We thank Dr. Gilles Dupuis for critical reading of the manuscript. 
Funding
This work was supported by the Canadian Institutes for Health Research, grant # MOP-126173. C.M.D is a member of the Fonds de la Recherche en Sant&#233; (FRSQ)-funded Centre de Recherche Clinique &#201;tienne LeBel.

1. Herstellung von Lösungen für Cellular pH-Kalibrierung <ol><li> Fügen Sie die folgenden Verbindungen zu fünf separate 50 ml konische Röhrchen bis 5 Lösungen für die Kalibrierung verwendet werden vorbereitet: <ul><li> NaCl (1 ml von 1 M NaCl) (1 M NaCl = 0,58 g in 10 ml H 2 0) </li><li> KCl (6,75 ml 1 M KCl) (1 M KCl = 0,75 g in 10 ml H 2 0) </li><li> Glucose (1 ml von 1 M D-Glucose) (1 M D-Glucose = 1,80 g in 10 ml H 2 0) </li><li> MgS0 4 (0,05 ml von 1 M MgSO 4) (1 M MgSO 4 = 1,20 g in 10 ml H 2 0) </li><li> 20 mM HEPES (1 ml von 1 M HEPES) (1 M HEPES = 2,38 g in 10 ml H 2 0) </li><li> CaCl 2 (0,05 ml 1 M CaCl 2) (1 M CaCl 2 = 1,47 g in 10 ml H 2 0) Bereiten alle Lösungen in doppelt destilliertem H 2 O (ddH 2 O). </li></ul></li><li> Füllen Sie jede Lösung mit 35 ml ddH2O und mit einem Magnetrührer mischen, bis soLösung erreicht wird. </li><li> Der pH-Wert jeder Lösung mit 1 N KOH oder 1 N HCl auf pH-Werte von 5,5, 6,0, 6,5, 7,0 und 7,5 erhalten. Dann wird das Volumen mit destilliertem Wasser auf ein Endvolumen von 50 ml einzustellen. </li><li> Maßnahme 5 mg Nigericin und es auf 670 ul absolutem EtOH hinzufügen, um eine 10 mM Stammlösung Nigericin vorzubereiten. Achtung: Nigericin ist hochtoxisch und müssen mit großer Sorgfalt (Handschuhe, Schutzbrille und Maske) behandelt werden. Mische die Lösung durch Umdrehen bis die Nigericin vollständig gelöst ist. </li><li> In 0,05 ml 10 mM Nigericin (Endkonzentration 10 uM), um die Eichlösungen. Ionophor Nigericin ist, die Permeabilität der Zellmembran erhöht und bewirkt Äquilibrierung von intrazellulären und extrazellulären pH-Wert in Gegenwart eines depolarisierenden Konzentration der extrazellulären K +. </li><li> Eichlösungen kann bis zu 1 Monat bei 4 ° C gelagert werden, </li></ol> 2. Zellpräparation <ol><li> Unter einer biologischen safety Haube, Samenzellen in 35 mm x 10 mm Kulturschalen in 2 ml Wachstumsmedium mit 10% fötalem Rinderserum und Antibiotika ergänzt. Verwenden der Menge von Zellen benötigt wird, um ungefähr 50% Konfluenz nach 24 Stunden zu gewährleisten. HINWEIS: In unseren Experimenten verwenden wir die HT-1080-Zelllinie und Platte 1 x 10 5 Zellen pro Kulturschale. </li><li> Bestimmen der Anzahl von Kulturschalen für das Experiment und die Platte 5 zusätzliche Kulturschalen für die Kalibrierung verwendet werden, benötigt. </li><li> Ort Kulturschalen bei 37 ° C / 5% CO 2-Inkubator für mindestens 24 Stunden. </li></ol> 3. Herstellung von pH-Messsonden <ol><li> Bereiten Sie eine 1 M Stammlösung des fluoreszierenden pH-Sonde 8-Hydroxypyren-1, 3,6 trisulfonsäure, Trinatriumsalzes (HPTS / Pyranin) in ddH 2 0. Diese Lösung muss bei RT gelagert und vor Licht geschützt werden. </li><li> Bereiten Sie eine Stammlösung von 1 mM 5 - (und-6)-Carboxy seminaphthorhodafluor Acetoxymethylester Acetat (C-SNARF-01.00; genannt Thereâach SNARF-1) durch Lösen von 1 mg SNARF-1 in 1,76 ml DMSO. Durch wiederholtes Pipettieren gründlich mischen. SNARF-1-Lösung muss bei -20 ° C gelagert und vor Licht geschützt werden. </li></ol> 4. Zellmarkierung <ol><li> Sechzehn Stunden vor der Live-Cell-Imaging, fügen 2 ul 1M HPTS Stammlösung (Endkonzentration 1 mM) zu jeder Kulturschale mit 2 ml Vollmedium. </li><li> Bringen Sie die Kulturschalen in den Inkubator. Die HPTS Sonde zell impermeante, daher