Modifizierter Most Probable Number Assay zur Quantifizierung von Salmonellen in rohen und küchenfertigen Hühnerprodukten

Zusammenfassung

Die genaue Quantifizierung von Salmonellen bei Geflügel in geringen Mengen ist eine aktuelle industrielle und regulatorische Herausforderung. Dieses Protokoll beschreibt einen MPN-Assay, der die Quantifizierung von Salmonellen in rohen und küchenfertigen Geflügelprodukten ermöglicht. Diese Methode ist schnell, empfindlich und entspricht den FSIS-Richtlinien, verbessert die Lebensmittelsicherheit und unterstützt die Bemühungen um die öffentliche Gesundheit.

Zusammenfassung

Salmonellen sind eine der Hauptursachen für lebensmittelbedingte Krankheiten in den Vereinigten Staaten, insbesondere bei Geflügelprodukten. Herkömmliche Methoden zum Nachweis von Salmonellen konzentrieren sich eher auf die Prävalenz als auf die Quantifizierung, was ihren Nutzen bei der Bewertung von Kontaminationsgraden und -risiken einschränkt. In dieser Studie wird ein neuartiger MPN-Assay (Most Likely Number) vorgestellt, der zur Quantifizierung von Salmonellen in küchenfertigen Geflügelprodukten wie z. B. Chicken Cordon Bleu entwickelt wurde. Bei der Methode wird die Geflügelprobe gewaschen, die Spülung durch Zentrifugation konzentriert und in einem 48-Well-Block seriell verdünnt. Der MPN-Assay ist in die LAMP-Methode (Loop-Mediated Isothermal Amplification) integriert, um eine empfindliche, genaue und schnelle Quantifizierung der Salmonellenkontamination innerhalb des gleichen Zeitrahmens wie bestehende FSIS-Protokolle (Food Safety and Inspection Service) zu ermöglichen. Die Ergebnisse zeigen eine starke lineare Korrelation zwischen den MPN-LAMP-Messungen und den theoretischen Impfwerten (R² = 0,933). Die Variabilität bei niedrigeren Konzentrationen verdeutlicht jedoch die Herausforderung beim genauen Nachweis von Salmonellen in diesen Konzentrationen, wobei die praktische untere Nachweisgrenze auf etwa 300 KBE/g geschätzt wird. Zu den möglichen Verfeinerungen zur Verbesserung der Anwendbarkeit des Protokolls gehören die Erhöhung der Probenmenge, um die Nachweisgrenze weiter zu verbessern, die Optimierung der Formulierungen von Anreicherungsmedien und die Ausweitung des molekularen Nachweises auf mehrere Salmonella-Serovare . Insgesamt stellt diese Studie ein praktisches Instrument für die Lebensmittelindustrie dar, das eine zuverlässige Quantifizierung der Salmonellenkontamination in Geflügelprodukten ermöglicht und so zu einer verbesserten Lebensmittelsicherheit und öffentlichen Gesundheit beiträgt.

Einleitung

Als eine der Hauptursachen für lebensmittelbedingte Krankheiten, Krankenhausaufenthalte und Todesfälle in den USA haben Salmonellen erhebliche Auswirkungen auf die öffentliche Gesundheit und die Wirtschaft. Die geschätzte wirtschaftliche Belastung des Erregers belief sich allein im Jahr 2013 auf 3,67 Milliarden US-Dollar¹. Obwohl die jüngsten Regulierungsinitiativen darauf abzielen, die Salmonellose bis 2030 um 25 % zu reduzieren², sind nach wie vor Lücken in den derzeitigen Erkennungs- und Eindämmungsstrategien offensichtlich, insbesondere bei der Abstimmung der Überwachung von Verarbeitungsbetrieben auf die Ergebnisse der öffentlichen Gesundheit³ .

