티팩트는 0밀리초로 설정되었고, 그 다음에는 직접 M파와 H파를 나타내는 더 작은 피크가 뒤따랐습니다. M파는 자극 후 약 2밀리초 후에 발생하고, H파는 척수를 통과하는 더 긴 통과 시간으로 인해 6-8밀리초 후에 발생합니다. 신경을 분리하는 것 다음으로 바셀린을 전극과 두 후크 사이에 적용하는 것이 중요합니다.
이것은 최종 실험입니다. 우리 연구실에서 이 기술은 경피적 H-반사 기록에 대한 새로운 표준 참조를 제공했습니다.