Label Organellen muss die Sonde durch pinocytosis genommen werden. Diese Bedingung erfordert, dass die Zell Inkubationen mit HPTS in serumhaltigem Kulturmedium durchgeführt. </li><li> Nach der Inkubation mit HPTS, waschen Sie die Zellen zweimal mit sterilem PBS und 2 ml Serum-freiem Medium für mindestens 2 Stunden. Inkubation mit SNARF-1 benötigt, um in serumfreiem Medium durchgeführt, da Serum kann die Aufnahme der Sonde zu verhindern. </li><li> In 10 ul einer 1 mM SNARF-1-Stammlösung zu erhalten afinal Konzentration von 5 uM und lassen Zellen für 20 min bei 37 ° C unter schwachem Licht inkubiert. C-SNARF-1-Konzentration und Inkubationszeit kann je nach Zelltyp variieren. </li><li> Am Ende der Inkubation wurden die Zellen zweimal Waschen in sterilem PBS und 2 ml serumfreies Medium. </li></ol> 5. Zugabe von pH-Modulatoren <ol><li> Um zu beurteilen, ob die Methode können pH-Veränderungen in den Zellen erkennen können verschiedene Reagenzien, die intrazellulären pH-Modulation verwendet werden: <ul><li> Bafilomycin A1, ein spezifischer Inhibitor der V-ATPase-5 </li><li> Na + / H +-Austauscher Isoform 1 (NHE-1) 6 </li><li> NH 4 Cl, eine schwache Base, die intrazelluläre pH 7 erhöht </li></ul><ol><li> Stocklösungen der oben genannten Reagenzien: <ul><li> Bafilomycin A1: 160 ul DMSO hinzufügen 10 ug Bafilomycin A1 um eine Stammlösung von 100 uM erhalten </li><li> EIPA: add 25 mg EIPA auf 1,67 ml Methanol obtaina Endkonzentration von 50 mM </li><li> NH 4 Cl: Man löst 0,53 g Ammoniumchlorid in 10 ml ddH 2 O auf eine Endkonzentration von 1 mM zu erhalten. </li></ul> Hinweis: Alle Stammlösungen sind bei 4 ° C aufbewahrt werden, außer Bafilomycin A1, die bei -20 ° C gelagert und vor Licht geschützt werden müssen. </li><li> In getrennten Kulturschalen, fügen Sie eines der Reagenzien, wie unten beschrieben: <ul><li> 2 ul 100 uM Bafilomycin A1 (Endkonzentration 100 nM) </li><li> 1 ul 50 mM EIPA (Endkonzentration 25 uM) </li><li> 40 ul 1 M NH 4 Cl-Lösung (Endkonzentration 20 mM) </li></ul></li><li> Die Zellen für 30 min bei 37 ° C. </li></ol></li><li> Fahren Sie mit der Bildaufnahme. </li></ol> 6. Technische Daten des Live-Cell-Imaging-Mikroskop und Akquisition Einstellungen <ol><li> Führen Sie Live-Cell-Imaging mit ein 40X-Objektiv auf einer spektralen invertierten konfokalen Mikroskopie montiertpe mit einem motorisierten XY-Tisch, eine Kammer, die mit Glasboden Kulturschalen in einer kontrollierten Umweltbedingungen (Temperatur, Luftfeuchtigkeit, CO 2)-Stufe Inkubator bietet Platz ausgestattet. </li><li> Das konfokale Instrument (Olympus FV1000) verwendet, hier ist ausgestattet mit: <ul><li> Ein Diodenlaser 405 nm </li><li> A 40 mW Argon-Laser (458 nm, 488 nm, 515 nm) </li><li> Ein Helium-Neon-Laser (543 nm) </li><li> Fluorit-10X-Objektiv, NA0.4 </li><li> Ein LUCPLFLN 40X-Objektiv, NA0.60 </li><li> Ein PLAPONSC PLAN APO 60x Öl-Objektiv, NA1.4 </li><li> Ein dichroitischen Spiegel DM 405/458/488/543 </li><li> Ein SDM 560 und ein SDM 640 dichroitischen Filter </li><li> Ein BA655-755-Sperrfilter </li><li> Ein Strahlteiler BS20/80 </li><li> Datenanalyse-Software für die Bildaufnahme und-analyse, </li></ul></li><li> Sobald die Bühne Inkubator hat bis zu 37 ° C erwärmt und das Mikroskop aufgebaut ist, legen Sie eine Kulturschale zuvor mit HPTS und SNARF-1 in der konfokalen Imaging-Bühne Kammer inkubiert. </li><li> Aach Ortung einen Bereich von Interesse, stellen die Anschaffungs Einstellungen Software Abbildung 1. <ul><li> Richten Sie zwei virtuelle Kanalsätze. </li><li> Initiieren Sie die erste Phase, die HPTS Anregung bei 405 nm und Emission bei 505 entspricht Sammlung - 525 nm und SNARF-1-Anregung bei 543 nm und Emissions Kollektion bei 570 bis 600 nm auf. </li><li> Initiieren Sie die zweite Phase, die HPTS Anregung bei 458 nm und Emission bei 505 entspricht Sammlung - 525 nm und SNARF-1-Anregung bei 543 nm und Emissions Kollektion bei 640 bis 650 nm auf. </li><li> Das konfokale Blende ist standardmäßig auf 175 um eingestellt und optimale Blende muss auf 300 um manuell eingestellt werden. </li><li> Nehmen Bild von Stapelserien horizontale optische Schnitte (800 x 800 Pixel) von 0,4 um Dicke. </li></ul></li></ol> HINWEIS: Ein 40X-Objektiv ist sinnvoll, mehrere Zellen gleichzeitig zu beobachten und funktioniert gut für Organelle Betrachtung. , Räumliche Auflösung und Signalintensität sind jedoch better erreicht mit einem 60x Öl-Objektiv. Darüber hinaus gibt es keine Anregung oder Emission Übersprechen zwischen den beiden Farbstoffen. 7. Kalibrierung von pH-Messsonden <ol><li> Vor der Kalibrierung entfernen Medium von der Kulturschale zuvor mit HPTS und SNARF-1 inkubiert, zweimal mit sterilem PBS und dann 2 ml einer der fünf Kalibrierungslösungen. </li><li> Legen Sie die Kulturschale in die konfokale Stufenkammer. </li><li> Fahren Sie mit Zeitraffer-Bildaufnahme nach den folgenden Einstellungen: <ol><li> Stellen Sie die Anzahl der Bilder und Intervalldauer Zeiten für das Experiment. Hinweis: Wir verwenden in der Regel eine 1 min Intervall zwischen den Bildern für bis zu 30 min. </li><li> Programmieren Sie den Auslöser, um zwischen dem Erwerb von jedem Bild zu schließen. </li></ol></li><li> Notieren Sie sich die Fluoreszenzintensität pro min in einem Tabellenkalkulationssoftware und bestimmen Sie die Zeit, in der Fluoreszenzintensität ist stabil. Die intrazelluläre pH-Wert in der Regel nach 15 stabil - 20 min. </li><li> REPEAT Schritte 7.1 bis 7.4 mit einer neuen Kulturschale für jede verbleibende Kalibrierungslösung. </li></ol> 8. Datenerfassung <ol><li> Sobald die Kalibrierung durchgeführt wurde, zu erwerben Beispieldaten 4-5 zufällig ausgewählten Feldern mit 15-20 Zellen pro Feld. Zwei Bilder werden für jedes Feld erhalten: eine für HPTS Kennzeichnung (Vesikel) und die zweite für SNARF-1-Kennzeichnung (Cytosol). </li><li> Hintergrundfluoreszenz (extrazellulären Bereich) ist digital von Fluoreszenzbilder der beiden Sonden abgezogen. Beschriftete Vesikel und Cytosol von ihren jeweiligen gespeicherten Bilder werden mit Hilfe eines binären Maske ausgewählt. Für jeden pH-Messfühler sind Fluoreszenzintensitäten auf einer numerischen Skala (0-4,095 Graustufenskala) gemessen. Eine mittlere Intensität aller Pixel in der Organelle oder Zytoplasma wird berechnet und die Werte werden verwendet, um Fluoreszenz-Verhältnisse zu berechnen. </li></ol> 9. Datenanalyse <ol><li> Verschiedene Software-Pakete sind für die Datenanalyse im Handel erhältlich. DhFluoView Software. </li><li> In einer Tabellenkalkulation, Datensatzwerte und berechnen Fluoreszenzverhältnisse wie folgt: Im Fall von HPTS, R = (F 458 nm / F 405 nm) und, im Fall von SNARF-1, R = (F 644 nm / F 584 nm ). </li><li> Zeichnen Sie die Daten mit Hilfe wissenschaftlicher Grafik-Software wie GraphPad Prism. Das Grundstück sollte Fluoreszenzverhältnisse (Y-Achse) in Abhängigkeit von pH-Wert (X-Achse) zu porträtieren. Kurvenanpassung unter Verwendung nicht-linearer Regression gelöst. </li><li> Sammeln Fluoreszenzintensitäten der Proben, wie in Schritt 8.2 beschrieben und berechnen Fluoreszenzverhältnisse. Verwenden Eichkurven-Verhältnisse in pH-Werte zu transformieren. </li></ol>

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Quantitative pH-Messung in lebenden Zellen von verschiedenen zellulären Kompartimenten wird benötigt, um pH-Schwankungen in Zell-Antworten auf externen Herausforderungen genau zu messen. Allerdings ist eine der größten Hürden, die bleibt, um einfach und gezielt zellulären Kompartimenten. In diesem Zusammenhang haben einige Studien den Einsatz von HPTS als intrazellulärer pH-Indikator durch Elektroporation oder Mikroinjektion in Zellen eingebracht 8-10 hervorgehoben. Diese Techniken leiden unter schwerw...

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="872">
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td colspan="4" height="20" style="height:20px;width:872px;">Solutions for calibration</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:303px;">Sodium chloride</td>
			<td style="width:136px;">Fischer</td>
			<td style="width:119px;">L-11621</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:303px;">Potassium chloride</td>
			<td style="width:136px;">Fischer</td>
			<td style="width:119px;">M-12445</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:303px;">D-Glucose (dextrose)</td>
			<td style="width:136px;">Fischer</td>
			<td style="width:119px;">D16-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:303px;">Magnesium sulfate</td>
			<td style="width:136px;">Fischer</td>
			<td style="width:119px;">M65-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:303px;">HEPES</td>
			<td style="width:136px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">H3375</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:303px;">Calcium chloride dihydrate</td>
			<td style="width:136px;">Fischer</td>
			<td style="width:119px;">M-1612</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:303px;">Deionized water</td>
			<td style="width:136px;">N/A</td>
			<td style="width:119px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:303px;">Nigericin</td>
			<td style="width:136px;">Calbiochem</td>
			<td align="right" style="width:119px;">481990</td>
			<td>Toxic by inhalation or in contact with skin</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:303px;"></td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:315px;">Keep protected from the light at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:303px;"></td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:315px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:303px;">Culture dishes &#8709; 35mm</td>
			<td style="width:136px;">BD Biosciences</td>
			<td align="right" style="width:119px;">354456</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:303px;"></td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td colspan="4" height="20" style="height:20px;width:872px;">pH-sensing probes</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:303px;">8-Hydroxypyrene-1,3,6-trisulfonic acid (HPTS)</td>
			<td style="width:136px;">Life technologies</td>
			<td style="width:119px;">H-348</td>
			<td>Keep away from the light at room temperature</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:303px;">5-(and-6)-Carboxy SNARF&#174;-1, Acetoxymethyl Ester, Acetate</td>
			<td style="width:136px;">Life technologies</td>
			<td style="width:119px;">C-1271</td>
			<td>Keep away from the light and humidity at -20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:303px;"></td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:303px;">Dimethyl Sufoxide (DMSO)</td>
			<td style="width:136px;">Fischer</td>
			<td style="width:119px;">BP231-1&#160;</td>
			<td>Harmful</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:303px;"></td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td colspan="4" height="20" style="height:20px;width:872px;">Phosphate buffered saline (PBS) 100X</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:303px;">Potassium chloride</td>
			<td style="width:136px;">Fischer</td>
			<td style="width:119px;">M-12445</td>
			<td>20 g</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:303px;">Sodium phosphate monobasic</td>
			<td style="width:136px;">Fischer</td>
			<td style="width:119px;">S369-1</td>
			<td>115 g</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:303px;">Potassium phosphate monobasic</td>
			<td style="width:136px;">J.T Baker</td>
			<td style="width:119px;">3246-01</td>
			<td>20 g</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:303px;">Deionized water</td>
			<td style="width:136px;">N/A</td>
			<td style="width:119px;">N/A</td>
			<td>Bring to 1 L</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:303px;">Autoclave and adjust pH to 7.4</td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:303px;"></td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td colspan="4" height="20" style="height:20px;width:872px;">Phosphate buffered saline (PBS) 1X</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:303px;">PBS 100X</td>
			<td style="width:136px;">N/A</td>
			<td style="width:119px;">N/A</td>
			<td>50 mL</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:303px;">Sodium chloride</td>
			<td style="width:136px;">Fischer</td>
			<td style="width:119px;">L-11621</td>
			<td>40,5 g</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:303px;">Deoinized water</td>
			<td style="width:136px;">N/A</td>
			<td style="width:119px;">N/A</td>
			<td>Bring to 5 L</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:303px;"></td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td colspan="4" height="20" style="height:20px;width:872px;">pH modulators</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:303px;">&#160;Bafilomycin A1</td>
			<td style="width:136px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">B-1793</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">5-(N-Ethyl-N-isopropyl)amiloride (EIPA)</td>
			<td style="width:136px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">A3085</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:303px;">Ammonium chloride</td>
			<td style="width:136px;">Fischer</td>
			<td style="width:119px;">A649-500</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
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simultaneous ph measurement in endocytic and cytosolic compartments in living cells using confocal microscopy

