We thank Ellen Ytebrouck for her valuable information regarding method application in rat. This work was supported by the Research Council of the KU Leuven (OT09/22) and the Fund for Scientific Research-Flanders (FWO Vlaanderen). Jeroen Aerts is supported by a Ph.D. fellowship of the Agency for Innovation through Science and Technology Flanders (IWT Vlaanderen) and Julie Nys by a Ph.D. grant from FWO Flanders.

Alle Experimente wurden von der ethischen Forschungsausschuss der KU Leuven zugelassen und waren in strikter Übereinstimmung mit der EG-Richtlinie des Rates vom 22. September 2010 (2010/63 / EU) und mit der belgischen Gesetzgebung (KB vom 29. Mai 2013). Jede mögliche Anstrengung wurde gemacht, um das Leiden der Tiere zu minimieren und die Anzahl der Tiere zu reduzieren. 1. Tier Behandlung und Anästhetika <ol><li> Betäuben die Maus mit einer intraperitonealen Injektion einer Mischung von Ketamin-Hydrochlorid (75 mg / ml) und Medetomidin-Hydrochlorid (1 mg / kg) in Salzlösung. </li><li> Überprüfen Sie die Reflexe durch Kneifen Sie die Zehen mit einer Pinzette, um sicherzustellen, die Maus ist komplett sediert. </li><li> Gelten 70% Ethanol, die Augenlider und die Region rund um das Auge mit einem Wattestäbchen zu desinfizieren. Überprüfen Sie das Augenlid Reflex zusätzlich beurteilen den Grad der Sedierung. </li></ol> 2. Entfernen der Augen <ol><li> Stellen Sie sicher, das Tier befindet sich auf einem ebenen, trockenen undglatte Oberfläche. </li><li> Sterilisieren eine Zange mit einer gebogenen, gezackten Spitze (bevorzugt Spitzengröße: 0,5 x 0,4 mm). </li><li> Drücken Sie vorsichtig auf die Augenwinkel (Augenwinkel) mit der Zange, bis der Augapfel aus der Steckdose verdrängt und der Sehnerv erreichbar ist. </li><li> Führen Sie die Zange hinter dem Auge. Drücken und halten Sie den Sehnerv fest, vorzugsweise mit dem Beginn der Kurve und nicht der Spitze der Zange. Dies wird helfen, die Welt aus der Steckdose zu heben und die komplette Sehnerv klemmen. </li><li> Machen Sie kreisende Bewegungen mit der Hand, die Zange in der Richtung mit dem geringsten Widerstand, während die Maus auf der flachen Oberfläche bleibt. Die Maus wird entlang der Oberfläche schwingt entsprechend der Richtung der Bewegung der Hand. </li><li> Führen diese Aktion mit allmählich zunehmender Geschwindigkeit, bis der Sehnerv in zwei schnürt (in der Regel zwischen 7 bis 15 Kreisbewegungen, etwa eine halbe bis eine volle Umdrehung pro Sekunde). Daher ist die freistehende Augapfelentfernt. </li></ol> 3. post-operative Betreuung <ol><li> Im Falle von Blutungen (selten), füllen die Umlaufbahn mit einer viskosen Koagulat und blutstillendes Mittel. </li><li> Kehren Sie die Anästhesie durch Injektion von 1 mg / kg atipamezol Hydrochlorid in Kochsalzlösung intraperitoneal. </li><li> Verwalten 1 mg / kg Meloxicam intraperitoneal alle 24 Stunden, um Schmerzen zu lindern. </li><li> Augensalbe anwenden, um den verbleibenden Auge zu Austrocknung der Hornhaut zu verhindern. </li><li> Lassen Sie das Tier zurück auf einer Heizplatte oder wickeln Sie das Tier in Isoliermaterial in einem separaten Käfig, um die Körpertemperatur zu steuern. </li><li> Messen des Gewichts der Maus jeden Tag für mindestens 2 Tage. Gewichtsverlust kann Leiden zeigen und in diesem Fall weiterhin Meloxicam Behandlung, bis das Tier vollständig wiederhergestellt wird. </li></ol>

