Trombose Arterial Induzida por Cloreto Férrico e Coleta de Amostras para Análise de Microscopia Eletrônica 3D

Com esse método, pode-se determinar quais componentes das plaquetas e do sistema hemostático são importantes para a trombose. Além disso, esse método pode determinar como o crescimento e a arquitetura do trombo são afetados em nível celular. A principal vantagem dessa técnica é que ela permite uma maneira reprodutível de estudar vários estágios da trombose em nível estrutural.

Uma pessoa nova nesta técnica deve evitar o manuseio excessivo do tecido na área cirúrgica. Isso pode levar a sangramento e pode complicar demais a identificação da artéria carótida. Comece a marcar o local da lesão após expor a artéria carótida, circundando vagamente a região entre dois fios cirúrgicos de tamanho 0,1 milímetro.

Coloque a sonda sob a artéria distal do fio inferior. Insira a peça plástica sob a artéria entre os dois fios para marcar o local da lesão de cloreto de ferro. Realizar medições de fluxo antes de realizar a lesão para observar o fluxo basal.

Realizar a lesão colocando papel de filtro embebido em cloreto de ferro na artéria por três minutos. Remova o papel de filtro após três minutos para evitar a extensão variável da lesão e facilitar a contagem de fluxo pela sonda. Adicione soro fisiológico no local da lesão para remover qualquer excesso de cloreto de ferro residual.

Monitore a leitura do fluxo. Quando o fluxo cair abaixo de 50% do valor inicial, remova o teste. Seque rapidamente a área e adicione o fixador para fixar a área da lesão externamente.

Em seguida, segure prontamente a artéria próxima à área da lesão com pinças. Corte a jusante da rosca inferior e a montante da linha superior. Coloque o tecido na placa de cultura de tecido plástico na mesma orientação em que foi coletado e adicione algumas gotas do fixador.

Usando um bisturi, limpe o tecido extra ao redor da artéria. Certifique-se de registrar a orientação do fluxo sanguíneo cortando uma extremidade horizontalmente e a outra afunilando ou oblíqua. Colocar a amostra no fixador durante uma hora à temperatura ambiente e, em seguida, armazenar a amostra em paraformaldeído a 1% a 4 graus Celsius até a enviar para gelo húmido para análise por microscopia electrónica.

Os dados foram plotados como uma curva de sobrevida de Kaplan-Meier, um gráfico de pontos com barras mostrando o fluxo sanguíneo terminal no momento da cessação do fluxo sanguíneo ou do término de um experimento, ou como um gráfico de linhas. O fluxo sanguíneo aumentou subitamente em alguns casos após uma diminuição gradual por alguns minutos, indicando excreção parcial do trombo em crescimento, e foi considerado um evento de embolização. A morfologia do trombo oclusivo também foi estudada por este método.

A pronta coleta da amostra durante o processo de trombose é o passo mais importante, uma vez que a demora nesse processo pode levar a interpretações errôneas de nossa análise estrutural.