Wir danken den Mitgliedern des Gelfand Labor, die zur Entwicklung dieser Protokolle beigetragen. Forschung in dieser Veröffentlichung berichtet, wurde durch das National Institute of General Medical Science der National Institutes of Health unter Verleihungsnummer R01GM052111 an die VIG und baskischen Regierung Ministerium für Bildung, Hochschulen und Forschung unter Verleihungsnummer BFI-2011-295 bis UDC unterstützt.

1. Drosophila S2-Zellen <ol><li> Herstellung von ConA beschichtete Deck <ol><li> Zeigen Deckgläser in einem Keramik-Zahnstange und waschen Sie sie durch Chromsäure Eintauchen für 1 Stunde. [ACHTUNG: Chromsäure ist ätzend und kann zu Reizungen von Augen, Nase, Rachen und Haut verursachen]. </li><li> Deckgläser gründlich mit ständig laufenden dH 2 O für 30 Minuten, bis die Säure vollständig ausgewaschen. </li><li> Lassen Deckgläser der Luft trocknen und überziehen sie mit ConA (0,5 mg / ml Lösung in dH 2 O) für 30 min. </li><li> Spülen Deckgläser mit dH 2 O für 15 Minuten und lassen Sie sie an der Luft trocknen. ConA-beschichtete Deckgläser bis zu 1 Monat gelagert werden. </li></ol></li><li> Ausplattieren der Zellen <ol><li> S2-Zellen zu ermöglichen, exponentiell in Abhängigkeit von der Anzahl von Zellen für das Experiment erforderlich wachsen T25 oder T75-cm 2-Kolben. </li><li> Zählen Sie die Zelldichte mit einer Zählkammer. 1 ml Wachstums medium (zB Insect-Xpress) in eine 35-mm-Gewebekulturschale mit ConA-beschichtete Deckglas, und sanft über ~ 1 x 10 5 Zellen in die Schale. Diese Zelldichte ist optimal für Abbildungsverfahren, weil aus verschiedenen Zellen nicht überlappen. </li><li> Um die Bildung von Prozessen zu veranlassen, unmittelbar nach dem Plattieren 1ml Medium mit 5 uM CytoD zu der Schale (bis zu einer Endkonzentration von 2,5 uM CytoD). Ermöglichen eine vollständige Entwicklung von Verfahren durch Inkubation der Zellen mindestens 2 h bei 25 º C vor der Bilderzeugung. </li></ol></li></ol> 2. Drosophila Primär Neuron Kultur <ol><li> Vorbereitung für Neuronenkultur <ol><li> Vorbereitung Drosophila neuronalen Wachstumsmedium (Schneider-Medium, ergänzt mit 20% fötalem Rinderserum, Wärme bei 55 º C für 30 min inaktiviert, 5 ug / ml Insulin, 100 ug / ml Penicillin, 100 ug / ml Streptomycin, 10 ug / ml Tetracyclin) . Diese supergänzt Schneider Medium kann bei 4 º C für 6 Monate gelagert werden. </li><li> Bereiten Apfelsaft-Agar Fläschchen für das Sammeln von Drosophila-Embryonen (22,5 g Agar-Agar, 12,0 g Saccharose und 750 ml H 2 O in einem 2-Liter-Kolben, Autoklaven für 20-25 Minuten, fügen Sie 250 ml Apfelsaft und gießen ~ 10 ml in jede Drosophila Fläschchen, nach der Erstarrung, stecken Fläschchen mit Watte, und wickeln Sie Flaschen mit Plastikfolie über dem Trocknen der Lebensmittel zu vermeiden). Der Apfelsaft in Agar Fläschchen können bei 4 º C in gut verschlossenen Plastikbeutel für 4 Wochen gelagert werden. </li><li> Coat säuregewaschen 25 mm Kreis Deckgläser mit ConA (siehe Details im Protokoll für die Drosophila-S2-Zellen) und sterilisieren sie unter UV-Licht für 10-15 min. Diese Deck kann für einen Monat gelagert werden. </li></ol></li><li> Drosophila embryonalen Neuronenkultur <ol><li> Halten junger Erwachsener fliegt in Apfelsaft-Agar-Röhrchen mit Trockenhefe ergänzt für 1-2 Tage vor dem Sammeln Embryonen foder Neuron Vorbereitung. </li><li> Am Tag sammeln, um die gesammelten Embryonen zu synchronisieren, fliegt Transfer Erwachsenen zu einem frischen Apfelsaft-Agar Fläschchen für 1 Stunde in Precollection Licht und entsorgen diese Embryonen. </li><li> Über fliegt zu einer neuen Flasche Apfelsaft-Agar, sammeln Embryonen für 1 Stunde, und übertragen die Fliegen