首先戴上口罩、发套和干净的实验室外套或磨砂膏。接下来，将麻醉的小鼠放在与手术区域分开的干净表面上，并用提供1.5%异氟醚和21%氧气的鼻锥安装。然后皮下注射丁丙诺啡到颈背胸区。
此外，腹膜内注射肝素以防止闭塞期间血栓形成。将眼药膏涂抹在眼睛上以防止角膜损伤，并使用剪刀去除腹腹的毛发。将鼠标移动到手术区域的热水毯上。
同样，将其与输送异氟烷的鼻锥配合使用。接下来，将鼠标置于背卧位，并用手术胶带将四肢固定在桌子上。使用啮齿动物专用直肠温度计监测动物的体温。
对腹部进行彻底消毒后，进行脚趾捏试验，以确保动物完全麻醉。最后，戴上无菌手套，无菌覆盖手术部位。首先，使用 15 号手术刀刀片在皮肤上做一个 3 到 5 厘米的腹侧中线腹部切口。
将皮肤边缘与下面的肌肉筋膜分开 0.5 厘米，以便稍后放置订书钉。然后使用弹簧式微型剪刀沿着线性白壁继续切口，并放置牵开器。将蘸有温热无菌盐水的无菌纱布垫放在手术区域周围。
从腹腔中取出小肠。将其翻转到动物的左侧，然后将其放在湿润的垫子上。将另一个湿润的纱布垫放在纸巾上以防止干燥。
定位肠系膜上动脉 （SMA）、腹侧至下腔静脉、腹腔动脉尾部和颅动脉至肾动脉。将其从周围的结缔组织中解剖出来。沿着 SMA 的底部放置一个无创伤微血管夹，该夹从腹主动脉分支。
通过注意颜色从粉红色到淡白色的变化来验证小肠缺血。在缺血期间，将内脏恢复到腹腔内的原始位置。取下牵开器并用湿纱布覆盖切口。
缺血 45 分钟后，取下闭塞夹。通过观察肠系膜搏动和潮红颜色来验证血流的恢复。腹膜内涂抹温热的无菌生理盐水以保持适当的水合作用。
然后用 6-0 聚乳蛋白 910 缝合线闭合腹部肌肉。沿肌肉切口线局部给药布比卡因以缓解疼痛。用手术钉或伤口夹缝合皮肤。
将鼠标放回循环水毯上的温暖腔室。让鼠标恢复 90 分钟，并监测鼠标是否有疼痛或痛苦的迹象。进行人道安乐死后，收集所需的组织，例如肝叶，包括左外侧叶、左正中叶和右正中叶。
然后收集两个肾脏。纵向切开左肾，切开右肾作为横截面。最后，收集小肠和大肠的整个长度。
要将小肠段分成等长的部分，请将小肠折叠成 Z 形，其中顶线是十二指肠，中线是空肠，底线是回肠。肠道的其余部分是结肠。使用装有 20 号血管导管的 10 毫升注射器用生理盐水冲洗肠段的管腔。
接下来，用显微解剖剪刀剪下肠子的长度，并将每个肠段平放，管腔面朝上。使用贴有 27 号针头的 3 毫升注射器，大量滴涂 10% 缓冲福尔马林，涂覆整个粘膜长度。然后围绕牙签圆周滚动每个部分，确保近端部分形成滚动的内部，管腔朝向内侧。
滚动后，肠道应该看起来像瑞士卷。将单个瑞士卷的螺旋面朝上放入单独的标记组织盒内。最后，将组织放入装有10%缓冲福尔马林的标记小瓶中，以将其固定在室温下。
肠道IRI后，假手术组小鼠空肠和回肠的H&E染色显示绒毛长而薄，无变形。而IRI组小鼠的切片显示坏死和出血区域，剩余绒毛变钝和变形。此外，与接受假剖腹手术的动物相比，接受IRI的动物对所有三个小肠段的微观损伤显着增加。
