Начните с того, что наденьте маску, чехол для волос и чистый лабораторный халат или скрабы. Затем поместите мышь под наркозом на чистую поверхность, отделенную от области операции, и установите на нее носовой конус, доставляющий 1,5% изофлуран с 21% кислородом. Затем вводят бупренорфин подкожно в дорсальную шейно-грудную область.
Также вводят гепарин внутрибрюшинно, чтобы предотвратить тромбообразование в период окклюзии. Нанесите офтальмологическую мазь на глаза, чтобы предотвратить повреждение роговицы, и удалите волосы с брюшной полости с помощью машинок для стрижки. Переместите мышь на одеяло с подогревом воды в зоне операции.
Опять же, установите на него носовой обтекатель, доставляющий изофлуран. Далее расположите мышь в спинном положении лежа и закрепите конечности на столе хирургической лентой. Контролируйте температуру тела животного с помощью ректального термометра, специфичного для грызунов.
После тщательной дезинфекции брюшной полости проведите тест на защемление пальцев ног, чтобы убедиться, что животное полностью обезболино. Наконец, наденьте стерильные перчатки и асептически накройте место операции. Сначала сделайте трех-пятисантиметровый надрез брюшной полости на коже лезвием скальпеля под номером 15.
Отделите 0,5 сантиметра края кожи от подлежащей мышечной фасции, чтобы позже можно было установить скобу. Затем продолжайте разрез через брюшную стенку по линейной альбе с помощью подпружиненных микроножниц и установите ретрактор. Положите стерильные марлевые салфетки, смоченные теплым стерильным физиологическим раствором, вокруг операционного поля.
Удалить тонкую кишку из брюшной полости. Переверните его краниально и влево от животного и положите на увлажненные подушечки. Положите на салфетки еще одну увлажненную марлевую салфетку, чтобы предотвратить высыхание.
Найдите верхнюю брыжеечную артерию, или СМА, вентрально от нижней полой вены, каудально от чревной артерии и краниально от почечной артерии. Отделите его подальше от окружающей соединительной ткани. Установите атравматический микрососудистый зажим вдоль основания СМА, где он ответвляется от брюшной аорты.
Проверьте ишемию тонкой кишки, отметив изменение цвета от розового до бледно-белого. Вернуть внутренние органы в исходное положение внутри брюшной полости на время ишемического периода. Снимите ретрактор и накройте разрез влажной марлей.
После 45-минутного периода ишемии снимите окклюзионный зажим. Проверьте восстановление кровотока, наблюдая пульсацию брыжейки и покрасневший цвет. Нанесите теплый стерильный физиологический раствор внутрибрюшинно, чтобы поддерживать надлежащую гидратацию.
Затем закройте мышцы живота швом 6-0 полиглактин 910. Вводите бупивакаин местно вдоль линии разреза мышцы для облегчения боли. Закройте кожу хирургическими скобами или зажимами для ран.
Верните мышь в теплую камеру на одеяло с циркуляцией воды. Дайте мыши восстановиться в течение 90 минут и следите за ней на предмет признаков боли или стресса. После проведения гуманной эвтаназии соберите желаемые ткани, такие как доли печени, включая левую латеральную, левую срединную и правую срединные доли.
Затем соберите обе почки. Левую почку разрежьте продольно, а правую почку в поперечном сечении. Наконец, соберите по всей длине тонкую и толстую кишку.
Чтобы разделить сегменты тонкой кишки на участки одинаковой длины, сложите тонкую кишку в Z-образную форму, где верхняя линия — двенадцатиперстная кишка, средняя — тощая кишка, а нижняя — подвздошная кишка. Оставшаяся часть кишечника – это толстая кишка. Промыть просвет сегментов кишечника физиологическим раствором с помощью 10-миллилитрового шприца, прикрепленного к ангиокатетёру 20-го калибра.
Затем отрежьте длину кишечника с помощью ножниц для микропрепарирования и положите каждый сегмент кишечника плашмя просветной стороной вверх. С помощью трехмиллилитрового шприца, прикрепленного к игле 27-го калибра, обильно нанесите 10% буферный формалин по каплям, чтобы покрыть слизистую оболочку по всей длине. Затем прокатайте каждый сегмент по окружности вокруг зубочистки, убедившись, что проксимальная часть образует внутреннюю часть рулона, а просвет обращен внутрь.
После скатывания кишка должна выглядеть как швейцарский рулет. Поместите спираль отдельного швейцарского рулета лицевой стороной вверх внутрь отдельных кассет для салфеток с этикетками. Наконец, поместите салфетки в пробирки с этикетками, наполненные 10%-ным буферным формалином, чтобы зафиксировать их при комнатной температуре.
После кишечного ИРИ, H&E окрашивания тощей и подвздошной кишки у мышей в фиктивной группе выявлены длинные и тонкие ворсинки без искажений. В то время как на срезах мышей в группе IRI были обнаружены участки некроза и кровоизлияния с притуплением и деформацией оставшихся ворсинок. Кроме того, микроскопические повреждения всех трех сегментов тонкой кишки у животных, перенесших ИРИ, были значительно увеличены по сравнению с теми, которым была проведена фиктивная лапаротомия.