zu einem anderen Fläschchen für eine weitere Stunde, sowohl in dunklen, um den Embryo Ausbeute zu erhöhen. </li><li> Entfernen Sie die erwachsenen Fliegen aus der Apfelsaft-Agar-Röhrchen und lasse die Embryonen entwickeln, weitere 4 h bis 11.09 Stufen bei Raumtemperatur (4-6 h alten Embryonen sind zwischen Bühne 9-11). </li><li> Entfernen Sie die Embryonen durch Spritzen von Wasser in Flaschen und Lösen der Embryonen aus der Apfelsaft-Agar mit einem kleinen Pinsel (mindestens 10 Embryonen werden für eine gute Vorbereitung Neuron erforderlich). </li><li> Übertragen Sie die Embryonen auf einen 100 um Nylon-Mesh Zellsieb mit einer Transferpipette Wasser abzulassen (Vorspülen die Transferpipette in Drosophila-Embryo Waschpuffer, 0,4% NaCl, 0,03% TritonX-100). </li><li> Sammeln Sie die Embryonen aus dem Sieb mit einem kleinen Pinsel, und übertragen Sie sie in ein 1,5 ml Mikroröhrchen mit 1 ml Wasch Drosophila-Embryo (Hinweis: Reinigen keine Agar-oder Baumwollfasern mit dem Pinsel oder Pipettenspitzen) gefüllt. In diesem Protokoll wird das 1,5 ml-Mikroröhrchen mit einem passenden Einweg Pellets zerstoßen. </li><li> In Drosophila-Embryo Wasch 3x waschen Embryonen. </li><li> Dechorionate die Embryonen in einer frischen 1:1-Lösung von Handelsbleichmittel und 95% Ethanol für 10 min [ACHTUNG: Bleichmittel kann zu Reizungen von Augen, Nase, Rachen und Haut verursachen]. </li><li> Gehen Sie zur Gewebekultur Kapuze, und waschen Embryonen in 2x ergänzt Schneider Medium. </li><li> Lassen 200-300 ul Medium in der Röhre mit den Embryonen, und sanft mechanisch distanzieren dechorionated Embryonen mit Kimble Chase Einweg-Pellet Stößel, die von 70% Ethanol sterilisiert worden sind (schleifen 10-15x). </li><li> Zentrifugieren der homogenisierten Mischung bei 20 × g für 2 min und transfer der Überstand in ein frisches Röhrchen. [Dieser Schritt ist optional, es hilft, um Schmutz zu entfernen Embryo] </li><li> Zentrifugieren des Überstandes bei 550 g für 2 min Zellen zu pelletieren. </li><li> Das Pellet in 500 ul wieder ergänzt Schneider mittel-und Spin-Zellen nach unten bei 550 g für 2 min; wiederholen Sie die Aufwirbelung Spinnzyklus einmal. </li><li> Schließlich das Pellet in 100 ul ~ ergänzt Schneider-Medium und der Platte der Zellen auf einer 25 mm ConA-beschichtete Deckglas in einem sterilen 35 mm Petrischale. Inkubation für 10 min auf die Zellhaftung zu ermöglichen. </li><li> 2 ml ergänzt Schneider-Medium, mit 5 &amp;mgr; M CytoD auf das Deckglas mit anhaftenden Zellen einzutauchen. </li><li> Inkubieren Sie die Schale in einem befeuchteten 25 ° C Inkubator über Nacht vor der Bildgebung. </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Schneider, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+lines+derived+from+late+embryonic+stages+of+Drosophila+melanogaster.">Cell lines derived from late embryonic stages of Drosophila melanogaster.</a> J. Embryol. Exp. Morphol. 27, 353-365 (1972).</li><li>Rogers, S. L., Rogers, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culture+of+Drosophila+S2+cells+and+their+use+for+RNAi-mediated+loss-of-function+studies+and+immunofluorescence.">Culture of Drosophila S2 cells and their use for RNAi-mediated loss-of-function studies and immunofluorescence.</a> 3, 606-611 (2008).</li><li>Buster, D. W., Nye, J., Klebba, J. E., Rogers, G. 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G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deficits+in+axonal+transport+precede+ALS+symptoms+in+vivo.">Deficits in axonal transport precede ALS symptoms in vivo.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 107, 20523-20528 (2010).</li><li>Lloyd, T. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+p150(Glued)+CAP-Gly+domain+regulates+initiation+of+retrograde+transport+at+synaptic+termini.">The p150(Glued) CAP-Gly domain regulates initiation of retrograde transport at synaptic termini.</a> Neuron. 74, 344-360 (2012).</li><li>Moughamian, A. J., Holzbaur, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynactin+is+required+for+transport+initiation+from+the+distal+axon.">Dynactin is required for transport initiation from the distal axon.</a> Neuron. 74, 331-343 (2012).</li><li>Lorenzo, D. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spectrin+mutations+that+cause+spinocerebellar+ataxia+type+5+impair+axonal+transport+and+induce+neurodegeneration+in+Drosophila.">Spectrin mutations that cause spinocerebellar ataxia type 5 impair axonal transport and induce neurodegeneration in Drosophila.</a> J. Cell. Biol. 189, 143-158 (2010).</li><li>Robinow, S., White, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+locus+elav+of+Drosophila+melanogaster+is+expressed+in+neurons+at+all+developmental+stages.">The locus elav of Drosophila melanogaster is expressed in neurons at all developmental stages.</a> Dev. Biol. 126, 294-303 (1988).</li><li>Pilling, A. D., Horiuchi, D., Lively, C. M., Saxton, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kinesin-1+and+Dynein+are+the+primary+motors+for+fast+transport+of+mitochondria+in+Drosophila+motor+axons.">Kinesin-1 and Dynein are the primary motors for fast transport of mitochondria in Drosophila motor axons.</a> Mol. Biol. Cell. 17, 2057-2068 (2006).</li><li>Furst, A., Mahowald, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+of+primary+embryonic+neuroblasts+in+purified+neural+cell+cultures+from+Drosophila.">Differentiation of primary embryonic neuroblasts in purified neural cell cultures from Drosophila.</a> Dev. Biol. 109, 184-192 (1985).</li><li>Salvaterra, P. M., Bournias-Vardiabasis, N., Nair, T., Hou, G., Lieu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+neuronal+differentiation+of+Drosophila+embryo+cells.">In vitro neuronal differentiation of Drosophila embryo cells.</a> J. Neurosci. 7, 10-22 (1987).</li><li>Wiemer, E. A., Wenzel, T., Deerinck, T. J., Ellisman, M. H., Subramani, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualization+of+the+peroxisomal+compartment+in+living+mammalian+cells:+dynamic+behavior+and+association+with+microtubules.">Visualization of the peroxisomal compartment in living mammalian cells: dynamic behavior and association with microtubules.</a> J. Cell. Biol. 136, 71-80 (1997).</li><li>Rizzuto, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+gene+specifying+subunit+VIII+of+human+cytochrome+c+oxidase+is+localized+to+chromosome+11+and+is+expressed+in+both+muscle+and+non-muscle+tissues.">A gene specifying subunit VIII of human cytochrome c oxidase is localized to chromosome 11 and is expressed in both muscle and non-muscle tissues.</a> J. Biol. Chem. 264, 10595-10600 (1989).</li><li>Poot, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+mitochondrial+morphology+and+function+with+novel+fixable+fluorescent+stains.">Analysis of mitochondrial morphology and function with novel fixable fluorescent stains.</a> J. Histochem. Cytochem. 44, 1363-1372 (1996).</li><li>Haller, T., Dietl, P., Deetjen, P., Volkl, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+lysosomal+compartment+as+intracellular+calcium+store+in+MDCK+cells:+a+possible+involvement+in+InsP3-mediated+Ca2++release.">The lysosomal compartment as intracellular calcium store in MDCK cells: a possible involvement in InsP3-mediated Ca2+ release.</a> Cell Calcium. 19, 157-165 (1996).</li></ol>

