使用抗体依赖性细胞介导的细胞毒性报告基因生物测定评估癌细胞中抗体依赖性、细胞介导的细胞毒性

众所周知，抗体依赖性、细胞介导的细胞毒性是抗体发挥免疫介导的某些作用的重要机制。因此，我们想找到一种更好的方法来测试抗体药物在癌症治疗中的疗效，即使用 ADCCSA。该协议快速而简单。

通过使用简单的混合和读取方案，我们可以在一天内获得结果，从而加快研究速度。通过使用 ADCC 生物测定，我们可以更准确地对治疗性抗体药物进行质量筛选。该检测的信噪比很高，这有助于准确评估治疗性抗体。

首先，培养目标 T 细胞 BHT 101 和 SW 1736 细胞，直到它们在 T75 培养瓶中达到 80% 汇合。去除培养基后，用 PBS 洗涤细胞一次，并与 1 毫升非酶细胞解离缓冲液一起孵育 5 分钟。添加 PBS 以终止反应。

将细胞以 135G 离心 5 分钟，然后加入 5 mL PBS。测定细胞计数，并以每孔 15， 000 个细胞的密度接种在 96 孔、底部透明、平坦的白色聚苯乙烯微孔板中。首先，准备用于测定的靶 T 细胞 BHT 101 和 SW 1736 细胞。

然后准备西妥昔单抗以与表皮生长因子受体结合，并准备贝伐珠单抗作为阴性对照。为了制备 ADCC 生物测定缓冲液，将 1.4 mL 低免疫球蛋白 G 血清加入 33.6 mL RPMI 1640 中，如试剂盒中提供。使用缓冲液稀释抗体，制备 400 μL 三种不同浓度的每种抗体。

在 37 摄氏度的水浴中预热 ADCC 生物测定缓冲液至少 30 分钟。从零下 80 摄氏度的冷藏中取出 ADCC 生物测定效应细胞，并将它们置于 37 摄氏度的水浴中约 2 至 3 分钟。在解冻过程中轻轻摇动并目视检查样品瓶，不要将其倒置。

然后将 630 μL 效应细胞转移到含有 3.6 mLADCCSA 缓冲液的 15 mL管中。轻轻倒置试管两次，使细胞与缓冲液混合。首先，准备靶细胞、效应细胞和 ADCC 测定所需的抗体。

孵育过夜后，从靶细胞中取出培养基，加入 25 μL ADCC 生物酸缓冲液，然后向适当的孔中加入 25 μL 拮抗剂。然后将每孔 25 微升 ADCC 生物测定缓冲液中的 75， 000 个缺陷细胞加入含有靶细胞的 96 孔微孔板中，并在 37 摄氏度下孵育板 6 小时。要制备荧光素酶检测试剂，请将荧光素酶检测缓冲液添加到冻干的荧光素酶检测底物中。

然后向含有靶细胞、抗体和效应细胞的板的每个孔中加入 75 μL 荧光素酶检测试剂，并在室温下孵育板 30 分钟。使用光度计测量每个孔中的发光信号，以提供 ADCC 活性的定量读数。对于数据分析，使用公式计算折叠诱导。

西妥昔单抗在所有测试浓度下诱导较高的 ADCC 活性，但在 BHT 101 和 SW 11736 细胞系中未检测到贝伐珠单抗的 ADCC 活性，证明了靶向 EGFR 细胞外膜抗原对两种细胞系的 ADCC 效应。