염화제이철 유발 동맥 혈전증 및 3D 전자 현미경 분석을 위한 시료 수집

이 방법을 사용하면 혈소판과 지혈 시스템의 어떤 성분이 혈전증에 중요한지 결정할 수 있습니다. 또한 이 방법은 혈전 성장과 구조가 세포 수준에서 어떻게 영향을 받는지 결정할 수 있습니다. 이 기술의 가장 큰 장점은 구조적 수준에서 혈전증의 여러 단계를 재현 가능한 방법으로 연구 할 수 있다는 것입니다.

이 기술을 처음 접하는 사람은 수술 부위의 조직을 과도하게 취급하지 않아야 합니다. 이것은 출혈로 이어질 수 있으며 경동맥의 식별을 지나치게 복잡하게 만들 수 있습니다. 경동맥을 노출시킨 후 0.1mm 크기의 두 수술실 사이의 영역을 느슨하게 둘러싸서 손상 부위를 표시하기 시작합니다.

프로브를 아래쪽 나사산에서 말단 동맥 아래에 놓습니다. 두 나사산 사이의 동맥 아래에 플라스틱 조각을 삽입하여 염화철 손상 부위를 표시합니다. 부상을 입기 전에 유량을 측정하여 기초 유량을 기록하십시오.

염화철에 적신 여과지를 동맥에 3 분 동안 올려 놓아 부상을 입으십시오. 3분 후에 여과지를 제거하여 다양한 정도의 부상을 방지하고 프로브에 의한 유량 계산을 용이하게 합니다. 부상 부위에 식염수를 추가하여 과도한 잔류 염화철을 제거합니다.

흐름 판독값을 모니터링합니다. 유량이 초기 값의 50% 미만으로 떨어지면 프로브를 제거합니다. 해당 부위를 빠르게 건조시키고 고정제를 첨가하여 부상 부위를 외부에 고정합니다.

다음으로, 집게로 부상 부위 근처의 동맥을 즉시 잡으십시오. 하부 실의 하류와 상부 실의 상류를 자릅니다. 플라스틱 조직 배양 접시에 조직을 수집 된 방향과 동일한 방향으로 놓고 고정액 몇 방울을 첨가하십시오.

메스를 사용하여 동맥 주변의 여분의 조직을 청소하십시오. 한쪽 끝을 수평으로 자르고 다른 쪽 끝을 가늘어지거나 비스듬히 절단하여 혈류의 방향을 기록하십시오. 샘플을 실온에서 1시간 동안 고정액에 넣은 다음 전자 현미경 분석을 위해 젖은 얼음으로 보낼 때까지 섭씨 4도에서 1% 파라포름알데히드에 샘플을 저장합니다.

데이터는 Kaplan-Meier 생존 곡선, 혈류 중단 또는 실험 종료 시 말단 혈류를 보여주는 막대가 있는 도트 플롯 또는 선 그래프로 표시되었습니다. 혈류는 성장하는 혈전의 부분적인 흘림을 나타내는 몇 분 동안 점진적으로 감소한 후 어떤 경우에는 갑자기 증가했으며 색전술 사건으로 간주되었습니다. 폐색 혈전 형태도 이 방법을 사용하여 연구되었습니다.

혈전증 과정에서 샘플을 신속하게 수집하는 것은 이 과정이 지연되면 구조 분석이 잘못 해석될 수 있기 때문에 가장 중요한 단계입니다.