Eisenchlorid-induzierte arterielle Thrombose und Probenentnahme für die 3D-Elektronenmikroskopie-Analyse

Mit dieser Methode kann festgestellt werden, welche Bestandteile der Blutplättchen und des hämostatischen Systems für die Thrombose wichtig sind. Darüber hinaus kann mit dieser Methode bestimmt werden, wie das Wachstum und die Architektur des Thrombus auf zellulärer Ebene beeinflusst werden. Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass sie eine reproduzierbare Methode zur Untersuchung vieler Thrombosestadien auf struktureller Ebene ermöglicht.

Eine Person, die mit dieser Technik noch nicht vertraut ist, sollte eine übermäßige Handhabung des Gewebes im Operationsbereich vermeiden. Dies kann zu Blutungen führen und die Identifizierung der Halsschlagader übermäßig erschweren. Beginnen Sie mit der Markierung der Verletzungsstelle, nachdem Sie die Halsschlagader freigelegt haben, indem Sie den Bereich zwischen zwei chirurgischen Fäden mit einer Größe von 0,1 Millimetern locker umschließen.

Platzieren Sie die Sonde distal vom unteren Gewinde unter die Arterie. Führen Sie das Plastikstück unter die Arterie zwischen den beiden Fäden, um die Stelle für eine Eisenchloridverletzung zu markieren. Führen Sie Durchflussmessungen durch, bevor Sie eine Verletzung durchführen, um den Basalfluss zu notieren.

Führen Sie die Verletzung durch, indem Sie drei Minuten lang mit Eisenchlorid getränktes Filterpapier auf die Arterie legen. Entfernen Sie das Filterpapier nach drei Minuten, um das unterschiedliche Ausmaß der Verletzung zu verhindern und die Durchflusszählung durch die Sonde zu erleichtern. Fügen Sie Kochsalzlösung an der Verletzungsstelle hinzu, um überschüssiges restliches Eisenchlorid zu entfernen.

Überwachen Sie den Durchflusswert. Wenn der Durchfluss unter 50 % des Ausgangswerts fällt, entfernen Sie die Sonde. Trocknen Sie den Bereich schnell ab und fügen Sie das Fixiermittel hinzu, um den Verletzungsbereich äußerlich zu fixieren.

Halten Sie anschließend die Arterie sofort mit einer Pinzette in der Nähe des Verletzungsbereichs fest. Schneiden Sie stromabwärts des Unterfadens und stromaufwärts des Oberfadens. Legen Sie das Gewebe in der gleichen Ausrichtung, in der es gesammelt wurde, auf die Kunststoff-Gewebekulturschale und fügen Sie ein paar Tropfen des Fixiermittels hinzu.

Reinigen Sie mit einem Skalpell das zusätzliche Gewebe um die Arterie. Stellen Sie sicher, dass Sie die Ausrichtung des Blutflusses aufzeichnen, indem Sie ein Ende horizontal und das andere Ende verjüngend oder schräg schneiden. Legen Sie die Probe für eine Stunde bei Raumtemperatur in ein Fixiermittel und lagern Sie die Probe dann in 1% Paraformaldehyd bei 4 Grad Celsius, bis sie zur elektronenmikroskopischen Analyse auf nasses Eis geschickt wird.

Die Daten wurden als Kaplan-Meier-Überlebenskurve, als Punktdiagramm mit Balken, die den terminalen Blutfluss zum Zeitpunkt der Beendigung des Blutflusses oder der Beendigung eines Experiments zeigen, oder als Liniendiagramm dargestellt. Der Blutfluss stieg in einigen Fällen plötzlich an, nachdem er einige Minuten lang allmählich abgenommen hatte, was auf eine teilweise Ablösung des wachsenden Thrombus hindeutete, und wurde als Embolisationsereignis angesehen. Auch die Morphologie des okklusiven Thrombus wurde mit dieser Methode untersucht.

Die zeitnahe Entnahme der Probe während des Thromboseprozesses ist der wichtigste Schritt, da eine Verzögerung dieses Prozesses zu Fehlinterpretationen unserer Strukturanalyse führen kann.