Gefrorene küchenfertige Geflügelprodukte, die mit mehreren Salmonellenausbrüchen in Verbindung gebracht wurden, stellen ein erhebliches Problem für die öffentliche Gesundheit dar. Als Reaktion darauf stufte der Food Safety and Inspection Service (FSIS) Salmonellen als Verfälschungsmittel in diesen Produkten ein. Derzeit konzentriert sich das FSIS Microbiology Laboratory Guidebook (MLG) 4.15 ausschließlich auf die Bestimmung der Prävalenz von Salmonellen in Geflügelprodukten⁴. Gemäß dieser Richtlinie werden die gesammelten Proben 18-24 Stunden lang angereichert und dann mit dem Molecular Detection System (MDS) gescreent, das das Vorhandensein oder Fehlen von Salmonellen identifiziert, aber keinen Einblick in den Grad der Kontamination bietet. Dieser Ansatz ist zwar wertvoll für den Nachweis von Krankheitserregern, liefert aber keine quantitativen Informationen, die Lebensmittelverarbeitern helfen könnten, Kontaminationsrisiken genauer einzuschätzen und gezielte Korrekturmaßnahmen zu ergreifen.

In dieser Studie haben wir eine Methode entwickelt, um den Nachweis von mikrobiellen Krankheitserregern von der Prävalenz bis zur Quantifizierung zu erweitern. Es wurde für die nahtlose Integration in bestehende Prozesse zum Nachweis von Salmonellen in Geflügelprodukten mit minimaler Unterbrechung der aktuellen FSIS-Protokolle entwickelt. Anstatt einfach nur die Massenprobe anzureichern, beginnt die Methode mit dem Waschen der Geflügelprodukte mit Medien, die den aktuellen FSIS-Methoden entsprechen. Die Spülung wird dann in die erste Säule eines 48 tiefe Brunnenblocks verteilt. Serielle Verdünnungen werden über die verbleibenden fünf Säulen durchgeführt, und der Block wird 18-24 Stunden lang inkubiert, in Übereinstimmung mit dem MLG 4.15-Protokoll. Nach der Inkubation werden die Vertiefungen auf Salmonellen untersucht, und die Ergebnisse werden zur Berechnung der wahrscheinlichsten Zahl (MPN)^5,6 verwendet. Dieser Ansatz ermöglicht die Quantifizierung der Kontamination innerhalb des gleichen Zeitrahmens wie das derzeitige FSIS-Verfahren, was ihn zu einer praktischen Option sowohl für die Industrie als auch für den behördlichen Einsatz macht. Abbildung 1 zeigt ein Blockdiagramm, das den modifizierten MPN-Assay zusammenfasst. Die Abbildung umfasst Fotos, die in bestimmten Schritten aufgenommen wurden, den 48-Well-Block, der für die Verdünnung und das Wachstum von Replikaten verwendet wird, und die drei Techniken, die als Benchmarks zur Bewertung der wahrscheinlichsten Anzahl von Salmonellen in Hackfleisch verwendet werden. In der ersten Phase dieser Studie verwendeten wir bestrahltes Hackfleisch, um die Auswirkungen der Hintergrundmikroflora und die Unsicherheit der Messungen in Bezug auf das verifizierte Inokulum zu minimieren, bevor wir das Protokoll auf nicht bestrahlte Hühnerproben anwendeten.

Protokoll

HINWEIS: Alle Arbeiten im Zusammenhang mit diesem Protokoll sollten in einem Labor der Biosicherheitsstufe 2 (BSL-2) durchgeführt werden. Gegebenenfalls sollte dieses Protokoll in einer biologischen Sicherheitswerkbank (BSC) durchgeführt werden, um aseptische Bedingungen aufrechtzuerhalten und das Risiko einer Probenkontamination oder einer Exposition des Bedieners gegenüber mikrobiellen Krankheitserregern zu minimieren. Wenn Sie Proben außerhalb des BSC transportieren, verwenden Sie versiegelte Behälter, um die Integrität der Proben zu wahren und ein Verschütten im Falle eines versehentlichen Herunterfallens zu verhindern. Vorzugsweise sollten während des gesamten Verfahrens Einwegkomponenten verwendet werden, um die Möglichkeit einer Kreuzkontamination zu verringern. In Fällen, in denen Einwegartikel nicht möglich sind, stellen Sie sicher, dass alle Geräte und Materialien vor der Verwendung steril sind. Eine ordnungsgemäße Abfallbewirtschaftung ist von entscheidender Bedeutung. Alle verwendeten Einwegkomponenten sollten als biologisch gefährlicher Abfall entsorgt werden. Autoklavieren Sie wiederverwendbare Materialien vor der Wiederverwendung, um eine ordnungsgemäße Sterilisation und Eindämmung potenziell gefährlicher Materialien zu gewährleisten. Die Einhaltung dieser Vorsichtsmaßnahmen schützt nicht nur die Integrität der Probe, sondern minimiert auch das Risiko einer Exposition des Bedieners gegenüber mikrobiellen Krankheitserregern.

