Comece usando máscara, capa de cabelo e jaleco ou esfoliantes limpos. Em seguida, coloque o camundongo anestesiado em uma superfície limpa separada da área da cirurgia e encaixe-o com um cone nasal fornecendo isoflurano a 1,5% com oxigênio a 21%. Em seguida, injetar buprenorfina por via subcutânea na área torácica cervical dorsal.
Injetar também heparina intraperitonealmente para evitar a formação de trombos durante o período de oclusão. Aplique pomada oftálmica nos olhos para evitar danos na córnea e remova os pelos do abdômen ventral usando cortadores. Mova o mouse para a manta de água aquecida na área da cirurgia.
Novamente, encaixe-o com um cone nasal entregando isoflurano. Em seguida, posicione o camundongo em decúbito dorsal e fixe os membros à mesa com fita adesiva cirúrgica. Monitore a temperatura corporal do animal usando um termômetro retal específico para roedores.
Depois de desinfetar completamente o abdômen, realize um teste de pinça dos dedos dos pés para garantir que o animal esteja totalmente anestesiado. Por fim, usar luvas estéreis e cobrir assepticamente o local cirúrgico. Primeiro, faça uma incisão abdominal ventral de três a cinco centímetros na pele usando uma lâmina de bisturi número 15.
Separe 0,5 centímetros da borda da pele da fáscia muscular subjacente para permitir a colocação do grampo mais tarde. Em seguida, continue a incisão através da parede abdominal ao longo da alba linear usando microtesoura carregada com mola e coloque um afastador. Coloque compressas de gaze estéreis umedecidas com soro fisiológico estéril quente ao redor da área de operação.
Remova o intestino delgado da cavidade abdominal. Vire-o cranialmente e para a esquerda do animal, e coloque-o sobre as almofadas umedecidas. Coloque outra compressa de gaze umedecida sobre os tecidos para evitar a dessecação.
Localiza-se a artéria mesentérica superior, ou AMS, ventral à veia cava inferior caudal à artéria celíaca e cranial à artéria renal. Disseque-o para longe do tecido conjuntivo circundante. Coloque um clipe microvascular atraumática ao longo da base da AMS, onde se ramifica da aorta abdominal.
Verifique a isquemia do intestino delgado, observando a mudança de cor de rosa para branco pálido. Retornar as vísceras à sua posição original dentro da cavidade abdominal durante o período isquêmico. Retire o afastador e cubra a incisão com gaze úmida.
Após um período de isquemia de 45 minutos, remova o clipe oclusor. Verifique a restauração do fluxo sanguíneo observando uma pulsação mesentérica e cor ruborizada. Aplicar soro fisiológico estéril morno intraperitonealmente para manter a hidratação adequada.
Em seguida, feche os músculos abdominais com uma sutura de poliglactina 910 6-0. Administrar bupivacaína topicamente ao longo da linha de incisão muscular para alívio da dor. Feche a pele com grampos cirúrgicos ou clipes de ferida.
Volte o mouse para uma câmara quente em uma manta de água circulante. Deixe o mouse se recuperar por 90 minutos e monitore o mouse em busca de sinais de dor ou angústia. Após a realização da eutanásia humana, colete os tecidos desejados, como os lobos hepáticos, incluindo os lobos lateral esquerdo, mediano esquerdo e mediano direito.
Em seguida, colete os dois rins. Cortar o rim esquerdo longitudinalmente e o rim direito como secção transversal. Por fim, colete toda a extensão do intestino delgado e grosso.
Para dividir os segmentos do intestino delgado em seções de comprimento igual, dobre o intestino delgado em forma de Z, onde a linha superior é o duodeno, a linha do meio é o jejuno e a linha inferior é o íleo. A parte restante do intestino é o cólon. Lave o lúmen dos segmentos intestinais com soro fisiológico usando uma seringa de 10 mililitros afixada com um cateter angiocateter de calibre 20.
Em seguida, corte o comprimento dos intestinos usando uma tesoura microdissecante e coloque cada segmento intestinal plano com o lado luminal voltado para cima. Usando uma seringa de três mililitros afixada com uma agulha de calibre 27, aplique generosamente formalina tamponada a 10% gota a gota para revestir toda a extensão da mucosa. Em seguida, enrole cada segmento circunferencialmente em torno de um palito, garantindo que a porção proximal forme a parte interna do rolo e o lúmen fique voltado para dentro.
Depois de rolar, o intestino deve parecer um rolo suíço. Coloque a espiral do rolo suíço individual virada para cima dentro das de tecido rotuladas separadamente. Finalmente, coloque os tecidos em frascos rotulados cheios de formalina tamponada a 10% para fixá-los à temperatura ambiente.
Após a RI intestinal, a coloração H&E do jejuno e íleo dos camundongos do grupo sham mostrou vilosidades longas e finas, sem distorção. Já os cortes dos camundongos do grupo IRI exibiram áreas de necrose e hemorragia com embotamento e distorção das vilosidades restantes. Além disso, o dano microscópico aos três segmentos do intestino delgado dos animais submetidos à IRI foi significativamente aumentado em comparação com aqueles submetidos à laparotomia simulada.