<ol>
	<li>Toldi, J., Feh&#233;r, O., Wolff, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+plasticity+induced+by+neonatal+monocular+(and+binocular)+enucleation.">Neuronal plasticity induced by neonatal monocular (and binocular) enucleation.</a> Progress in Neurobiology. 48 (3), 191-218 (1996).</li><li>Steeves, J. K. E., Gonz&#225;lez, E. G., Steinbach, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vision+with+one+eye:+a+review+of+visual+function+following+unilateral+enucleation.">Vision with one eye: a review of visual function following unilateral enucleation.</a> Spatial vision. 21 (6), 509-529 (2008).</li><li>Van Brussel, L., Gerits, A., Arckens, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+cross-modal+plasticity+in+adult+mouse+visual+cortex+following+monocular+enucleation.">Evidence for cross-modal plasticity in adult mouse visual cortex following monocular enucleation.</a> Cerebral Cortex. 21 (9), 2133-2146 (2011).</li><li>Nys, J., Aerts, J., Ytebrouck, E., Vreysen, S., Laeremans, A., Arckens, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cross-modal+aspect+of+mouse+visual+cortex+plasticity+induced+by+monocular+enucleation+is+age-dependent.">The cross-modal aspect of mouse visual cortex plasticity induced by monocular enucleation is age-dependent.</a> Journal of Comparative Neurology. 522 (4), 950-970 (2014).</li><li>Mahajan, V. B., Skeie, J. M., Assefnia, A. H., Mahajan, M., Tsang, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+eye+enucleation+for+remote+high-throughput+phenotyping.">Mouse eye enucleation for remote high-throughput phenotyping.</a> Journal of Visualized Experiments. (57), e57 (2011).</li><li>Morales, B., Choi, S. -. Y., Kirkwood, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dark+rearing+alters+the+development+of+GABAergic+transmission+in+visual+cortex.">Dark rearing alters the development of GABAergic transmission in visual cortex.</a> Journal of Neuroscience. 22 (18), 8084-8090 (2002).</li><li>Chen, X. J., Rasch, M. J., Chen, G., Ye, C. Q., Wu, S., Zhang, X. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Binocular+input+coincidence+mediates+critical+period+plasticity+in+the+mouse+primary+visual+cortex.">Binocular input coincidence mediates critical period plasticity in the mouse primary visual cortex.</a> Journal of Neuroscience. 34 (8), 2940-2955 (2014).</li><li>Konur, S., Yuste, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+regulation+of+spine+and+filopodial+motility+in+primary+visual+cortex:+Reduced+effects+of+activity+and+sensory+deprivation.">Developmental regulation of spine and filopodial motility in primary visual cortex: Reduced effects of activity and sensory deprivation.</a> Journal of Neurobiology. 59 (2), 236-246 (2004).</li><li>Parrilla-Reverter, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time-course+of+the+retinal+nerve+fibre+layer+degeneration+after+complete+intra-orbital+optic+nerve+transection+or+crush:+A+comparative+study.">Time-course of the retinal nerve fibre layer degeneration after complete intra-orbital optic nerve transection or crush: A comparative study.</a> Vision Research. 49 (23), 2808-2825 (2009).</li><li>Galindo-Romero, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Axotomy-induced+retinal+ganglion+cell+death+in+adult+mice:+Quantitative+and+topographic+time+course+analyses.">Axotomy-induced retinal ganglion cell death in adult mice: Quantitative and topographic time course analyses.</a> Experimental Eye Research. 92 (5), 377-387 (2011).</li><li>Kanold, P. O., Kim, Y. A., GrandPre, T., Shatz, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Co-regulation+of+ocular+dominance+plasticity+and+NMDA+receptor+subunit+expression+in+glutamic+acid+decarboxylase-65+knock-out+mice.">Co-regulation of ocular dominance plasticity and NMDA receptor subunit expression in glutamic acid decarboxylase-65 knock-out mice.</a> The Journal of Physiology. 587 (12), 2857-2867 (2009).</li><li>Van Brussel, L., Gerits, A., Arckens, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+localization+of+functional+subdivisions+in+the+visual+cortex+of+the+adult+mouse.">Identification and localization of functional subdivisions in the visual cortex of the adult mouse.</a> Journal of Comparative Neurology. 514 (1), 107-116 (2009).</li><li>Avwenagha, O., Bird, M. M., Lieberman, A. R., Yan, Q., Campbell, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patterns+of+expression+of+brain-derived+neurotrophic+factor+and+tyrosine+kinase+B+mRNAs+and+distribution+and+ultrastructural+localization+of+their+proteins+in+the+visual+pathway+of+the+adult+rat.">Patterns of expression of brain-derived neurotrophic factor and tyrosine kinase B mRNAs and distribution and ultrastructural localization of their proteins in the visual pathway of the adult rat.</a> Neuroscience. 140 (3), 913-928 (2006).</li><li>Hernandes, M. S., Britto, L. R. G., Real, C. C., Martins, D. O., Lopes, L. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reactive+oxygen+species+and+the+structural+remodeling+of+the+visual+system+after+ocular+enucleation.">Reactive oxygen species and the structural remodeling of the visual system after ocular enucleation.</a> Neuroscience. 170 (4), 1249-1260 (2010).</li><li>Cuyvers, A., Paulussen, M., Smolders, K., Hu, T. -. T., Arckens, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+cell+proliferation+upon+enucleation+in+direct+retinal+brain+targets+in+the+visual+system+of+the+adult+mouse.">Local cell proliferation upon enucleation in direct retinal brain targets in the visual system of the adult mouse.</a> Journal of Experimental Neuroscience. 4, 1-15 (2010).</li><li>Smith, S. L., Trachtenberg, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experience-dependent+binocular+competition+in+the+visual+cortex+begins+at+eye+opening.">Experience-dependent binocular competition in the visual cortex begins at eye opening.</a> Nature Neuroscience. 10 (3), 370-375 (2007).</li><li>Toldi, J., Farkas, T., V&#246;lgyi, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neonatal+enucleation+induces+cross-modal+changes+in+the+barrel+cortex+of+rat.+A+behavioural+and+electrophysiological+study.">Neonatal enucleation induces cross-modal changes in the barrel cortex of rat. A behavioural and electrophysiological study.</a> Neuroscience Letters. 167 (1-2), 1-4 (1994).</li><li>Newton, J. R., Sikes, R. W., Skavenski, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cross-modal+plasticity+after+monocular+enucleation+of+the+adult+rabbit.">Cross-modal plasticity after monocular enucleation of the adult rabbit.</a> Experimental Brain Research. 144 (4), 423-429 (2002).</li><li>Lalonde, J., Chaudhuri, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+changes+in+CREB+phosphorylation+and+neuroadaptive+gene+expression+in+area+V1+of+adult+monkeys+after+monocular+enucleation.">Dynamic changes in CREB phosphorylation and neuroadaptive gene expression in area V1 of adult monkeys after monocular enucleation.</a> Molecular and Cellular Neuroscience. 35 (1), 24-37 (2007).</li><li>You, Y., Gupta, V. K., Graham, S. L., Klistorner, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anterograde+degeneration+along+the+visual+pathway+after+optic+nerve+injury.">Anterograde degeneration along the visual pathway after optic nerve injury.</a> PLoS ONE. 7 (12), e52061 (2012).</li><li>Kelly, K. R., McKetton, L., Schneider, K. A., Gallie, B. L., Steeves, J. K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+anterior+visual+system+development+following+early+monocular+enucleation.">Altered anterior visual system development following early monocular enucleation.</a> NeuroImage: Clinical. 4, 72-81 (2014).</li><li>Chow, A. M., Zhou, I. Y., Fan, S. J., Chan, K. W. Y., Chan, K. C., Wu, E. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabolic+changes+in+visual+cortex+of+neonatal+monocular+enucleated+rat:+a+proton+magnetic+resonance+spectroscopy+study.">Metabolic changes in visual cortex of neonatal monocular enucleated rat: a proton magnetic resonance spectroscopy study.</a> International Journal of Developmental Neuroscience. 29 (1), 25-30 (2011).</li><li>Dyer, R. S., Hammond, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+enucleation+in+retinal+degenerate+mice.">Effects of enucleation in retinal degenerate mice.</a> Physiology &amp; behavior. 14 (2), 207-210 (1975).</li><li>Smith, S. A., Bedi, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unilateral+eye+enucleation+in+adult+rats+causes+neuronal+loss+in+the+contralateral+superior+colliculus.">Unilateral eye enucleation in adult rats causes neuronal loss in the contralateral superior colliculus.</a> Journal of Anatomy. 190 (4), 481-490 (1997).</li><li>Gonzalez, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+monocular+enucleation+on+calbindin-D+28k+and+c-Fos+expression+in+the+lateral+geniculate+nucleus+in+rats.">Effects of monocular enucleation on calbindin-D 28k and c-Fos expression in the lateral geniculate nucleus in rats.</a> Okajimas folia anatomica Japonica. 82 (1), 9-18 (2005).</li><li>Faguet, J., Maranhao, B., Smith, S. L., Trachtenberg, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ipsilateral+eye+cortical+maps+are+uniquely+sensitive+to+binocular+plasticity.">Ipsilateral eye cortical maps are uniquely sensitive to binocular plasticity.</a> Journal of Neurophysiology. 101 (2), 855-861 (2008).</li><li>Van der Gucht, E., Hof, P. R., Van Brussel, L., Burnat, K., Arckens, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurofilament+protein+and+neuronal+activity+markers+define+regional+architectonic+parcellation+in+the+mouse+visual+cortex.">Neurofilament protein and neuronal activity markers define regional architectonic parcellation in the mouse visual cortex.</a> Cerebral Cortex. 17 (12), 2805-2819 (2007).</li><li>Chaudhuri, A., Matsubara, J. A., Cynader, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+activity+in+primate+visual+cortex+assessed+by+immunostaining+for+the+transcription+factor+Zif268.">Neuronal activity in primate visual cortex assessed by immunostaining for the transcription factor Zif268.</a> Visual Neuroscience. 12 (1), 35-50 (1995).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

