Thrombose artérielle induite par le chlorure ferrique et prélèvement d’échantillons pour analyse en microscopie électronique 3D

Avec cette méthode, on peut déterminer quels composants des plaquettes et du système hémostatique sont importants pour la thrombose. De plus, cette méthode peut déterminer comment la croissance et l’architecture du thrombus sont affectées au niveau cellulaire. Le principal avantage de cette technique est qu’elle permet une manière reproductible d’étudier de nombreux stades de thrombose au niveau structurel.

Une personne novice dans cette technique devrait éviter de trop manipuler le tissu dans la zone chirurgicale. Cela peut entraîner des saignements et compliquer à l’excès l’identification de l’artère carotide. Commencez à marquer le site de la blessure après avoir exposé l’artère carotide en encerclant lâchement la région entre deux fils chirurgicaux d’une taille de 0,1 millimètre.

Placez la sonde sous l’artère distale du filetage inférieur. Insérez le morceau de plastique sous l’artère entre les deux fils pour marquer le site des dommages causés par le chlorure de fer. Prenez des mesures de débit avant d’effectuer une blessure pour noter l’écoulement basal.

Effectuez la blessure en plaçant du papier filtre imbibé de chlorure de fer sur l’artère pendant trois minutes. Retirez le papier filtre après trois minutes pour éviter l’étendue variable de la blessure et faciliter le comptage du débit par la sonde. Ajouter une solution saline sur le site de la blessure pour éliminer tout excès de chlorure de fer résiduel.

Surveillez la lecture du flux. Lorsque le débit tombe en dessous de 50 % de la valeur initiale, retirez la sonde. Séchez rapidement la zone et ajoutez le fixateur pour fixer la zone de blessure à l’extérieur.

Ensuite, tenez rapidement l’artère près de la zone de blessure avec des forceps. Couper en aval du filetage inférieur et en amont du fil supérieur. Placez le tissu sur la boîte de culture de tissus en plastique dans la même orientation que celle qui a été recueillie et ajoutez quelques gouttes du fixateur.

À l’aide d’un scalpel, nettoyez le tissu supplémentaire autour de l’artère. Assurez-vous d’enregistrer l’orientation du flux sanguin en coupant une extrémité horizontalement et l’autre effilée ou oblique. Placer l’échantillon dans un fixateur pendant une heure à température ambiante, puis stocker l’échantillon dans du paraformaldéhyde à 1% à 4 degrés Celsius jusqu’à ce qu’il soit envoyé dans de la glace humide pour analyse par microscopie électronique.

Les données ont été tracées sous la forme d’une courbe de survie de Kaplan-Meier, un diagramme à points avec des barres montrant le flux sanguin terminal au moment de l’arrêt du flux sanguin ou de la fin d’une expérience, ou sous forme de graphique linéaire. Le flux sanguin a augmenté soudainement dans certains cas après une diminution progressive pendant quelques minutes, indiquant une excrétion partielle du thrombus en croissance et a été considéré comme un événement d’embolisation. La morphologie du thrombus occlusif a également été étudiée à l’aide de cette méthode.

Le prélèvement rapide de l’échantillon pendant le processus de thrombose est l’étape la plus importante, car un retard dans ce processus peut entraîner une mauvaise interprétation de notre analyse structurelle.