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Method Article
Modelle der spontanen metastasiertem Nierenzellkarzinom (RCC) den Krankheitsverlauf kann für die Bewertung Behandlungen in einer klinisch relevanten Einstellung verwendet werden. Dieses Protokoll zeigt verschiedene Verfahren für orthotope Nierentumorzellimplantation, richtige Nephrektomie und schließlich skizziert eine Obduktion Führer für visuelle und Biolumineszenz-Scoring von metastasierendem Belastung und Lokalisierung.
Eine der wichtigsten Herausforderungen für die verbesserte Prüfung von neuen experimentellen Therapie beim Nierenzellkarzinom (RCC) ist die Entwicklung von Modellen, die treu zu rekapitulieren Früh-und Spätstadium metastasierendem Krankheitsprogression. Typische Tumorimplantation Modelle verwenden oder Eileiter orthotopen Primärtumorimplantation, aber nur wenige sind spontane systemische Metastasen, die den klinischen Umgebung nachahmt. Dieses Protokoll beschreibt die wichtigsten Schritte zur Entwicklung RCC Fortschreiten der Krankheit ähnlich inszeniert für die Patienten. Zuerst, verwendet es eine stark metastasierenden Maus-Tumor-Zelllinie in einem syngenen Modell orthotope Tumorzellimplantation zu zeigen. Zu den Methoden gehören oberflächlich und interne Implantation in den Kapselunter Raum mit Zellen kombiniert mit Matrigel, um ein Auslaufen und frühen Ausbreitung zu verhindern. Weiter ist das Verfahren zur Entfernung der tumortragenden Niere (Nephrektomie) beschreibt, mit kritischen prä-und postoperative Versorgung der Maus. Schließlich beschreibt die notwendigen Schritte, um sie zu überwachen und zu bewertenMikro-und Makro-metastatischen Progression der Erkrankung, einschließlich Biolumineszenz-Bildgebung sowie eine detaillierte visuelle Obduktion Leitfaden für systemische Erkrankung Verteilung punkten. Das Ziel dieser Protokollbeschreibung ist es, die weit verbreitete Verwendung von klinisch relevanten metastasierendem RCC Modelle, um die Vorhersagewert von Tests zukünftige therapeutische Verbesserung zu erleichtern.
Die Hauptursache der Sterblichkeit bei Patienten mit Nierenzellkarzinom (RCC) ist eine systemische Metastasen, die typischerweise auftritt, nach chirurgischer Entfernung eines Primärtumors wächst in der Niere. Sehr wenige präklinischen Tumormodellen Auswertung experimenteller Therapeutik in Mäusen sind jedoch Metastasen, und noch weniger treu die klinischen Phasen der lokalisierten Wachstum, Chirurgie und spontane Mikro-Metastasen Initiierung und Progression 1-3 rekapitulieren. Diese Lücke im Test hat sich bei der Bewertung neuer Therapien wie manchmal auffällig Anti-Tumor-Wirkung in Tiermodellen gesehen, nicht immer in ähnlich erfolgreiche Behandlung von Patienten 4 setzten immer wichtiger. Solche Unterschiede in den Ergebnisse können von Differentialdrogenwirkungsgrade zwischen lokalisierten oder Eileiter orthotopen Primärtumormodellen und späten Stadium Metastasen 5-7 einzudämmen. Im Fall des RCC, haben nur wenige Studien beschäftigt etabliert einenimal-Protokolle, die spontan wiederkehrende Krankheit, die Patienten, die imitiert haben typischerweise tumortragenden Nieren hatte ganz oder teilweise entfernt, 2,3 enthalten. Die Gründe für diesen Mangel in Maus-Modelltests variieren. Erstens gibt es die hohe Tier Kosten und der inhärenten Variabilität der Tumorzellenauswahl und metastatischen Potential. Zum Beispiel, menschliche Nierenzelllinien sind in der Regel selten metastasieren und müssen über mehrere Runden orthotopen primären und metastatischen Implantation Auswahl an Varianten, die konsequent zu verbreiten und bilden entfernten Läsionen ableiten gewählt werden (siehe Beschreibung eines solchen menschlichen Zelllinie Ableitung 8-10) . Umgekehrt, bei immunkompetenten Zellen der Maus Modelle neigen dazu, aggressiv zu verhalten und geringe Zellzahlen müssen mit Matrigel sofortige systemische Ausbreitung 3 reduzieren injiziert werden. Zweitens, technische Schwierigkeiten bei der Durchführung richtige Implantation, chirurgische Resektion (Nephrektomie) und Tracking (und Quantifizierung) spontane metastatic Wachstum kann eine Herausforderung sein und mehrere kritische Variablen müssen berücksichtigen, wenn diese Technik verwenden (siehe Diskussion für Details). Der Zweck dieses Protokolls ist es, die wesentlichen Schritte (wie auch mögliche Fallstricke) des orthotopen Implantation Resektion (Nephrektomie) und die Überwachung der spontanen metastasierendem RCC Krankheit zu beschreiben und eine Leitlinie für standardisierte (und verbreitet) bieten unter den wissenschaftlichen Labors nutzen beurteilen, dass die Wirksamkeit der experimentellen Therapeutika.