Um eine erfolgreiche Enukleation nach unserer Methode durchzuführen, die wichtigsten Schritte zu beachten sind: 1) mit einer Pinzette mit gebogener Spitze und gezackten der entsprechenden Größe; 2) die Durchführung der Enukleation auf eine glatte und trockene Oberfläche; und 3) nach und nach die Beschleunigung der kreisenden Bewegungen in die Richtung mit der geringsten Reibung. Für eine effektive Ergebnis ist es wichtig, den geeigneten Zange gekennzeichnet durch einen gekrümmten und gezackten Spitze verwenden (bevorzugte Spitze Größe: Maus: 0,5 x 0,4 mm; Ratte: 2,15 x 1,3 mm). Die Krümmung ermöglicht eine gute Anbindung an den Sehnerv nach Augapfel Hubraum und ist für die korrekte Platzierung der Hand notwendig, wenn die Durchführung der kreisenden Bewegungen. Glatte Tipps sind nicht zu empfehlen, da sie nicht die notwendige Griff, wenn die Sehnerven. Wird der Sehnerv in den kreisenden Bewegungen richtig zu halten führt zu Bruch der Augenarterie, schlechte Ablösung des Auges und damit schlechte Reproduzierbarkeit.Daher ist es zum ersten Training am eingeschläfert Tiere für die Optimierung der Zange Handhabung, um eine maximale Tierschutz einmal die Anwendung der Methode in vivo zu gewährleisten wird empfohlen, diese Technik. Erfolgreicher Augen Enukleation kürzlich auch in der Ratte in unserem Labor unter Verwendung der gleichen Technik mit Ausnahme der Drehung des Tierkörpers manuell und halten die stationären Zange durchgeführt. Eine Einschränkung der Technik ist, dass es möglicherweise die Netzhaut schädigen. Daher ist diese Methode für das Sammeln von Netzhaut der Histologie 5 ausführen weniger geeignet. Darüber hinaus ist unser Verfahren beschränkt auf Augenöffnung Alter veröffentlichen, da der Augapfel muss aus der Steckdose verlagert werden, ohne das Abtragen oder Schneiden die Augenlider. Augen Enukleation in verschiedenen Arten, einschließlich Nagetiere, wird routinemäßig unter Verwendung von alternativen Verfahren, die häufig zur Folge der Entfernung der Augenlider und Schneiden des Sehnervs 18,23-25. Diese Methods sind eher invasiv und haben eine höhere Lernkurve als die hier beschriebenen Technik. Ohne die Notwendigkeit zur Entfernung oder Vernähen der Augenlider, die nach der Operation Wiederherstellungszeit minimiert, was zu höheren Tierschutz und mehr reproduzierbare Ergebnisse.

