רפלקס H מאפשר אימות אלקטרופיזיולוגי של שלמות המעגלים העצביים. אנו מציגים פרוטוקול טרמינלי לכימות רפלקס H ישירות בעצבי הכף הקדמית בעכברים. בשונה מהקלטות טרנסעוריות קונבנציונליות ולא ספציפיות לעצבים, התוצאות פחות משתנות בין עכברים לימי מדידה.
בדומה לרישומי H-רפלקס בחולים, כימות מדויק מאפשר אפיון אלקטרופיזיולוגי במודלים של מחלות, כגון פגיעה בעמוד השדרה ושבץ. הפרוטוקול דורש מיומנויות ניסוי מוצקות בעבודה עם ציוד ניתוח בעכברים.
אם אינכם בטוחים כיצד להפריד עצבים מרקמת החיבור וכלי הדם, תרגלו תחילה. הדגמת ההליך תהיה על ידי פרדריק ויטרס, דוקטורנטית מהמעבדה שלי. כדי להתחיל, הניחו את העכבר השחור/6J C57 הבוגר בן 8 עד 16 שבועות על כרית החימום המכוסה והמתינו עד שהעכבר יהיה רגוע, הנשימה תהיה יציבה והרפלקסים ייעדרו.
סובב את העכבר על גבו. לאחר מכן, לתקן את הכפות הקדמיות עם קלטת. מקם את הסרט כך שאלקטרודות המדידה יוכנסו בקלות לכפות הקדמיות.
כדי למדוד את הטמפרטורה של עכבר, הכנס בדיקה רקטלית ותקן אותה עם קלטת. יש למרוח משחת עיניים כדי למנוע התייבשות של העיניים. הסירו את הפרווה בזהירות עם זוג מספריים עדינים ומעוגלים תוך הרמת העור בפינצטה.
לאחר מכן, בצע חתך של סנטימטר אחד בעור לאורך ציר ventroposterior של הכף הקדמית עם זוג מספריים עדינים ומעוגלים. הסר בזהירות את רקמת החיבור וחשף את השריר והעצב שמתחת. לאחר מכן להסיר את שריר pectoralis profundus חשוף באמצעות מלקחיים כדי להעריך את העצב המדיאני.
הסר כמויות קטנות של דם ונוזל רקמות עם נייר טישו רך. לאחר מכן, לחתוך בזהירות את השד או שריר בית השחי מלמעלה למטה כדי לחשוף את צרור העצבים. שחררו את צרור העצבים מרקמת החיבור והשריר לאורך של כ-1.5 סנטימטרים.
הפרידו בזהירות את העצב האולנרי והמדיאני של הכף הקדמית באמצעות פיפטה מזכוכית כפופה. העצב העליון הוא העצב האולנרי והתחתון הוא העצב המדיאני. סדרו את אלקטרודות וו המגרה במקביל במרחק של 0.5 עד מילימטר והשתמשו במיקרומניפולטור כדי למקם את הוו הכפול קרוב לעצב.
השתמש בוו הזכוכית כדי להרים את העצב האולנרי אל אלקטרודות וו הגירוי. לאחר מכן, משוך את האלקטרודה לאחור עם העצב והפרד אותה מהעצבים האחרים. הניחו את האלקטרודות לאורך הציר הארוך של הכף כדי להפחית את הדיבור בין השרירים.
יבשו באופן שטחי את ווי האלקטרודות המחוברים לעצב ומרחו וזלין באמצעות מזרק כדי לספק בידוד חשמלי מהרקמה הסמוכה. כדי למדוד את רפלקס H, מקם את אלקטרודות האלקטרומיוגרפיה תוך שרירית בכפה הקדמית. לאחר מכן, מקם את אלקטרודת הייחוס באופן תת עורי בגפה האחורית, המוחזקת על ידי קליפס תנין מיניאטורי.
כאשר הממריץ מופעל, שימו לב לגירוי מוצלח כמו עוויתות זעירות של הכף הקדמית. זרם הגירוי המינימלי המעורר את גל M ועוויתות זעירות הנראות לעין בכפה הקדמית הם בין 10 ל -50 מיקרואמפר. בצע את הגירוי העצבי 15 פעמים עם פולסים באורך 0.2 אלפיות השנייה כל אחד.
עם הפסקות של שתי דקות בין קבוצות הגירויים, התדירות מוגברת מ 0.1, 0.5, 1.0, 2.0, ל 5 הרץ. איור של ההקלטה שהוצבה במסלולים למדידת רפלקס הופמן ותגובת השרירים מוצג כאן. היחס בין משרעת גל H למשרעת גל M הוערך.
הגירוי וחפץ הגירוי בהתאמה נקבעו על אפס אלפיות השנייה, ואחריו גל M ישיר והשיא הקטן יותר שבא אחריו המייצג את גל H. גל M מתרחש כשתי אלפיות שנייה לאחר הגירוי, וגל H לאחר שש עד שמונה אלפיות השנייה בשל זמן המעבר הארוך יותר דרך חוט השדרה. לצד ההפרדה של העצבים, היישום של וזלין ג'ל על האלקטרודה וגם בין שני ווים הם קריטיים.
זהו ניסוי סופני. במעבדה שלנו, טכניקה זו סיפקה התייחסות תקן זהב חדש לרישומי H-רפלקס טרנסעוריים.
