氯化铁诱导的动脉血栓形成和用于3D电子显微镜分析的样本采集

使用这种方法，可以确定血小板和止血系统的哪些成分对血栓形成很重要。此外，该方法可以确定血栓生长和结构如何在细胞水平上受到影响。该技术的主要优点是它允许在结构水平上研究血栓形成的许多阶段的可重复方法。

刚接触这种技术的人应该避免过度处理手术区域的组织。这可能导致出血，并使颈动脉的识别过于复杂。暴露颈动脉后，通过松散地包围两个尺寸为 0.1 毫米的手术线之间的区域来标记损伤部位。

将探头放在下线远端动脉下方。将塑料片插入两条线之间的动脉下方，以标记氯化铁损伤部位。在进行损伤之前进行流量测量，以注意基础血流。

通过将氯化铁浸泡的滤纸放在动脉上三分钟来进行损伤。三分钟后取下滤纸，以防止不同程度的伤害，并便于探头进行流量计数。在损伤部位添加生理盐水以去除多余的残留氯化铁。

监控流量读数。当流量降至初始值的 50% 以下时，取下探头。快速擦干该区域并添加固定剂以在外部固定损伤区域。

接下来，立即用镊子握住损伤区域附近的动脉。在下螺纹的下游和上螺纹的上游切割。将组织以与收集的方向相同的方向放在塑料组织培养皿上，并加入几滴固定剂。

使用手术刀清洁动脉周围的多余组织。确保通过水平切割一端和另一端逐渐变细或倾斜来记录血流的方向。将样品在室温下放入固定剂中一小时，然后将样品储存在4摄氏度的1%多聚甲醛中，直到将其送入湿冰进行电子显微镜分析。

数据被绘制为Kaplan-Meier生存曲线，一个带有条形图的点图，显示血流停止或实验终止时的最终血流，或作为折线图。在某些情况下，血流量在逐渐减少几分钟后突然增加，表明正在生长的血栓部分脱落，被认为是栓塞事件。使用这种方法也研究了闭塞性血栓形态。

在血栓形成过程中及时收集样本是最重要的一步，因为该过程的延迟可能会导致对我们的结构分析的误解。