まず、マスク、ヘアカバー、清潔な白衣またはスクラブを着用します。次に、麻酔をかけたマウスを手術部位から離れた清潔な表面に置き、1.5%イソフルランと21%の酸素を送達するノーズコーンを取り付けます。次に、ブプレノルフィンを背頸部胸部に皮下注射します。
また、閉塞期間中の血栓形成を防ぐために、ヘパリンを腹腔内に注射します。.角膜の損傷を防ぐために眼科用軟膏を目に塗り、バリカンを使用して腹側腹部から脱毛します。マウスを手術部位の温水ブランケットに移動します。
ここでも、イソフルランを送達するノーズコーンを取り付けます。次に、マウスを背臥位に置き、手足をサージカルテープでテーブルに固定します。げっ歯類専用の直腸体温計を使用して動物の体温を監視します。
腹部を完全に消毒した後、つま先をつまむテストを実行して、動物が完全に麻酔されていることを確認します。最後に、滅菌手袋を着用し、手術部位を無菌的にドレープします。まず、15番のメスの刃を使用して、皮膚に3〜5センチの腹側正中線腹部切開を行います。
皮膚の端の0.5センチメートルを下にある筋膜から離して、後でホッチキスを配置できるようにします。次に、バネ仕掛けのマイクロハサミを使用して線形アルバに沿って腹壁を切開し、リトラクターを配置します。温かい滅菌生理食塩水で湿らせた滅菌ガーゼパッドを手術部位に置きます。
腹腔から小腸を取り除きます。頭蓋側と動物の左側にひっくり返し、湿らせたパッドの上に置きます。乾燥を防ぐために、別の湿らせたガーゼパッドを組織の上に置きます。
腹側から下大静脈、腹側、下側、腹側、腹側、下周囲の結合組織から離して解剖します。腹部大動脈から分岐するSMAの基部に沿って非外傷性微小血管クリップを配置します。
ピンクから淡い白への色の変化に注意して、小腸の虚血を確認します。虚血期間中、内臓を腹腔内の元の位置に戻します。リトラクターを取り外し、切開部を湿らせたガーゼで覆います。
虚血が45分続いた後、閉塞クリップを取り外します。腸間膜の脈動と紅潮した色を観察することにより、血流の回復を確認します。適切な水分補給を維持するために、温かい滅菌生理食塩水を腹腔内に塗布します。.
次に、6-0ポリグラクチン910縫合糸で腹筋を閉じます。痛みを和らげるために、筋肉切開線に沿ってブピバカインを局所的に投与します。.外科用ステープルまたは創傷クリップで皮膚を閉じます。
マウスを循環水ブランケットの上の暖かいチャンバーに戻します。マウスを90分間回復させ、痛みや苦痛の兆候がないかマウスを監視します。人道的な安楽死を行った後、左側葉、左正中葉、右正中葉など、肝葉などの目的の組織を採取します。
次に、両方の腎臓を採取します。左の腎臓を縦に切り、右の腎臓を断面として切ります。最後に、小腸と大腸の全長を収集します。
小腸セグメントを同じ長さのセクションに分割するには、小腸をZ字型に折り、上の線が十二指腸、中央の線が空腸、下の線が回腸になります。腸の残りの部分は結腸です。20ゲージの血管カテーテルを装着した10ミリリットルの注射器を使用して、腸セグメントの内腔を生理食塩水で洗い流します。
次に、マイクロ解剖ハサミを使用して腸の長さを切り取り、内腔側を上にして各腸セグメントを平らに置きます。27ゲージの針を装着した3ミリリットルの注射器を使用して、10%緩衝ホルマリンを滴下し、粘膜の全長をコーティングします。次に、つまようじの周りを各セグメントを円周に沿って転がし、近位部分がロールの内側部分を形成し、内腔が内側を向くようにします。
ローリング後、腸はスイスロールのように見えるはずです。個々のスイスロールのらせん状の面を上にして、別のラベルの付いた組織カセット内に置きます。最後に、10%緩衝ホルマリンで満たされた標識バイアルに組織を入れ、室温で固定します。
腸管IRI後、偽群のマウスの空腸および回腸のH&E染色では、歪みのない細長い絨毛が見られました。一方、IRI群のマウスの切片は、壊死と出血の領域を示し、残りの絨毛の鈍化と歪みを示しました。さらに、IRIを受けた動物の3つの小腸セグメントすべてに対する微視的損傷は、偽開腹術を受けた動物と比較して有意に増加しました。