Die Autoren erklären, dass sie keine finanziellen Interessen konkurrieren.

Hier präsentieren wir Ihnen ausführliche Protokolle für die Untersuchung der Mikrotubuli-abhängige Frachtverkehr in Drosophila S2-Zellen und primäre Neuronenkultur. Beide S2 Prozesse und Neuriten sind Strukturen von gebündelten Mikrotubuli-Arrays, die als Spuren für Organellentransport dienen gefüllt. Zwei Strategien werden in der Regel Label Organellen verwendet: Transfektion von Vektoren ein fluoreszierendes Protein kodiert, mit einem Organell-Targeting-Sequenz oder Färbu...

Drosophila S2-Zellen haben sich zunehmender Beliebtheit für das Studium vieler zellulärer Prozesse gewonnen. Diese Zellen wurden ursprünglich aus Trypsin späten Stadium Embryonen von Drosophila melanogaster OregonR erhalten und zu pflegen Makrophagen-ähnliche Funktionen ein. Drosophila S2-Zellen bieten viele Vorteile gegenüber anderen Zelllinien. Sie kultiviert bei 25 ° C ohne CO 2, und kann für viele Stunden bei Raumtemperatur abgebildet werden, ohne die Notwendigkeit einer Erwärmung oder Gasaustausch. Noch wichtiger ist, Drosophila S2-Zellen sind sehr empfindlich auf RNAi-Behandlung ermöglicht hohe Effizienz Knockdown von Proteinen von Interesse. S2-Zellen sind sehr transfizierbar und stabile Zelllinien können in weniger als vier Wochen gewählt werden, um stabile ektopische Expression von Proteinen von Interesse zu ermöglichen. S2-Zellen normal wachsen entweder lose befestigt, aber nicht auf einen Kolben oder in Suspension zu verbreiten. Sie können bewogen, auf Deckgläsern mit einer Pflanze Lektin conca schwemmt verteilt werdennavalin A (ConA). Der Umfang der ausgebreiteten Zellen ist besonders dünn und ist somit ideal für Lebendzellmikroskopie. Detaillierte Protokolle für die S2-Zellen Kultur, RNAi-Behandlung, Live-Licht-Bildgebung und Immunfärbung in der Literatur 2,3 gefunden werden. Unser Labor hat S2-Zellen als Modellsystem, um Mikrotubuli-basierte Frachtverkehr zu studieren. Drosophila S2-Zellen mit jedem Medikament, das depolymerisiert oder trennt F-Actin, wie Cytochalasin D (CytoD) behandelt, wachsen lange Prozesse einheitlich polarisiert Mikrotubuli 4 gefüllt angenommen -10, die es zu einem idealen System für Fracht Bewegung entlang Mikrotubuli studieren. Verschiedene Parameter des Verkehrs in diesen Prozessen (. Dh Trajektorien Längen, Geschwindigkeiten, Richtungs etc) leicht mit automatisierten Partikel-Tracking-Software, DiaTrack (Semasopht gemessen werden: http://www.microscopy.info/Organization/Details/4423, Dr. . Pascal Vallotton: http://www.csiro.au/en/Organisation-Structure/Divisions/Mathematics-Informatics-and-Statistics/PascalVallotton.aspx # a4). Diese Eigenschaften machen S2-Zellen eine ansprechende System für die Untersuchung Frachtverkehr entlang von Mikrotubuli in Gewebekulturzellen. Pilotversuche in S2-Zellen kann zu einer physiologisch wichtigen Modell der Frachttransportstudien in Drosophila primären Neuronen erweitert werden. Ähnlich S2-Zellen sind Neuronen aus dissoziierten Embryonen kultiviert durchlässig für kleine Moleküle wie Farbstoffe und Inhibitoren und hochauflösende Live-Darstellung von Organellen-Transport in Nervenzellen bei Raumtemperatur durchgeführt werden. Mit Drosophila mit unterschiedlichen genetischen Hintergründen können wir Gen-Funktion in primären Neuronen untersuchen, durch Knockout (genetische loss-of-function Mutationen), Zuschlag (dsRNA Injektion oder Ausdruck) oder ektopische Expression (transgene Linie). Insbesondere ist die Fragmentierung von Aktin-Filamenten mit CytoD Behandlung nicht verhindert Neuritenwachstum, sondern sie schneller wachsen und somit können wir Mikrotubuli-depende studierennt Organellentransport in CytoD behandelten Neuronen ohne den Einfluss von Aktin-Filamenten 11. Daher primären neuronalen Kulturen