塩化第二鉄誘発動脈血栓症および3D電子顕微鏡分析のためのサンプル収集

この方法では、血小板のどの成分と止血系が血栓症にとって重要であるかを判断できます。さらに、この方法は、血栓の成長と構造が細胞レベルでどのように影響を受けるかを決定することができます。この技術の主な利点は、構造レベルで血栓症の多くの段階を研究するための再現可能な方法を可能にすることです。

この技術に不慣れな人は、手術領域の組織を過剰に取り扱うことを避ける必要があります。これは出血につながる可能性があり、頸動脈の識別を過度に複雑にする可能性があります。頸動脈を露出させた後、0.1ミリメートルのサイズを有する2本の外科用糸の間の領域を緩く囲むことによって損傷部位のマーキングを開始する。

プローブを下糸から遠位の動脈の下に置きます。2本の糸の間の動脈の下にプラスチック片を挿入して、塩化鉄損傷の部位をマークします。怪我をする前に流量を測定して、基礎の流れに注意してください。

塩化鉄に浸したろ紙を動脈に3分間置いて怪我をします。怪我の程度が変動するのを防ぎ、プローブによる流量カウントを容易にするために、3分後にろ紙を取り除きます。損傷部位に生理食塩水を追加して、余分な残留塩化鉄を取り除きます。

フローの読み取り値を監視します。流量が初期値の50%を下回ったら、プローブを取り外します。その領域をすばやく乾かし、固定剤を追加して損傷領域を外部に固定します。

次に、速やかに損傷部位近くの動脈を鉗子で保持します。下ねじの下流と上ねじの上流をカットします。組織を採取したのと同じ向きでプラスチック組織培養皿に置き、固定液を数滴加えます。

メスを使用して、動脈の周りの余分な組織をきれいにします。一方の端を水平に切断し、もう一方の端を先細りまたは斜めに切断することにより、血流の向きを確実に記録します。サンプルを室温で1時間固定液に入れ、電子顕微鏡分析のために湿った氷に送るまで、摂氏4度の1%パラホルムアルデヒドでサンプルを保存します。

データは、Kaplan-Meier生存曲線、血流の停止時または実験終了時の終末血流を示すバー付きのドットプロット、または折れ線グラフとしてプロットされました。血流は、成長している血栓の部分的な脱落を示す数分間の漸進的な減少に続いて突然増加し、塞栓術イベントと見なされました。閉塞性血栓の形態もこの方法を用いて研究した。

血栓症プロセス中のサンプルの迅速な収集は、このプロセスの遅延が構造分析の誤解につながる可能性があるため、最も重要なステップです。