缺氧诱导小鼠肺动脉高压模型中的多次静脉推注给药和侵入性血流动力学评估

对于需要直接进入血液的化合物，优化静脉给药是实验程序的关键部分。我们的详细方案提供了通过小鼠颈静脉进行多次静脉推注给药的分步说明，以及如何在小鼠缺氧肺动脉高压模型中进行动脉和右心室导管插入术以准确评估血流动力学。对于对化合物给药平台的 IV 根感兴趣的研究人员来说，这里介绍的程序是重要的结果，以开发原发性动脉高血压的治疗方法。

研究人员可以在任何小鼠疾病模型中使用这种颈静脉推注方法进行药物开发化合物筛选。成功的静脉推注和血压测量需要大量的练习。首先，将鼠标从麻醉室中取出。

将麻醉的小鼠置于解剖显微镜下方的注射平台上的仰卧位。用1.5%异氟烷的鼻锥维持麻醉，用胶带轻轻束缚四条腿，使身体固定。用三轮聚维酮碘溶液和 70% 乙醇交替轻轻擦洗手术区域三次。

进行 0.5 厘米的纵向切割后，使用镊子将肌肉和脂肪组织分开，并找到右侧颈外静脉。然后将28G无菌针头插入颈静脉。针斜面朝上。

缓慢按压注射器柱塞，将化合物注入静脉中。让针头在静脉内再停留 10 秒钟，以防止回流。取出针头，用棉签对注射部位施加压力，以防止出血。

用 5/0 缝合线缝合皮肤，并将动物放入恢复笼中，笼子底部用纸巾覆盖，不带垫料。首先，测量从导管插入部位到所需导管尖端位置的距离。标记两个导管距离标记以提供插入深度的视觉指示，将兽药膏直接涂抹在小鼠眼睛的眼表以防止干燥。

将小鼠置于解剖显微镜下方的注射平台上的仰卧位。从下颌骨切开皮肤到胸骨后，分离唾液腺并暴露气管。将 0.5 毫升 PBS 放入腔内，以减缓血管痉挛的发展，同时操纵颈动脉。

小心地隔离右颈动脉的 5 毫米部分，方法是在血管下方放置一张白纸作为背景。使用 8-0缝合，打一个永久结以关闭血管的颅端。接下来，打上第一个松动的结，以暂时阻塞主动脉的血流。

然后在前两条缝合线之间打第二个松动的结。使用 25G 针头，打一个足够大的小孔，使导管与永久结和第二个松动结之间的血管对齐。将导管握住距离尖端 1.5 英寸，然后轻轻地将导管尖端插入动脉孔。

拧紧导管和血管周围的第二个松动结，以允许导管通过。轻轻松开第一个松开的结。根据导管上的标记继续将导管插入升主动脉，直到压力分析显示动脉血压曲线。

使用数据采集系统和软件记录全身血压数据。松开中间缝合线节点，以便将导管拔出。然后系好第一个松动的结以防止出血，并将导管从颈动脉中拉出。

小心地将右颈外静脉与周围的结缔组织隔离开来。使用 8-0缝合，结扎所有小树枝并打一个永久结以封闭血管的颅端。然后在容器的尾端打一个松散的结。

用25G针在永久结附近打一个小孔。握住导管并将导管插入静脉切口，并收紧导管和血管周围的尾结。慢慢地将导管推入右心。

根据导管标记监测导管尖端深度。根据软件中的压力波跟踪评估导管尖端位置。当导管尖端位于右心室时，监护仪将显示典型的右心室收缩压示踪。

保持导管稳定并收集数据五分钟。记录完成后，小心地将导管拔出并观察没有压力记录。将尾结系在容器周围。

将导管放回 PBS 溶液中。在常氧控制的 C57 黑色六只小鼠中进行右心室导管插入术期间，从静脉系统不同区域的血流动力学波形的变化可以看出，成功进入了右心室。在暴露于缺氧或常氧状态 4 周后在闭合的胸部小鼠中测量全身血压和右心室收缩压。

与常氧组相比，缺氧组的右心室收缩压显著升高。与缺氧组相比，7C1/let-7 micro RNA化合物处理导致右心室收缩压显著降低，而任何组的全身血压均无变化。由于红心室解剖结构复杂，闭合胸小鼠的红心室收缩压评估是一项挑战。

研究者应避免长时间和反复尝试红心室导管插入术。我们的颈静脉和推注给药程序可用于任何小鼠疾病模型中的药物开发化合物筛选。我们可以使用复方给药平台的静脉根来开发治疗肺动脉高压的方法。