Entfernen Sie ein Auge und damit irreversibel zerstörende die sensorische Empfangsfläche (Retina), erlegt einen erheblichen Verlust der sensorischen Eingangs entlang der Sehbahn. Die Enukleation Modell in der jugendlichen und erwachsenen visuelle System hat sich bewährt in das Verständnis der Entwicklung, Plastizität und Funktion der verschiedenen visuellen Zentren 1-4 sein. Die molekularen, zellulären und physiologischen Folgen dieser sensorische Deprivation kann Einblicke in die normale Entwicklung, wie reguliert wird und wie etablierte kortikalen Schaltkreisen zu bewältigen und ändern ihre Struktur und Funktion in Reaktion auf eine solche umfassende Veränderung in der Erfahrung. Verschiedene Methoden der visuellen Deprivation existieren und sie alle haben ihre spezifischen Vorteile in der Vision-Forschung haben. Zum Beispiel dunkel Aufzucht spezifisch eliminiert visuell getrieben Aktivität noch berührt sie nicht die spontane Netzhautaktivität. Ebenso Deckel Nähte oder Augenklappen entfernen gemusterten Visualisierungsl Eingabe ohne Spontanaktivität zu stören, sondern sie ermöglichen verteilten Lichteinfall durch die geschlossenen Augen. Diese Methoden sind reversibel und haben gezeigt, dass wertvolle für das Verständnis der Rolle der gemusterten Vision und Low-Level-Eingänge Korrelation von Fernglas in Bildhauerei kortikalen Schaltkreisen während der Entwicklung 6-8 sein. In der Glaukomforschung, hat der Sehnerv verknallt Modell bei erwachsenen Tieren weit verbreitet, weil es wird ein fortschreitenden Verlust von retinalen Ganglienzelle Eingänge, die den Sehnerv bilden 9,10. Auf der anderen Seite, Enukleation, wo das Auge und damit die Retina vollständig und sofort entfernt wird, ist die geeignete Wahl der Benachteiligung wenn das Ziel ist, irreversibel zu entfernen sowohl spontan als auch strukturierte Sicht auf einmal. Es induziert auch eine robuste intraokularen Aktivität Ungleichgewicht, welches das Signal-Rausch-Verhältnis der Aktivität Kartierungsstudien 11,12 erweitern kann. Vergleichen funktionellen und strukturellen Veränderungen in Reaktion auf Enukleation mit those nach Entzug von weniger drastischen Methoden wie Deckel Naht zum Beispiel, könnte auch neue Einblicke in die Rolle der spontanen Aktivität der Netzhaut in beiden homöostatischen und synaptische Plastizität Typen aus. Enukleation löst einen Verlust der trophischen Einflüsse in direkter Netzhaut Ziele. So sind beispielsweise BDNF-Spiegel signifikant in der seitlichen Kniehöcker (LGN) und Colliculus superior der erwachsenen Ratten entkernte 13 herunterreguliert. Reaktive Sauerstoffspezies, die als Botenstoffe fungieren, um strukturelle Umbau zu vermitteln, wurden auch in subkortikalen Strukturen der erwachsenen Ratte visuelle System 14 erfasst. Außerdem Mikroglia und Astroglia-Aktivierung in verschiedenen subkortikalen visuellen Zielstrukturen in der Maus treten in einem bestimmten Post-Ausschälung Zeitrahmen von einer Woche 15. Zusammen, Optik Deafferentation Ergebnisse in verschiedenen subkortikalen Reaktionen an der Glia, strukturellen und molekularen Ebene. Trotz dieser subkortikalenEffekte, bedeutet dies nicht zwangsläufig implizieren Wirkungen an der kortikalen Ebene 16. Bemerkenswert, verkehrsträgerübergreif kortikale Plastizität, einschließlich Änderungen in anderen Sinnesbereichen neben der Stärkung der nicht-visuelle Eingänge zum beraubt visuellen Kortex auftreten, nachdem sowohl monokulare (ME) 3,4,17,18 und Fernglas (BE) 1,17 Enukleation. Neben dem Beitrag zur visuellen Neurowissenschaften, können Enukleation als eine Art Deafferentation verwendet werden, um die Balance zwischen neuroprotektiven 19 und neurodegenerative 20-22 Eigenschaften des zentralen Nervensystems zu untersuchen. Verschiedene Verfahren zur Enukleation durchführen, sind bereits in der Literatur beschrieben. Bestimmte Methoden zur in-vivo-ME bei Ratten und Mäusen sind weniger einfach durch unnötige Schnitte Orbital Muskeln und Gewebe 23-25. Andere Publikationen wie Mahajan et al. (2011) 5 eine detaillierte Protokoll mit<html> stumpf für ein Hochdurchsatz-Sammlung von Augen, die Genotyp-Phänotyp-Korrelationen, wahrscheinlich post-mortem zu studieren. Für ihren Zweck, ist das Verfahren schnell und bequem. Jedoch ist dieses Verfahren für die In-vivo-Enukleation weniger geeignet, wenn man entscheidet, den afferenten Sehbahn folgenden Enukleation (in lebenden Tieren) anstelle des Auges selbst zu studieren. In einer solchen Umgebung ist von großer Bedeutung, post-Enukleation Überleben. Auch minimale Schäden in vivo und die Erhaltung der Sehnerv und Augenhöhlengewebe ist günstig. Hier präsentieren wir eine alternative Methode Enukleation, mehr ähnlich dem von Faguet et al (2008) 26, dass bestimmte vorteilhaften Eigenschaften bietet:. Sie mit einer schnellen postoperativen Erholung verbunden ist und sich durch eine sehr niedrige Schwelle Lern gekennzeichnet für Forscher. Im Allgemeinen sind die verschiedenen Methoden ergänzen je nach Schwerpunkt der späteren Forschung: Augen Morphologie oder Sehbahn Forschung. ve_content &quot;&gt; In der Summe kann Ausschälung von der Vision der Forschung auf Untersuchungen von Homöostase und Cross-modale Plastizität des Gehirns, Glia-Antworteigenschaften und Stabilität Axon angewendet werden. In diesem visualisiert Artikel zeigen wir eine praktikable und zuverlässige Methode zur in-vivo-Augen Enukleation in die Maus.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Ketamine hydrochloride (Anesketin)</td>
			<td>Dechra Veterinary Products (Eurovet)</td>
			<td>BE-V136516</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medetomidine hydrochloride (Domitor)</td>
			<td>Orion Corporation (Janssen Animal Health)</td>
			<td>BE-V151742</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Atipamezol hydrochloride (Antisedan)</td>
			<td>Orion Corporation (Elanco Animal Health)</td>
			<td>BE-V153352</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Meloxicam (Metacam)</td>
			<td>Boehringer Ingelheim Vetmedica</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eye ointment (Fucithalmic)</td>
			<td>Leo Pharma nv-sa</td>
			<td>BE 144654</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Moria MC31 Forceps - Serrated Curved</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11370-31</td>
			<td>For application in the mouse. Any forceps with similar dimensions can be used as long as the tip is curved and serrated.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Narrow Pattern Forceps - Curved</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11003-13</td>
			<td>For application in the rat. Any forceps with similar dimensions can be used as long as the tip is curved and serrated.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemostatic cotton wool</td>
			<td>Qualiphar</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Other hemostatic agents are equally suitable (e.g. Viscostat, #649, Ultradent Products)</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a highly reproducible and straightforward method to perform in vivo ocular enucleation in the mouse after eye opening

Enukleation oder die chirurgische Entfernung eines Auges kann in der Regel als Modell für Nerven Deafferentation berücksichtigt werden. Es stellt ein wertvolles Instrument, um die verschiedenen Aspekte der visuellen, Cross-modale Plastizität und Entwicklungs entlang der Säugetier-visuelle System 1-4 zu studieren. Hier zeigen wir, eine elegante und einfache Methode zur Entfernung von einem oder beiden Augen der Maus, die in den Mäusen 20 Tage alt bis zu Erwachsenen validiert wird. Kurz gesagt wurde eine desinfizierte gebogenen Pinzette wird verwendet, um den Sehnerv hinter dem Auge zu klemmen. Anschließend werden kreisende Bewegungen durchgeführt, um den Sehnerv zu verengen, und entfernen Sie den Augapfel. Die Vorteile dieser Technik sind eine hohe Reproduzierbarkeit, minimale bis keine Blutung, rasche postoperative Erholung und eine sehr geringe Lernschwelle für den Experimentator. Daher kann eine große Menge von Tieren manipuliert und mit minimalem Aufwand verarbeitet werden. Die Art der Technik kann leichte Schäden zu verandie Netzhaut während des Verfahrens. Diese Nebenwirkung ist diese Methode weniger geeignet, da im Vergleich zu Mahajan et al. (2011) 5, wenn das Ziel ist, zu sammeln und zu analysieren, Netzhautgewebe. Auch ist unsere Methode zur postAugenÖffnung Altersgruppen (Maus: P10 - 13 an) beschränkt, da der Augapfel muss aus der Steckdose, ohne die Augenlider zu entfernen verschoben werden. Die in diesem Manuskript beschrieben in vivo Enukleation Technik wurde kürzlich erfolgreich mit geringfügigen Änderungen bei Ratten angewendet und scheint sinnvoll, die afferenten Sehbahn von Nagetieren im allgemeinen zu studieren.

Figur 1 veranschaulicht die erfolgreiche Entfernung des Auges unter Verwendung des beschriebenen Protokolls und wird durch das Fehlen von Blutungen oder einem scheinbaren physikalischen Beschädigung der Orbitalgewebe oder die Augenhöhle (1A, 1B) ist. Darüber hinaus hat das Auge entfernt eine glatte Hornhaut, Aderhaut und Optical Disc, deutet auf einen völlig intakten Welt (Abbildung 1c). Da unser Protokoll umfasst die Klemmung der Sehnerv hinter dem Auge und mechanische Dreh ist der Sehnerv des Auges entfernt verengten an der Basis der Netzhaut (1D). Durchführung der beschriebenen Vorgehensweise führt zu einem sauberen Schnitt Sehnerv, ohne Schäden an der umgebenden Hirnbereich (1E). Monokularen Enukleation in Kombination mit Aktivität Mapping (Abbildung 2), ermöglicht es, die Funktions scharf abzugrenzen oder Augen spezifischen Eingabebereiche in der kontralateralen Visualisierungsl Kortex der Maus 12,27 oder sogar Augendominanz Spalten in höherer Ordnung Säugetiere wie Affen 28. In Experimenten mit Mäusen, die Entfernung von einem (ME) oder beider Augen (BE) mit gezielten visuellen Stimulation und der Detektion von mRNA oder Zif268 c-Fos Protein-Expressionsniveaus kombiniert angewendet, um regionale neuronale Aktivierung in der Sehrinde 12,27 aufzudecken . Im Gegensatz zu optisch stimulierte Kontrollen (Figur 2A), zeigte BE Mäusen basale Aktivität in der Sehrinde aufgrund mangelnder visueller Eingang (2B) zu vervollständigen. Als solche wurden die Grenzen zwischen bildender mit nicht-visuellen Kortex (dh. Somatosensorischen Kortex bei mehreren vorderen Abschnitte und auditorischen Kortex in mehr hinteren Abschnitte) aufgedeckt. Ergebnisse von ME-Mäusen mit einer einwöchigen Überlebenszeit visualisiert die Augen bestimmte Eingabebereiche in der kontralateralen visuellen Kortex. Die beiden monokular angetrieben Regionen waren hypoaktiven und befindet medial und lateral der Mittel binokularen Zone (2C). <img alt="Figur 1" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51936/51936fig1highres.jpg" width="500" /> Abbildung 1. Qualitative Bewertung der post-Enukleation Zustand der Augenhöhle, die entfernt Auges und des Sehnervs. Nach Entfernung des Auges mit einer gebogenen Pinzette (A) kein Ausbluten oder Schäden in der Augenhöhle (B) beobachtet. Das entfernte Auge völlig intakt, wie durch einen normalen Erscheinungsbild der Hornhaut und der Aderhaut (C, D) reflektiert wird. Der Sehnerv ist an der Papille, wo es das Auge (D) lässt schnürt. Prüfung der ventralen Teil des Gehirns zeigt eine saubere Schnitt Sehnerv (Stern) und keine sichtbare Beschädigung an anderen Strukturen (E). Maßstabsbalken in C, D: 1 mm. Balken in E: 5 mm. A: vordere; L: links; P: posterior; R: Richtig. Abbildung 2. Funktions Auge-Eingang spezifische Unterteilungen in der Maus visuellen Kortex durch Enukleation enthüllt. Schwarze und graue Linien, die die Augen und Kortex verbinden stellen die Überquerung der retinalen Afferenzen und das Auge bestimmten Eingangs Regionen. Neuronalen Aktivität auf koronalen Abschnitte der Kontrolle (A) visualisiert, BE (B) und ME (C) Mäusen durch radioaktive in situ Hybridisierung (ISH) für Zif268 (Graustufen) um -3,40 mm Bregma Ebene. In Kontrolltieren (A), der visuelle Kortex in beiden Hemisphären drückt eine hohe Aktivität für die visuelle Stimulation. Wenn eine oder beide Auge (n) ausgerottet werden, ist eine klare Abnahme der Aktivität in entsprechenden Signal beraubt kortikalen Regionen sichtbar. Monokular entkernte (C)-Mäuse zeigen eine Zone mit hoher Activität in der binokularen Region des visuellen Kortex durch eine verminderte Signal in den monokularen Zonen kontralateral zu der entfernten Auge umgeben. Maßstab: 2 mm. Mit Genehmigung von Van Brussel et al 12 abgedruckt.

Watch this Scientific Journal Video about A Highly Reproducible and Straightforward Method to Perform In Vivo Ocular Enucleation in the Mouse after Eye Opening at JoVE.com

A Highly Reproducible and Straightforward Method to Perform In Vivo Ocular Enucleation in the Mouse after Eye Opening

Die Entfernung der Augen, auch als Enukleation, bietet eine nützliche Strategie, um Aspekte der visuellen, Cross-Modal und Entwicklungs Plastizität entlang der Säugetier-visuelle System zu studieren, da es teilweise irreversible induziert (monokulare) oder komplett (Fernglas) Verlust der Sehkraft. Hier beschreiben wir eine hoch reproduzierbare und unkomplizierte Ansatz zur in vivo Enukleation durchzuführen.

Ein hoch reproduzierbare und einfache Methode, um Führen<em&gt; In Vivo</em&gt; Ocular Enukleation in der Maus nach Augenöffnung

Enucleation or the surgical removal of an eye can generally be considered as a model for nerve deafferentation. It provides a valuable tool to study the ...

a-highly-reproducible-straightforward-method-to-perform-vivo-ocular

Research

JoVE Journal

Biology

A Highly Reproducible and Straightforward Method to Perform In Vivo Ocular Enucleation in the Mouse after Eye Opening

23.2K Aufrufe.  KU Leuven - University of Leuven.  Die Entfernung der Augen, auch als Enukleation, bietet eine nützliche Strategie, um Aspekte der visuellen, Cross-Modal und Entwicklungs Plastizität entlang der Säugetier-visuelle System zu studieren, da es teilweise irreversible induziert (monokulare) oder komplett (Fernglas) Verlust der Sehkraft. Hier beschreiben wir eine hoch reproduzierbare und unkomplizierte Ansatz zur in vivo Enukleation durchzuführen. 

Serie: A Highly Reproducible and Straightforward Method to Perform In Vivo Ocular Enucleation in the Mouse after Eye Opening

Pyrosequencing: A Simple Method for Accurate Genotyping

Pharmacogenetic research benefits first-hand from the abundance of information provided by the completion of the Human Genome Project. With such a tremendous amount of data available comes an explosion of genotyping methods. Pyrosequencing(R) is one of the most thorough yet simple methods to date used to analyze polymorphisms. It also has the ability to identify tri-allelic, indels, short-repeat polymorphisms, along with determining allele percentages for methylation or pooled sample assessment. In addition, there is a standardized control sequence that provides internal quality control. This method has led to rapid and efficient single-nucleotide polymorphism evaluation including many clinically relevant polymorphisms. The technique and methodology of Pyrosequencing is explained.


Pyrosequencing(R) is one of the most thorough yet simple methods to date used to analyze polymorphisms. This method has led to rapid and efficient single-nucleotide polymorphism evaluation including many clinically relevant polymorphisms. The technique and methodology of Pyrosequencing is explained.

Pyrosequencing: Eine einfache Methode für genaue Genotypisierung

Pharmacogenetic research benefits first-hand from the abundance of information provided by the completion of the Human Genome Project. With such a ...

Forschung

Biologie

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models. This paper describes the development of an orthotopic mouse model of ovarian cancer, treatment of cancer via oral delivery of drugs, and monitoring of tumor cell behavior in response to drug treatment in real time using in vivo imaging system. In this orthotopic model, ovarian tumor cells expressing luciferase are applied topically by injecting them directly into the mouse bursa where each ovary is enclosed. Upon injection of D-luciferin, a substrate of firefly luciferase, luciferase-expressing cells generate bioluminescence signals. This signal is detected by the in vivo imaging system and allows for a non-invasive means of monitoring tumor growth, distribution, and regression in individual animals. Drug administration via oral gavage allows for a maximum dosing volume of 10 mL/kg body weight to be delivered directly to the stomach and closely resembles delivery of drugs in clinical treatments. Therefore, techniques described here, development of an orthotopic mouse model of ovarian cancer, oral delivery of drugs, and in vivo imaging, are useful for better understanding of human ovarian cancer and treatment and will improve targeting this disease.

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

Orthotopic animal models of ovarian cancer replicate better human disease and therefore enhance our understanding of cancer progression and tumor response to therapy. A mouse model receives an intrabursal injection of luciferase-expressing ovarian tumor cells. Treatment is administered via oral gavage. Tumor growth is monitored by in vivo imaging system.

In-vivo-Imaging und therapeutische Behandlungen in einem orthotopen Mausmodell des Eierstockkrebs

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models.  This paper describes the development of an orthotopic mouse model ...

A Novel Ex vivo Culture Method for the Embryonic Mouse Heart

Developmental studies in the mouse are hampered by the inaccessibility of the embryo during gestation. Thus, protocols to isolate and culture individual organs of interest are essential to provide a method of both visualizing changes in development and allowing novel treatment strategies. To promote the long-term culture of the embryonic heart at late stages of gestation, we developed a protocol in which the excised heart is cultured in a semi-solid, dilute Matrigel. This substrate provides enough support to maintain the three-dimensional structure but is flexible enough to allow continued contraction. In brief, hearts are excised from the embryo and placed in a mixture of cold Matrigel diluted 1:1 with growth medium. After the diluted Matrigel solidifies, growth medium is added to the culture dish. Hearts excised as late as embryonic day 16.5 were viable for four days post-dissection. Analysis of the coronary plexus shows that this method does not disrupt coronary vascular development. Thus, we present a novel method for long-term culture of embryonic hearts.

A Novel Ex vivo Culture Method for the Embryonic Mouse Heart

Developmental studies in the mouse are hampered by the inaccessibility of the embryo during gestation. To promote the long-term culture of the embryonic heart at late stages of gestation, we developed a protocol in which the excised heart is cultured in a semi-solid, dilute Matrigel.

A Novel<em&gt; Ex vivo</em&gt; Kultur Verfahren zur embryonalen Maus Herz

Developmental studies in the mouse are hampered  by the inaccessibility of the embryo during gestation. Thus, protocols to  isolate and culture individual ...

Validation of a Mouse Model to Disrupt LINC Complexes in a Cell-specific Manner

Nuclear migration and anchorage within developing and adult tissues relies heavily upon large macromolecular protein assemblies called LInkers of the Nucleoskeleton and Cytoskeleton (LINC complexes). These protein scaffolds span the nuclear envelope and connect the interior of the nucleus to components of the surrounding cytoplasmic cytoskeleton. LINC complexes consist of two evolutionary-conserved protein families, Sun proteins and Nesprins that harbor C-terminal molecular signature motifs called the SUN and KASH domains, respectively. Sun proteins are transmembrane proteins of the inner nuclear membrane whose N-terminal nucleoplasmic domain interacts with the nuclear lamina while their C-terminal SUN domains protrudes into the perinuclear space and interacts with the KASH domain of Nesprins. Canonical Nesprin isoforms have a variable sized N-terminus that projects into the cytoplasm and interacts with components of the cytoskeleton. This protocol describes the validation of a dominant-negative transgenic mouse strategy that disrupts endogenous SUN/KASH interactions in a cell-type specific manner. Our approach is based on the Cre/Lox system that bypasses many drawbacks such as perinatal lethality and cell nonautonomous phenotypes that are associated with germline models of LINC complex inactivation. For this reason, this model provides a useful tool to understand the role of LINC complexes during development and homeostasis in a wide array of tissues.

Nuclear envelope proteins play a central role in many basic biological processes and have been implicated in a variety of human diseases. This protocol describes a new Cre/Lox-based mouse model that allows for the spatiotemporal control of LINC complexes disruption.

Validierung eines Maus-Modell zu LINC Komplexe Disrupt in einem zellspezifisch

Nuclear migration and anchorage within developing and adult tissues relies heavily upon large macromolecular protein assemblies called LInkers of the ...

Filtration Isolation of Nucleic Acids:  A Simple and Rapid DNA Extraction Method

FINA, filtration isolation of nucleic acids, is a novel extraction method which utilizes vertical filtration via a separation membrane and absorbent pad to extract cellular DNA from whole blood in less than 2 min. The blood specimen is treated with detergent, mixed briefly and applied by pipet to the separation membrane. The lysate wicks into the blotting pad due to capillary action, capturing the genomic DNA on the surface of the separation membrane. The extracted DNA is retained on the membrane during a simple wash step wherein PCR inhibitors are wicked into the absorbent blotting pad. The membrane containing the entrapped DNA is then added to the PCR reaction without further purification. This simple method does not require laboratory equipment and can be easily implemented with inexpensive laboratory supplies. Here we describe a protocol for highly sensitive detection and quantitation of HIV-1 proviral DNA from 100 &#181;l whole blood as a model for early infant diagnosis of HIV that could readily be adapted to other genetic targets.

We describe here a simple and rapid paper-based DNA extraction method of HIV proviral DNA from whole blood detected by quantitative PCR. This protocol can be extended for use in detecting other genetic markers or using alternative amplification methods.

Filtration Isolierung von Nukleinsäuren: Eine einfache und schnelle DNA-Extraktionsmethode

FINA, filtration isolation of nucleic acids, is a novel extraction method which utilizes vertical filtration via a separation membrane and absorbent pad ...

Measuring the Stiffness of Ex Vivo Mouse Aortas Using Atomic Force Microscopy

Arterial stiffening is a significant risk factor and biomarker for cardiovascular disease and a hallmark of aging. Atomic force microscopy (AFM) is a versatile analytical tool for characterizing viscoelastic mechanical properties for a variety of materials ranging from hard (plastic, glass, metal, etc.) surfaces to cells on any substrate. It has been widely used to measure the stiffness of cells, but less frequently used to measure the stiffness of aortas. In this paper, we will describe the procedures for using AFM in contact mode to measure the ex vivo elastic modulus of unloaded mouse arteries. We describe our procedure for isolation of mouse aortas, and then provide detailed information for the AFM analysis. This includes step-by-step instructions for alignment of the laser beam, calibration of the spring constant and deflection sensitivity of the AFM probe, and acquisition of force curves. We also provide a detailed protocol for data analysis of the force curves.

Measuring the Stiffness of Ex Vivo Mouse Aortas Using Atomic Force Microscopy

We present detailed protocols for isolation of aortas from mouse and measurement of their elastic modulus using atomic force microscopy.

Messung der Steifigkeit von<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Maus Aorten Mit Rasterkraftmikroskopie

Arterial stiffening is a significant risk factor and biomarker for cardiovascular disease and a hallmark of aging. Atomic force microscopy (AFM) is a ...

A Method for Islet Transplantation to the Omentum in Mouse

Islet transplantation has been proposed to be a potential treatment for type 1 diabetes. Recent compelling evidence indicates that intravascular islet infusion is far from ideal and therefore, the omentum is re-emerging as a potentially valuable site for islet transplantation. This experiment requires the isolation of high quality islets and the implantation of the islets to the diabetic recipients. Transplantation to the omentum requires surgical steps that can be better demonstrated visually. Here, the detailed steps for this procedure are presented. Two methods of mixing the isolated islets with hydrogel before placing the mixture into the omental pouch of diabetic mice are described here. Different hydrogels are used for the different conditions. Blood glucose levels of diabetic mouse recipients of syngeneic islets in the omentum were monitored for up to 35 days. Some animals were sacrificed after 14 days to perform immuno-histochemical analysis. This pre-clinical transplantation approach can be used as preliminary data leading up to translation to clinical transplantation.