verbinden die Vorteile von Gewebekulturzellen und fliegen Genetik, das es ein großartiges System für Frachttransport in einem physiologisch relevanten System 10,12 studieren. Da mehrere familiäre neurodegenerative Erkrankungen durch verursacht werden oder mit Frachttransportdefekte (zB Parkinson-Krankheit 13 in Verbindung gebracht werden, Huntington-Krankheit 14, Alzheimer-Krankheit 15,16, Amyotrophe Lateralsklerose / ALS 17, HMN7B und Perry-Syndrom 18,19 und Spinocerebellar Ataxie Typ 5/SCA5 20) können primären neuronalen Kulturen nützlich bei der Analyse der Wirkungen von bestimmten Mutationen, die diese Krankheiten auf Mikrotubuli-abhängigen Transport sein. Schließlich werden wichtige Eigenschaften der Mikrotubuli-abhängigen Transport auch zwischen Säugetieren und Fliegen erhalten, aber <em&gt; Drosophila Gen-und Zellkultur ist weniger teuer und zeitaufwendig ist, rechtfertigt die Verwendung von kultivierten Drosophila-Zellen für die Untersuchung wesentlichen Aspekte der Organellentransport in normalen und pathologischen Bedingungen.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="435">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="61">
			<td height="61" style="height:61px;width:124px;">Powder Insect cell medium (Schneider&#8217;s)</td>
			<td style="width:133px;">Sigma&#160;</td>
			<td style="width:179px;">S9895</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:124px;">Insect &#8211;Xpress medium</td>
			<td style="width:133px;">Fisher</td>
			<td style="width:179px;">BW12730Q</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:124px;">Insulin</td>
			<td style="width:133px;">Sigma</td>
			<td style="width:179px;">I6634</td>
		</tr>
		<tr height="61">
			<td height="61" style="height:61px;width:124px;">Penicillin</td>
			<td style="width:133px;">Research Products International</td>
			<td style="width:179px;">P93000</td>
		</tr>
		<tr height="61">
			<td height="61" style="height:61px;width:124px;">Streptomycin</td>
			<td style="width:133px;">Research Products International</td>
			<td style="width:179px;">S62000</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:124px;">Tetracycline hydrochloride</td>
			<td style="width:133px;">Sigma</td>
			<td style="width:179px;">T7660-5G</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:124px;">Fetal bovine serum</td>
			<td style="width:133px;">Atlanta Biologicals</td>
			<td style="width:179px;">S11150</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:124px;">Concanavalin A</td>
			<td style="width:133px;">Sigma</td>
			<td style="width:179px;">C2010</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:124px;">Cytochalasin D</td>
			<td style="width:133px;">VWR</td>
			<td style="width:179px;">IC15077105</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:124px;">LysoTracker Red DND-99</td>
			<td style="width:133px;">Molecular Probes</td>
			<td style="width:179px;">L7528</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:124px;">100 &#181;m Cell strainer</td>
			<td style="width:133px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:179px;">22363549</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:124px;">25 mm Circle cover glass</td>
			<td style="width:133px;">VWR</td>
			<td style="width:179px;">48380 080</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:124px;">Drosophila Vials</td>
			<td style="width:133px;">VWR</td>
			<td style="width:179px;">89092-730</td>
		</tr>
		<tr height="81">
			<td height="81" style="height:81px;width:124px;">Disposable pellet pestles with matching microtubes</td>
			<td style="width:133px;">Kimble Chase</td>
			<td style="width:179px;">749520-0000</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

organelle transport in cultured drosophila cells: s2 cell line and primary neurons.

