Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.
Method Article
Модели спонтанного метастатическим почечно-клеточная карцинома (RCC) прогрессирования заболевания может быть использован для оценки процедуры в клинически значимых обстановке. Этот протокол демонстрирует различные процедуры для ортотопической имплантации почки опухолевых клеток, правильного нефрэктомии, и, наконец, излагается вскрытии руководство для визуального и биолюминесцентной скоринга метастатического бремени и локализации.
Один из ключевых вызовов для улучшения тестирования новых экспериментальной терапии в почечно-клеточной карциномы (РСС) является разработка моделей, которые добросовестно повторять прогрессирование ранней и поздней стадии метастатического заболевания. Типичные модели имплантации опухоли используют внематочной или ортотопической имплантации первичной опухоли, но мало включают в себя системную спонтанное метастазы, который имитирует клинических условиях. Этот протокол описывает ключевые шаги по развитию прогрессирование заболевания РСС стадии похожи на пациентов. Во-первых, он использует очень метастатического мыши линии клеток опухоли у сингенных модели, чтобы показать ортотопической имплантации опухолевых клеток. Методы включают поверхностную и внутреннюю имплантации в суб-капсульного пространства с клетками в сочетании с матригеле, чтобы предотвратить утечку и раннее распространение. Затем это описываются процедуры удаления несущей опухоль почки (нефрэктомии), с критическим пред-и пост-хирургической помощи мыши. Наконец, показывает шаги, необходимые для мониторинга и оценкимикро-и макро-метастатического прогрессирования заболевания, в том числе биолюминесцентной изображений, а дает подробное визуальное руководство вскрытии забить общее распределение заболевания. Цель этого описания протокола является содействие широкому использованию клинически значимых метастатических моделей РСС улучшить прогностическую ценность будущего терапевтического тестирования.
Основной причиной смертности у пациентов с почечно-клеточной карциномы (РСС) носит системный характер метастазы, что обычно происходит после хирургического удаления первичной опухоли, растущей в почках. Однако, очень немногие доклинические моделях опухолей оценке экспериментальной терапии у мышей включают метастазы, и еще меньше добросовестно повторять клинические этапы локализованной роста, хирургии, и спонтанной микро-метастатическим инициации и прогрессировании 1-3. Этот разрыв в тестировании становится все более важным в оценке новых методов лечения, как иногда поразительные эффекты противоопухолевые видели в моделях на животных не всегда переводятся на так же успешного лечения больных 4. Такие различия в результатах может быть связано с дифференциальных эффективностью наркотиков между локализованными внематочной или ортотопических первичных опухолевых моделях и поздней стадии метастазирования 5-7. В случае РСС, всего в нескольких исследованиях использовали созданапротоколы Нимал, которые включают спонтанную рецидив заболевания, что имитирует пациенты, которые, как правило, имели опухоли, несущие почки полностью или частично удалены 2,3. Причины этого недостатка в мыши модели контроля на разных. Во-первых, существует высокая стоимость животного и присуща вариабельность отбора опухолевых клеток и метастатическим потенциалом. Например, клеточных линиях почки человека, как правило, редко метастазируют, и должны быть выбраны в течение нескольких раундов ортотопического первичной имплантации и метастатическим отбора чтобы вывести варианты, которые последовательно распространения и образуют отдаленные поражения (см. описание такого человека выводе клеточной линии 8-10) . С другой стороны, клетки мыши в моделях иммунокомпетентных правило, ведут себя агрессивно, и низкие количества клеток должен быть введен с матригеле чтобы уменьшить немедленного системного распространения 3. Во-вторых, технические трудности в выполнении надлежащего имплантации, хирургической резекции (нефрэктомии), и отслеживания (и количественного) спонтанное metastatiрост с может быть сложным и несколько критических переменных нужно учитывать при использовании этого метода (см. Обсуждение Подробнее). Цель этого протокола заключается в описании основные шаги (а также потенциальных ловушек) ортотопического имплантации, резекции (нефрэктомия), а также мониторинг спонтанной метастатической болезни РСС и предложить руководство для стандартизированной (и более широкое распространение) использовать среди научных лабораторий что оценить эффективность экспериментальной терапии.
1. Ортотопическая почек имплантации опухоли
2. Нефрэктомия / Первичная удаления опухоли
3. Мониторинг Metastatic прогресс и локализация в конечной точке
Рисунок 1А показана схема с изложением изложенными в данной итогового протокола. Несколько важных факторов должны быть рассмотрены для каждого шага. Например, в шаге 1 показывает два способа суб-капсульного имплантации опухолевых клеток в почках. Опухолевые клетки могут быть ...
Цель этого протокола заключается в оценке клинически значимого спонтанного метастазы использовании сингенную модель мыши опухоли описать методы имплантации / резекции. В настоящее время большинство доклинических исследований по оценке новых Experimental Therapeutics не включают изучение мета?...
Авторы не имеют ничего раскрывать.
Мы благодарны лаборатории д-ра Роберта С. Кербель (Университет Торонто, Sunnybrook научно-исследовательского института, Торонто, Канада) за техническую помощь и опыт в развитии этой процедуры. Мы также хотели бы поблагодарить д-ра Сандра Секстон и Roswell Park институт рака отдела лабораторного животных ресурсов. Эта работа была поддержана награду от Розуэлл Парк Альянс Foundation (к JMLE).
Name | Company | Catalog Number | Comments |
DMEM-high glucose with Pyr. And L-Glutamine | Corning | 10-013-CV | |
FBS | Invitrogen | 10437-028 | |
0.25% Trypsin EDTA | Corning | 25-053-CL | |
1x DPBS without Calcium & Magnesium | Corning | 21-031-CV | |
Matrigel | BD Biosciences | 354234 | must be kept on ice |
Artifical tears-lubricant opthalmic ointment | Akorn Animal Health | 17478-162-35 | |
Pocket pro pet trimmer | Braintree scientific | CLP9931B | |
Alcohol swab | VWR | 326895 | |
Betadine solution swab | VWR | 67618-152-01 | |
MICRO DISSECTING sissors straight,blunt - 25 mm blades - 4.5" | Southpointe surgical | RS-5982 | |
Iris Forceps, serrated, curved, 10 cm long | Kent scientific | INS15915 | need two of these |
10 µl Hamilton syringe | Hamilton | 7635-01 | |
30 G, 45 degree, RN needle | Hamilton | 7803-07 | |
Sterile cotton tipped appicator | VWR | 10805-144 | |
High temperature cautery kit | Kent scientific | INS500392 | |
5-0 coated Vicryl, conventional cutting needle | Ethicon | J834 | |
Reflex clip applier for 7 mm clips | Kent scientific | INS500343 | |
Reflex clips, 7 mm, non-sterile | Kent scientific | INS500344 | |
Removing forceps, 12 cm long | Kent scientific | INS500347 | |
0.9% Sodium Chloride | Baxter Healthcare | 2B1322 | |
Buprenorphine 0.01 mg/ml | |||
25 G 5/8" needle | VWR | BD305122 | |
1 ml syringe w/out needle | VWR | BD309659 | |
D-Luciferin | Gold Bio technology | LUCK-1G |
Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи
Запросить разрешениеThis article has been published
Video Coming Soon
Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены