Trombosis arterial inducida por cloruro férrico y recolección de muestras para análisis de microscopía electrónica 3D

Con este método, se puede determinar qué componentes de las plaquetas y el sistema hemostático son importantes para la trombosis. Además, este método puede determinar cómo el crecimiento y la arquitectura del trombo se ven afectados a nivel celular. La principal ventaja de esta técnica es que permite una forma reproducible de estudiar muchas etapas de la trombosis a nivel estructural.

Una persona nueva en esta técnica debe evitar el manejo excesivo del tejido en el área quirúrgica. Esto puede provocar sangrado y puede complicar demasiado la identificación de la arteria carótida. Comience a marcar el sitio de la lesión después de exponer la arteria carótida rodeando libremente la región entre dos hilos quirúrgicos que tienen un tamaño de 0.1 milímetros.

Coloque la sonda debajo de la arteria distal desde el hilo inferior. Inserte la pieza de plástico debajo de la arteria entre los dos hilos para marcar el sitio para detectar lesiones por cloruro de hierro. Tome medidas de flujo antes de realizar una lesión para observar el flujo basal.

Realice la lesión colocando papel de filtro empapado en cloruro de hierro en la arteria durante tres minutos. Retire el papel de filtro después de tres minutos para evitar la extensión variable de la lesión y para facilitar el conteo de flujo por la sonda. Agregue solución salina en el sitio de la lesión para eliminar cualquier exceso de cloruro de hierro residual.

Monitoree la lectura del flujo. Cuando el flujo caiga por debajo del 50% del valor inicial, retire la sonda. Seque rápidamente el área y agregue el fijador para fijar el área de la lesión externamente.

Luego, sostenga rápidamente la arteria cerca del área de la lesión con fórceps. Cortar aguas abajo de la rosca inferior y aguas arriba de la rosca superior. Coloque el pañuelo en el plato de cultivo de tejido plástico en la misma orientación en que se recolectó y agregue unas gotas del fijador.

Con un bisturí, limpie el tejido adicional alrededor de la arteria. Asegúrese de registrar la orientación del flujo sanguíneo cortando un extremo horizontalmente y el otro estrecho u oblicuo. Coloque la muestra en fijador durante una hora a temperatura ambiente, luego almacene la muestra en paraformaldehído al 1% a 4 grados centígrados hasta enviarla al hielo húmedo para el análisis de microscopía electrónica.

Los datos se trazaron como una curva de supervivencia de Kaplan-Meier, un diagrama de puntos con barras que muestran el flujo sanguíneo terminal en el momento del cese del flujo sanguíneo o la terminación de un experimento, o como un gráfico de líneas. El flujo sanguíneo aumentó repentinamente en algunos casos después de una disminución gradual durante unos minutos, lo que indica un desprendimiento parcial del trombo en crecimiento y se consideró un evento de embolización. La morfología del trombo oclusivo también se estudió utilizando este método.

La pronta recolección de la muestra durante el proceso de trombosis es el paso más importante, ya que el retraso en este proceso puede llevar a una mala interpretación de nuestro análisis estructural.