1. Orthotopische Nierentumorimplantation
2. Nephrektomie / Primärtumorentfernung
3. Überwachung Metastatische Progression und Lokalisierung bei Endpoint
1A zeigt eine schematische umreißt die Verfahren in diesem Protokoll Zusammenfassung aufgeführt. Mehrere wichtige Faktoren muss für jede Stufe. Zum Beispiel in Schritt 1 zeigt zwei Verfahren zur Unterkapsel Implantation der Tumorzellen in der Niere. Tumorzellen können in den Sub-Kapsel-Raum mit einem kleinen weißen Blase Bestätigung der lokalisierten Platzierung der Zellen mit Leckage durch sorgfältige Entfernung der Nadel und Abtupfen überschüssigen austretende Flüssigkeit (Abbildung ...
Der Zweck dieses Protokolls ist es, klinisch relevante spontane Metastasen beurteilen mit einem syngenen Tumor-Mausmodell der Implantation / Resektion Techniken zu beschreiben. Derzeit ist die Mehrheit der präklinischen Studien, die neue experimentelle Therapien nicht enthalten Studie von Metastasen und nur wenige rekapitulieren die Phasen der Primärtumorwachstum, chirurgische Resektion, und eventuelle spontane Metastasierung. Bis heute gentechnisch veränderte Mausmodelle (GEMMS) erzeugt werden, um spontane Nierenzel...
Die Autoren haben nichts zu offenbaren.
Wir sind dankbar, dass das Labor von Dr. Robert S. Kerbel (University of Toronto, Sunnybrook Research Institute, Toronto, Kanada) für die technische Hilfe und Expertise in der Entwicklung dieses Verfahrens. Wir möchten auch Dr. Sandra Sexton und der Roswell Park Cancer Institute Institut für Labortier Ressourcen danken. Diese Arbeit wurde von einem preis vom Roswell Park Alliance Foundation (bis JMLE) unterstützt.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
DMEM-high glucose with Pyr. And L-Glutamine | Corning | 10-013-CV | |
FBS | Invitrogen | 10437-028 | |
0.25% Trypsin EDTA | Corning | 25-053-CL | |
1x DPBS without Calcium & Magnesium | Corning | 21-031-CV | |
Matrigel | BD Biosciences | 354234 | must be kept on ice |
Artifical tears-lubricant opthalmic ointment | Akorn Animal Health | 17478-162-35 | |
Pocket pro pet trimmer | Braintree scientific | CLP9931B | |
Alcohol swab | VWR | 326895 | |
Betadine solution swab | VWR | 67618-152-01 | |
MICRO DISSECTING sissors straight,blunt - 25 mm blades - 4.5" | Southpointe surgical | RS-5982 | |
Iris Forceps, serrated, curved, 10 cm long | Kent scientific | INS15915 | need two of these |
10 µl Hamilton syringe | Hamilton | 7635-01 | |
30 G, 45 degree, RN needle | Hamilton | 7803-07 | |
Sterile cotton tipped appicator | VWR | 10805-144 | |
High temperature cautery kit | Kent scientific | INS500392 | |
5-0 coated Vicryl, conventional cutting needle | Ethicon | J834 | |
Reflex clip applier for 7 mm clips | Kent scientific | INS500343 | |
Reflex clips, 7 mm, non-sterile | Kent scientific | INS500344 | |
Removing forceps, 12 cm long | Kent scientific | INS500347 | |
0.9% Sodium Chloride | Baxter Healthcare | 2B1322 | |
Buprenorphine 0.01 mg/ml | |||
25 G 5/8" needle | VWR | BD305122 | |
1 ml syringe w/out needle | VWR | BD309659 | |
D-Luciferin | Gold Bio technology | LUCK-1G |
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