1. Vorbereitung der Fleischproben

1. Gewinnung und Verarbeitung von Fleischproben
   1. Frischfleisch
      1. Erwerben Sie Hackfleisch in der Frischfleischabteilung des örtlichen Einzelhandels. Alle Proben werden bei 4 °C gelagert und innerhalb von 24 Stunden nach Erhalt verarbeitet. Fleisch aseptisch in 25 g Proben aufteilen.
      2. Vakuumieren Sie die Probe und bestrahlen Sie sie. Hier bestrahlte das Texas A&M AgriLife National Center for Electron Beam Research Fleisch einer Dosis von ~25 kGy.
         ANMERKUNG: Obwohl die Bestrahlung in dieser Studie als Kontrollmaßnahme verwendet wurde, um die Beseitigung der Hintergrundmikroflora zu gewährleisten, ist sie in der Praxis keine Voraussetzung für das Protokoll, wie die im folgenden Abschnitt verwendeten nicht bestrahlten küchenfertigen Produkte zeigen. Im Feld können alternative Methoden wie selektive Medien oder Spezifität der molekularen Diagnostik potenzielle Interferenzen durch Nichtziel-Mikroorganismen berücksichtigen.
   2. Kochfertige Hähnchenprodukte
      1. Erwerben Sie küchenfertige Hähnchenprodukte in der Tiefkühlabteilung des örtlichen Einzelhandels. Aseptisch in 25 g Proben aufteilen.
      2. Entnehmen Sie Proben aus der Mitte der einzelnen Stücke, um sicherzustellen, dass alle Zutaten (z. B. Panade und Käse) enthalten sind.
2. Vorbereitung der Medien
   1. Bereiten Sie gepuffertes Peptonwasser (BPW) vor, indem Sie 25 g BPW-Pulver in 1 L nanoreinem H₂O auflösen.
   2. Bereiten Sie Platten für die Gehirn-Herz-Infusion (BHI) vor. Dazu lösen Sie 37 g BHI-Pulver in 1 L nanoreinem H₂O auf und geben Sie 15 g Agar in BHI-Lösung. Sterilisieren Sie alle Medien durch Autoklavieren bei 121 °C für 15 Minuten. Gießen Sie 20 bis 25 ml Medium in Petrischalen mit durchsichtigem Deckel (100 mm x 15 mm).
      HINWEIS: Es ist am besten, die Platten in eine biologische Sicherheitswerkbank zu gießen, um aseptische Bedingungen aufrechtzuerhalten.

2. Zellkultur

1. Die erste Kultur wird vorbereitet, indem Salmonella enterica serovar Typhimurium ATCC 14028 auf eine BHI-Agarplatte gestreift und über Nacht bei 37 °C inkubiert wird.
2. Bereiten Sie Übernachtkulturen vor, indem Sie 25 ml BHI-Brühe mit einer Kolonie frisch gezüchteter Salmonellen beimpfen. Züchten Sie die Kulturen aerob über Nacht bei 37 °C und schütteln Sie sie bei 100 U/min.

3. Inokulation von Geflügelproben

1. Kulturverdünnung und -plattierung
   1. Bereiten Sie eine Reihe von 10-fachen Verdünnungen der Übernachtkultur in BPW vor, um Endkonzentrationen von ca. 1 x 10⁸ bis 1 x 10¹ KBE/ml zu erreichen. Es wird angenommen, dass die Konzentration der Salmonellen-Übernachtkultur 1 x 10⁹ KBE/ml beträgt.
   2. 0,5 ml der Übernachtkultur in 4,5 ml BPW überführen, mischen und dann 0,5 ml der Verdünnung in 4,5 ml BPW für jede weitere Verdünnung übertragen.
      1. Verteilen Sie 10 μl der 1 x 10³ KBE/ml-Verdünnung auf einer BHI-Agarplatte in dreifacher Ausfertigung für die Zellzählung, um die Kulturkonzentration über Nacht zu berechnen.
2. Inokulation von Fleischproben
   1. 25 g bestrahltes Hähnchenhackfleisch in zweifacher Ausfertigung aseptisch in einen sterilen Magenbeutel umfüllen. Die Tasche ist 7,5 x 12 Zoll groß und mit 1,63 l gekennzeichnet. Der Beutel enthält eine Filtertrennwand mit einem Lochdurchmesser von 330 μm, davon sind es 285 pro Quadratzentimeter.
   2. Beimpfen Sie jede Probe mit 1 mL der Verdünnung der Zielkonzentration. Fügen Sie beispielsweise 1 ml Kultur aus der Verdünnung von 1 x 10 μm KBE/ml hinzu, um einen Kontaminationsgrad von ca. 1.000 Zellen/25 g Huhn zu erreichen. Verteilen Sie das flüssige Inokulum vorsichtig mit einem sterilen Zellverteiler auf der Oberfläche der Hühnerproben und lassen Sie es 1 h bei 4 °C stehen.
   3. Bereiten Sie negative Kontrollproben vor, indem Sie 1 ml steriles BPW hinzufügen.

4. Probenverarbeitung

1. Geben Sie 225 mL BPW zu jeder Probe. Das Verhältnis von Volumen zu Medium wurde so gewählt, dass es sich an FSIS MLG 4.15⁴ orientiert.
2. Homogenisieren Sie die Proben mit dem Stomacher⁷ bei normaler Geschwindigkeit und einer Dauer von 120 s.
3. Zentrifugation und Resuspension
   1. Entfernen Sie die Flüssigkeit vorsichtig mit einer 50-ml-Pipette von der gefilterten Seite des Beutels. Teilen Sie die Flüssigkeit in zwei sterile Zentrifugenflaschen auf.
   2. Gleichen Sie die Flaschen mit sterilem BPW aus, um ein gleichmäßiges Gewicht zu gewährleisten. Zentrifugieren Sie die Proben bei 10.000 x g für 10 min. Entsorgen Sie den Überstand. Das Zellpellet in 3 mL BPW-Bouillon mit einem sterilen Spatel resuspendieren.
   3. Fügen Sie weitere 27 ml BPW-Brühe hinzu und mischen Sie sie gründlich unter Rühren mit einem Spatel. Kombinieren Sie den Inhalt beider Zentrifugenflaschen in einer Flasche für jede Probe.

5. Einrichtung des MPN-Blocks

HINWEIS: Tabelle 1 zeigt ein Schema der Verdünnungen in einem 48-Well-Block.

1. Geben Sie 3 ml der resuspendierten Probe in jede Vertiefung in Spalte 1 des 48-Well-Blocks (8 Replikate).
2. Bereiten Sie mit einer Achtkanalpipette eine Reihe von 10-fachen Verdünnungen über die Säulen 1 bis 6 innerhalb des Blocks vor.
3. 0,3 mL der Probe in 2,7 mL BPW Pipette geben, um zu mischen. Wiederholen Sie den Vorgang für jede Verdünnung. Inkubieren Sie die Blöcke über Nacht (~18 h) bei 37 °C und schütteln Sie sie bei ~100 U/min.

6. Plattieren und Aufzählen

1. Geänderte Aufzählung von Fallplatten
   1. Platte 7 μl einer über Nacht gewachsenen Probe jeder Verdünnung in einem 4 x 6-Gitter auf einer Agarplatte mit einer Mehrkanalpipette (Abbildung 2). Die Verwendung eines 4 x 6-Gitters auf zwei Platten bietet Platz für 8 Proben im Gegensatz zum typischen 6 x 6-Gitter von Tröpfchen⁸.
   2. Lassen Sie die Platten vor der Inkubation 10 Minuten an der Luft trocknen. Inkubieren Sie die Agarplatten über Nacht (~18-24 h) bei 37 °C. Zählen Sie nach der Inkubation die Anzahl der Kolonien auf jeder Platte.

7. qPCR-Nachweis von Salmonellen

1. DNA-Extraktion mit einem kommerziellen Kit
   1. Mischen Sie die Kulturen im 48-Well-Block, indem Sie mehrmals auf und ab pipettieren. Pipettieren Sie 200 μl jeder Kultur in eine 96-Well-PCR-Platte.
   2. Verschließen Sie die Platte und zentrifugieren Sie sie anschließend bei 6.600 x g für 10 min. Entfernen Sie den Überstand und fügen Sie dem Pellet 20 μl des Kit-Reagenzes hinzu.
   3. Resuspendieren Sie das Pellet, indem Sie auf und ab pipettieren. Die Platte verschließen und 10 Minuten lang bei 99 °C erhitzen, anschließend auf 20 °C abkühlen lassen.
   4. Erneut bei 6.600 x g für 10 min zentrifugieren. Verwenden Sie 2 μl des Überstands für die qPCR-Analyse.
2. Platten-Setup
   1. Bereiten Sie das qPCR-Reaktionsgemisch gemäß dem festgelegten Protokoll⁹ wie folgt vor: 10 μl 2x Master Mix; 0,4 μl von jedem Primer und jeder Sonde (10 μM Arbeitslösung): invA vorne: 5'-GTTGAGGATGTTATTCGCAAAGG-3', invA rückwärts: 5'-GGAGGCTTCCGGGTCAAG-3', invA-Sonde: 5'-CCGTCAGACCTCTGGCAGTACCTTCCTC-3', markiert mit dem Cal Fluor Orange 560 Fluorenfarbstoff; 0,2 μl Vorlage für die interne Amplifikationskontrolle (IAC) (6 x 10⁴ Kopien/μl)⁹; 0,4 μl jedes IAC-Primers und jeder Sonde (10 μM): IAC vorne: 5'-GGCGCGCCTAACACATCT-3', IAC rückwärts: 5'-TGGAAGCAATGCCAAATGTGTA-3', IAC-Sonde: 5'-TTACAACGGGAGAAGACAATGCCACCA-3', markiert mit TAMRA-Farbstoff. Stellen Sie das Volumen mit ddH₂O bis insgesamt 20 μl ein.
   2. Führen Sie die Echtzeit-PCR unter den folgenden Zyklusbedingungen^{durch 9}: 95 °C für 10 min (initiale Denaturierung der DNA und Aktivierung der Heißstart-Polymerase), 40 Zyklen von 95 °C für 15 s und 60 °C für 1 min, verwenden Sie die Standard-Ct-Einstellungen, um die Ergebnisse für die Analyse zu exportieren.

8. Nachweis mit dem 3M MDS-Assay

1. Befolgen Sie das Protokoll des Salmonella-Kits für den molekularen Nachweisassay. Mischen Sie die Kulturen im 48-Well-Block, indem Sie mehrmals auf und ab pipettieren. Pipettieren Sie 20 μl jeder Probe in das im Kit enthaltene Analyseröhrchen.
2. Die Proben 15 min lang auf 100 °C erhitzen. Die Lösung färbt sich von rosa zu gelb. Inkubieren Sie die Proben 10 Minuten lang bei Raumtemperatur. Die Lösung wechselt von gelb zu rosa.
3. Übertragen Sie 20 μl Lysat in ein Reagenzröhrchen und laden Sie die Reagenzröhrchen in den Halter.
4. Fügen Sie den Halter zum MDS-Gerät hinzu und konfigurieren Sie die Software so, dass die Informationen über das Kit und die Probe übermittelt werden. Das Gerät erfordert, dass jede Vertiefung mit der Chargennummer für den Assay und einem Probennamen beschriftet ist. Führen Sie die MDS-Software aus, und exportieren Sie den Bericht.