A method for the omental transplantation of islets in a mouse is introduced. The isolated islets are mixed with hydrogel and the mixture is placed into the omental pouch of a diabetic mouse. Then, the blood glucose is monitored, and immuno-histochemical analysis is performed.

Eine Methode zur Inselversetzung, Omentum in Maus

Islet transplantation has been proposed to be a potential treatment for type 1 diabetes. Recent compelling evidence indicates that intravascular islet ...

Efficient Dissection and Culture of Primary Mouse Retinal Pigment Epithelial Cells

Eye disorders affect millions of people worldwide, but the limited availability of human tissues hinders their study. Mouse models are powerful tools to understand the pathophysiology of ocular diseases because of their similarities with human anatomy and physiology. Alterations in the retinal pigment epithelium (RPE), including changes in morphology and function, are common features shared by many ocular disorders. However, successful isolation and culture of primary mouse RPE cells is very challenging. This paper is an updated audiovisual version of the protocol previously published by Fernandez-Godino et al. in 2016 to efficiently isolate and culture primary mouse RPE cells. This method is highly reproducible and results in robust cultures of highly polarized and pigmented RPE monolayers that can be maintained for several weeks on Transwells. This model opens new avenues for the study of the molecular and cellular mechanisms underlying eye diseases. Moreover, it provides a platform to test therapeutic approaches that can be used to treat important eye diseases with unmet medical needs, including inherited retinal disorders and macular degenerations.

This protocol, which was originally reported by Fernandez-Godino et al. in 20161, describes a method to efficiently isolate and culture mouse RPE cells, which form a functional and polarized RPE monolayer within one week on Transwell plates. The procedure takes approximately 3 hours.

Effiziente Dissektion und Kultur der primären Maus retinalen Pigmentepithelzellen

Eye disorders affect millions of people worldwide, but the limited availability of human tissues hinders their study. Mouse models are powerful tools to ...

Determining the Toxicity of UV Radiation and Chemicals on Primary and Immortalized Human Corneal Epithelial Cells

This article describes the methods of measuring the toxicity of ultraviolet (UV) radiation and ocular toxins on primary (pHCEC) and immortalized (iHCEC) human corneal epithelial cell cultures. Cells were exposed to UV radiation and toxic doses of benzalkonium chloride (BAK), hydrogen peroxide (H2O2), and sodium dodecyl sulfate (SDS). Metabolic activity was measured using a metabolic assay. The release of inflammatory cytokines was measured using a multi-plex interleukin (IL)-1&#946;, IL-6, IL-8, and tumor necrosis factor-alpha (TNF-&#945;) assay, and cells were evaluated for viability using fluorescent dyes. 
The damaging effects of UV on cell metabolic activity and cytokine release occurred at 5 min of UV exposure for iHCEC and 20 min for pHCEC. Similar percent drops in metabolic activity of the iHCEC and pHCEC occurred after exposure to BAK, H2O2, or SDS, and the most significant changes in cytokine release occurred for IL-6 and IL-8. Microscopy of fluorescently stained iHCEC and pHCEC BAK-exposed cells showed cell death at 0.005% BAK exposure, although the degree of ethidium staining was greater in the iHCECs than pHCECs. Utilizing multiple methods of assessing toxic effects using microscopy, assessments of metabolic activity, and cytokine production, the toxicity of UV radiation and chemical toxins could be determined for both primary and immortalized cell lines.

This article describes the procedures used to evaluate the toxicity of UV radiation and chemical toxins on a primary and immortalized cell line.

Bestimmung der Toxizität von UV-Strahlung und Chemikalien auf primären und immortalisierten humanen Hornhautepithelzellen

This article describes the methods of measuring the toxicity of ultraviolet (UV) radiation and ocular toxins on primary (pHCEC) and immortalized (iHCEC) ...

A Highly Scalable Approach to Perform Ecological Surveys of Selfing Caenorhabditis Nematodes

Caenorhabditis elegans is one of the major model organisms in biology, but only recently have researchers focused on its natural ecology. The relative sparsity of information about C. elegans in its natural context comes from the challenges involved in the identification of the small nematode in nature. Despite these challenges, an increasing focus on the ecology of C. elegans has caused a wealth of new information regarding its life outside of the laboratory. The intensified search for C. elegans in nature has contributed to the discovery of many new Caenorhabditis species and revealed that congeneric nematodes frequently cohabitate in the wild, where they feed on microbial blooms associated with rotting plant material. The identification of new species has also revealed that the androdioecious mating system of males and self-fertilizing hermaphrodites has evolved three times independently within Caenorhabditis. The other two selfing species, C. briggsae and C. tropicalis, share the experimental advantages of C. elegans and have enabled comparative studies into the mechanistic basis of important traits, including self-fertilization. Despite these advances, much remains to be learned about the ecology and natural diversity of these important species. For example, we still lack functional information for many of their genes, which might only be attained through an understanding of their natural ecology. To facilitate ecological research of selfing Caenorhabditis nematodes, we developed a highly scalable method to collect nematodes from the wild. Our method makes use of mobile data collection platforms, cloud-based databases, and the R software environment to enhance researchers&#39; ability to collect nematodes from the wild, record associated ecological data, and identify wild nematodes using molecular barcodes.

A Highly Scalable Approach to Perform Ecological Surveys of Selfing Caenorhabditis Nematodes

This protocol can be used to perform large-scale ecological surveys of selfing Caenorhabditis nematodes. The primary advantage of this method is the efficient organization and analysis of ecological and molecular data associated with the nematodes collected from nature.

Ein hochgradig skalierbarer Ansatz zur Durchführung ökologischer Untersuchungen von selbstsüchtigen Caenorhabditis-Nematoden

Caenorhabditis elegans is one of the major model organisms in biology, but only recently have researchers focused on its natural ecology. The relative ...