Intracellular pH is tightly regulated and differences in pH between the cytoplasm and organelles have been reported1. Regulation of cellular pH is crucial for homeostatic control of physiological processes that include: protein, DNA and RNA synthesis, vesicular trafficking, cell growth and cell division. Alterations in cellular pH homeostasis can lead to detrimental functional changes and promote progression of various diseases2. Various methods are available for measuring intracellular pH but very few of these allow simultaneous measurement of pH in the cytoplasm and in organelles. Here, we describe in detail a rapid and accurate method for the simultaneous measurement of cytoplasmic and organellar pH by using confocal microscopy on living cells3. This goal is achieved with the use of two pH-sensing ratiometric dyes that possess selective cellular compartment partitioning. For instance, SNARF-1 is compartmentalized inside the cytoplasm whereas HPTS is compartmentalized inside endosomal/lysosomal organelles. Although HPTS is commonly used as a cytoplasmic pH indicator, this dye can specifically label vesicles along the endosomal-lysosomal pathway after being taken up by pinocytosis3,4. Using these pH-sensing probes, it is possible to simultaneously measure pH within the endocytic and cytoplasmic compartments. The optimal excitation wavelength of HPTS varies depending on the pH while for SNARF-1, it is the optimal emission wavelength that varies. Following loading with SNARF-1 and HPTS, cells are cultured in different pH-calibrated solutions to construct a pH standard curve for each probe. Cell imaging by confocal microscopy allows elimination of artifacts and background noise. Because of the spectral properties of HPTS, this probe is better suited for measurement of the mildly acidic endosomal compartment or to demonstrate alkalinization of the endosomal/lysosomal organelles. This method simplifies data analysis, improves accuracy of pH measurements and can be used to address fundamental questions related to pH modulation during cell responses to external challenges.

Für die gleichzeitige Messung von pH-Wert sowohl in der intrazellulären und der endosomalen / lysosomalen Zellkompartimenten wurden die ratiometrische Fluoreszenz-pH-Messfühler SNARF-1 und HPTS verwendet. SNARF-1 ist mit dem Zytosol beschränkt wohin HPTS ermöglicht ratiometrische pH-Messung der endosomalen / lysosomalen Kompartiment. Zellbeladung mit HPTS für 16 Stunden ermöglicht seine selektive Lokalisierung in Endosomen / Lysosomen 4. Ein typisches Beispiel der Fluoreszenz von HT-1080-Zellen mit den...

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Simultaneous pH Measurement in Endocytic and Cytosolic Compartments in Living Cells using Confocal Microscopy

Several methods are available for measuring intracellular pH but very few of these allow simultaneous measurement of cytoplasmic and organellar pH. Here, we describe in detail a rapid and accurate methodology to simultaneously measure cytoplasmic and vesicular pH by ratiometric imaging of living cells.

Gleichzeitige pH-Messung in endozytischen und Cytosolic Fächer in lebenden Zellen mittels konfokaler Mikroskopie

Intracellular pH is tightly regulated and differences in pH between the cytoplasm and organelles have been reported1. Regulation of cellular pH is crucial ...

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Research

JoVE Journal

Biology

14.9K Aufrufe.  Université de Sherbrooke. Several methods are available for measuring intracellular pH but very few of these allow simultaneous measurement of cytoplasmic and organellar pH. Here, we describe in detail a rapid and accurate methodology to simultaneously measure cytoplasmic and vesicular pH by ratiometric imaging of living cells. 