9. Datenanalyse

1. Klassifizierung von positiven und negativen Ergebnissen.
   1. Bei einer 4 x 6-Tropfen-Plattierung sind Flecken auf Agarplatten mit mindestens 1 Kolonie als positiv und Flecken auf Agarplatten ohne Wachstum als negativ zu bewerten.
   2. Bewerten Sie für die qPCR Vertiefungen mit einem Ct von weniger als oder gleich 30 als positiv und Vertiefungen mit einem Ct von mehr als 30 als negativ.
   3. Verwenden Sie für MDS die Ergebnisse aus dem MDS-System, die als positiv oder negativ gemeldet wurden.
2. MPN-Berechnung
   1. Analysieren Sie kommentierte positive und negative Werte mit der^{zuvor beschriebenen einfachen} SMPR-Methode (Maximum Probability Resolution) oder alternativen verifizierten MPN-Rechnern. ¹⁰

Ergebnisse

Bestrahltes Fleisch
In der Regressionsanalyse bedeutet eine Steigung von 1, dass für jede Einheitenzunahme der unabhängigen Variablen (x-Achse) die abhängige Variable (y-Achse) um genau 1 Einheit zunimmt. Dies deutet auf eine proportionale Beziehung zwischen den beiden Variablen hin, was bedeutet, dass die Änderung der abhängigen Variablen die Änderung der unabhängigen Variablen widerspiegelt. Ein Knotenpunkt von 0 bedeutet, dass, wenn die unabhängige Variable...

Diskussion

Bedeutung des Protokolls
Salmonellen sind nach wie vor ein großes Problem für die Lebensmittelsicherheit, insbesondere bei Geflügelerzeugnissen, die häufig mit lebensmittelbedingten Krankheitsausbrüchen in Verbindung gebracht werden^13,14. Als eine der Hauptursachen für bakterielle lebensmittelbedingte Krankheiten in den Vereinigten Staaten sind zuverlässige Methoden zum Nachweis von Salmon...