Drosophila-S2-Zellen auf einem Deckglas überzogen in das Vorhandensein von Aktin-Depolymerisation Arzneiform lange unverzweigte Prozesse einheitlich polarisiert Mikrotubuli gefüllt. Organellen bewegen sich entlang dieser Prozesse durch Mikrotubuli-Motoren. Einfache Wartung, hohe Empfindlichkeit für RNAi-vermittelten Protein-knock-down und effiziente Verfahren für die Erstellung von stabilen Zelllinien machen Drosophila S2-Zellen ein ideales Modellsystem für Frachttransport durch Live-Bildgebung zu untersuchen. Axonalen Transport in primären Neuronen von Drosophila-Embryonen kultiviert dissoziiert: Die mit S2-Zellen erhaltenen Ergebnisse weiter zu einer physiologisch relevanten System angewendet werden. Kultivierten Neuronen wachsen lange Neuriten mit gebündelten Mikrotubuli, sehr ähnlich S2 Prozesse gefüllt. Wie in S2-Zellen, Organellen kann in kultivierten Neuronen entweder durch Organell-spezifischen Fluoreszenzfarbstoffen oder durch Verwendung von fluoreszierenden Organellen-Marker von DNA kodiert visualisiert werden in frühen Embryonen injiziert oder in transgen exprimiertic fliegt. Daher kann Organelltransport leicht in Neuronen auf Deckgläser mit lebendigen Bild kultiviert aufgezeichnet werden. Hier beschreiben wir Verfahren zur Kultivierung und Visualisierung Frachtverkehr in Drosophila S2-Zellen und primäre Neuronen. Wir glauben, dass diese Protokolle beide Systeme zugänglich für Labore Studium Frachtverkehr zu machen.

Drosophila-S2-Zellen auf der ConA-beschichtete Deckglas Ausbreitung in eine flache runde &quot;Pfannkuchen&quot;-Form (1A und 1C) angebracht. Wenn jedoch S2-Zellen auf Deckgläsern ausplattiert in Gegenwart CytoD und für 2-3 Stunden verteilt, bilden sie lange dünne Prozesse parallel Mikrotubuli (Fig. 1B und 1D) gefüllt. Diese Mikrotubuli einheitliche Polarität mit Plus-Enden aus 7. Zeitraffer-Fluoreszenz-Imaging von Drosophil...

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Organelle Transport in Cultured Drosophila Cells: S2 Cell Line and Primary Neurons.

Drosophila S2-Zellen und kultivierten Neuronen sind große Systeme für die Bildgebung von motorbetriebenen Organellentransport in vivo. Hier beschreiben wir ausführliche Protokolle für die Kultivierung beider Zelltypen, die Abbildung und Analyse des Verkehrs.

Organell-Transport in kultivierten<em&gt; Drosophila</em&gt; Zellen: S2-Zelllinie und primären Neuronen.

Drosophila S2 cells plated on a coverslip in the presence of any actin-depolymerizing drug form long unbranched processes filled with uniformly polarized ...

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Biology

Organelle Transport in Cultured Drosophila Cells: S2 Cell Line and Primary Neurons.

13.6K Aufrufe.  Feinberg School of Medicine, Northwestern University.  Drosophila S2-Zellen und kultivierten Neuronen sind große Systeme für die Bildgebung von motorbetriebenen Organellentransport in vivo. Hier beschreiben wir ausführliche Protokolle für die Kultivierung beider Zelltypen, die Abbildung und Analyse des Verkehrs. 