Materialien

Name	Company	Catalog Number	Comments
48 deep well block 4.6ml	Fisher Scientific International, Inc	NC1964628
Agar - Solidifying Agent (Difco)	Becton, Dickinson and Company (BD)	281230
Analytical Balance	Mettler Toledo	JL602-G/L	Equipment
Analytical Balance	Mettler Toledo	AB54-S	Equipment
Autoclave - Amsco Lab250, Laboratory Steam Sterilizer	Steris plc	LV-250	Equipment
Biological Safety Cabinet, Type A2, Purifier Logic+	Labconco Corporation	302411101	Equipment
Brain Heart Infusion (BHI) Broth	Becton, Dickinson and Company (BD)	237500
Buffered Peptone Water	Bio-Rad Laboratories Inc.	3564684
Cell Spreader - L-shaped	VWR	76208-438
Centrifuge Microcentrifuge 5424	Eppendorf	5424	Equipment
Centrifuge, Avanti J-25	Beckman Coulter, Inc.		Equipment
DNA Extraction - PreMan Ultra Sample Preparation Reagent	Thermo Fisher Scientific Inc.	4318930
Ground Chicken	Local retailers
IAC forward  primer: 5'-GGCGCGCCTAACACATCT-3'	Integrated DNA Technologies
IAC probe: 5'-TTACAACGGGAGAAGACAATGC CACCA-3' labeled with 5' TAMRA/3' BHQ-2	Biosearch Technologies
IAC reverse primer: 5'-TGGAAGCAATGCCAAATGTGTA-3'	Integrated DNA Technologies
Incubator - Inova 4230 incubator shaker	New Brunswick Scientific	4230	Equipment
Inoculating Loop - Combi Loop  10µL and 1µL	Fisher Scientific International, Inc	22-363-602
invA forward primer: 5'-GTTGAGGATGTTATTCGCAAAG G-3'	Integrated DNA Technologies
invA probe: 5'-CCGTCAGACCTCTGGCAGTAC CTTCCTC-3' labeled with 5' Cal Fluor Orange 560/3' BHQ-1	Biosearch Technologies
invA reverse primer: 5'-GGAGGCTTCCGGGTCAAG-3'	Integrated DNA Technologies
Irradiation Treatment	Texas A&M Agrilife Research National Center for Electron Beam Research		Service
Luria Bertani (LB) Broth	Becton, Dickinson and Company (BD)	244620
Manual pipette Pipet-Lite LTS Pipette L-1000XLS+	Mettler Toledo	17014382	Equipment
Manual pipette Pipet-Lite LTS Pipette L-100XLS+	Mettler Toledo	17014384	Equipment
Manual pipette Pipet-Lite LTS Pipette L-10XLS+	Mettler Toledo	17014388	Equipment
Manual pipette Pipet-Lite LTS Pipette L-200XLS+	Mettler Toledo	17014391	Equipment
Manual pipette Pipet-Lite LTS Pipette L-20XLS+	Mettler Toledo	17014392	Equipment
Manual pipette Pipet-Lite Multi Pipette L8-200XLS+	Mettler Toledo	17013805	Equipment
Manual pipette Pipet-Lite Multi Pipette L8-20XLS+	Mettler Toledo	17013803	Equipment
Media Storage Bottle -PYREX 1L Square Glass  Bottle, with GL45 Screw Cap	Corning Inc.	1396-1L	Equipment
Media Storage Bottle -PYREX 2L Round Wide Mouth Bottle, with GLS80 Screw Cap	Corning Inc.	1397-2L	Equipment
Microtiter plate, 96 well plate, flat bottom, polystyrene, 0.34cm2, sterile, 108/cs	MilliporeSigma	Z707902
Mixer - Vortex Genie 2	Scientific Industries Inc.	SI-0236	Equipment
Molecular Detection Assay 2-Salmonella kit	Neogen	MDA2SAL96
Molecular Detection Instrument	Neogen	MDS100	Equipment
Motorized pipette controller, PIPETBOY2	INTEGRA Biosciences Corp.	155019	Equipment
PCR Mastermix 2× TaqMan Gene Expression	Thermo Fisher Scientific Inc.	4369542
Petri Dish Rotator -  bioWORLD Inoculation Turntable	Fisher Scientific International, Inc	3489E20	Equipment
Petri Dishes with Clear Lid (100 mm x 15mm)	Fisher Scientific International, Inc	FB0875713
Pipette Tips GP LTS 1000µL S 768A/8	Mettler Toledo	30389273
Pipette Tips GP LTS 20µL 960A/10	Mettler Toledo	30389270
Pipette Tips GP LTS 200µL F 960A/10	Mettler Toledo	30389276
Ready to cook chicken products	Local retailers
Reagent Reservoir, 25 mL sterile reservoir used with multichannel pipettors	Thermo Fisher Scientific Inc.	8093-11
Realtime PCR - 7500 Real-Time PCR system	(Applied Biosystems, Foster City, CA)	2750036476	Equipment
Serological Pipettes, Nunc Serological Pipettes (10 mL)	Thermo Fisher Scientific Inc.	170356N
Serological Pipettes, Nunc Serological Pipettes (2 mL)	Thermo Fisher Scientific Inc.	170372N
Serological Pipettes, Nunc Serological Pipettes (25 mL)	Thermo Fisher Scientific Inc.	170357N
Serological Pipettes, Nunc Serological Pipettes (50 mL)	Thermo Fisher Scientific Inc.	170376N
Spreader - Fisherbrand L-Shaped Cell Spreaders	Fisher Scientific International, Inc	14-665-230
Stomacher bag, Nasco Whirl-Pak Write-On Homogenizer Blender Filter Bags	Thermo Fisher Scientific Inc.	01-812
Stomacher 80 Biomaster Lab Blender	Seward	30010019	Equipment
Thermocycler (GeneAmp PCR system 9700)	Applied Biosystems	535028293	Equipment
Water Filtration - Elga Veolia Purelab Flex	Elga LabWater	PF2XXXXM1-US	Equipment
Whirlpak bags 1.63L	VWR	11216-777