Diese Arbeit wurde durch Zuschüsse aus dem SNF [31003A-138528], der Octav und Marcella Botnar Stiftung, der Novartis-Stiftung und der Emma Muschamp Stiftung. Wir danken Martine Lambelet, und Jean-Christophe Stehle für ihre ausgezeichnete technische Hilfe.

Die Ethikkommission der Universität Lausanne hat den Experimenten, die in Übereinstimmung mit den in der Deklaration von Helsinki 1975 dargelegten Prinzipien sind, wie im Jahr 1983 für die Verwendung von menschlichen Geweben überarbeitet. 1. Menschen Vena saphena magna Ernte <ol><li> Erhalten Überschuss Segmente von nicht-menschlichen Krampfadern Stammvenen von Patienten, die sich einer Bypass-Operation der unteren Extremitäten für Ischämie. Im Operationssaal, desinfizieren Sie die gesamte Bein mit einer Jod-Lösung und drapieren Sie den Patienten an das Bein von der Leiste bis zum Fuß aussetzen. </li><li> Machen Sie eine Medianschnitt von der Leiste bis zum Knie (Verlassen der Hautteil unterbrochen). </li><li> Ernten Sie die Vena saphena magna mit einem Stiel des umliegenden Gewebes (no-touch-Technik). Sichere Seitenäste der Venen mit 4-0 Seidenkrawatten. Mindestens 9 cm lang Überschuss Segment der Vena saphena magna, mit einem Außendurchmesser von 2,5-4 mm sofort bei 4 ° C in einem RPMI-1640-Glutamax Medium mit 12,5% fötalem Kälberserum und bringen sie zum Labor. </li></ol> 2. EVPS Design- <ol><li> Bauen Sie die in Abbildung 1 dargestellten allgemeinen Ausrüstung. Autoklav alle Geräte und halten alle Komponenten unter sterilen Bedingungen. Darüber hinaus muss das System ist wasserdicht und hat keine Chemikalien in das Medium austritt. Verwenden Polymethacrylat- Methyl (PMMA-GS) für die Abdeckung. Stahl (X5 Cr Ni 18 10) und Polyoxymethylen Kunststoff (POM), wie die Vene Unterstützung. </li><li> Entwerfen der Perfusionskammer der gewünschten Geometrie, um die Platzierung der Vene und der Verbindung zu ermöglichen. Sicherstellen, dass die Tiefe (oder Radius bei Verwendung von zylindrischen Aufbau) mindestens 2,5 cm, damit es ermöglicht minimale Biegung und Dilatation des Gefäßes mit konstanter Abdeckung durch das Kulturmedium (1). Dicht ist ein wichtiges Thema und ist der Grund, rechteckige PMMA-GS Bau verwendet wird. </li><li> Gestalten Sie das Venenstütze in die gewünschte geometry. Um Venen Knicken oder über Blähungen zu vermeiden, lassen Längenverstellung durch Drücken oder Ziehen (Schraube nicht zu diesem Zweck verwendet werden, da die Vene würde zusammen mit der Schraube gedreht werden). HINWEIS: Eine vollständige Stahlstange durch 2 verbunden Schiebe L-förmigen Stücke, die die Vene 2 Zylinder unterstützen (5 mm Durchmesser, das Schiff passen) und die Vene (Abbildung 1B und 2) wird hier verwendet. </li><li> Entwerfen der Drucksäule, so daß die &quot;Ruhedruck&quot; an das System angelegt ist: p = 0-10 = hx ρ · g, wobei p = Druck (N / m 2 Pa) h = Höhe der Flüssigkeitssäule (m) ρ = Dichte der Flüssigkeit (kg / m 3) und g = Gravitationskonstante (9,81 m / s 2). Design vier Verbindungskanäle, von oben nach unten: Druck ausüben, für den Austritt (aus der Vene), den Zufluss (auf die Vene) und Mediumwechsel zu ermöglichen. </li><li> Bereiten Sie das Medium. Basierend auf früheren Studien 5,11-14, wählen Sie RPMI-1640, mit Glutamax ergänzt, 12,5% Fötales Kälberserum und 1% Antibiotikum-Antimykotikum-Lösung (10.000 U / ml Penicillin G, plus 10 mg / ml Streptomycinsulfat, und 25 mg / ml Amphotericin B, plus 0,5 ug / ml: Gentamycin). Scherspannung (SS) ist durch SS = 4 μQ / π * r 3 Q angegeben ist die Flussrate (ml / s), R der Radius (cm) des Venensegments, und μ ist die Viskosität der Perfusionsmedium. <ol><li> SS modulieren, indem die Viskosität durch Zugabe von 70 kDa Dextran. Messung der Viskosität mit einem Viskosimeter. Hier, addieren 8% 70 kDa Dextran SS 9-15 eingestellt dyn / cm 2. </li></ol></li><li> Stellen Sie die Getriebepumpe, eine pulsatile Nierensignal von 60 Pulsen / min, und eine konstante Amplitude Erzeugen eines unidirektionalen Fluss von 150 ± 15 ml / min, unabhängig von dem Druck in dem System von einem Computer angelegt und kontrolliert zu induzieren. Sicherzustellen, dass die Antriebs Software integriert konstanten Erfassung und Überwachung von Druck, Strömungsgeschwindigkeit, Pulsrate und Signal. Wenn Sie möchten, können eine zweite Pumpe (nicht synchronized), um eine nicht-laminare, turbulente Strömung zu erzeugen. </li></ol> 3. EVPS Versammlung (Abbildung 1) <ol><li> Bevor Sie beginnen, stellen Sie sicher, alle Geräte steril ist. Führen Sie alle folgenden Schritte im Keimfreiheit in einer Steril. </li><li> Legen Sie die Vene in einer Petrischale mit Medium gefüllt. Verwenden Sie ein Skalpell und teilen Sie die Vene in 3 gleich große Segmente. </li><li> Ein Segment in PBS sofort ausspülen. Teilen Sie das Segment in 3 Teile, fix ein in Formalin für Morphometrie. Frieren die beiden anderen für die quantitative Transkript (RT-PCR) und Protein (Western-Blot) Analyse. Diese Segmente als Kontrolle, nicht-durchblutete Vene. </li><li> Verwenden Sie die 2 verbleibenden Segmente für die Perfusion. <ol><li> Sehr leicht zu injizieren Medium in die Vene und bestimmen die normale Strömungsrichtung; in Gegenwart von Ventilen die Vene wird umgekehrt. </li><li> Abdichten der Venen ist von größter Bedeutung für experimentelle Erfolg. Auf Dichtheit prüfen durch Sicherheiten. Sichern Sie alle Lecks mit 6-0 Seidenfäden. </li> &lt;/ Ol&gt; </li><li> Verbinden der Venenabschnitt zwischen den beiden metallischen Zylinder, dessen eines Ende zu einer Zeit (2.3, 1). Sichern Sie sich die Zylinder mit Ethibon 3-0 um die Vertiefungen (Abbildung 1A und B). <ol><li> Legen Sie die gesamte venöse Segment in der Perfusionskammer zuvor mit Medium gefüllt ist. Wiederholen Sie den Vorgang für das zweite Segment. HINWEIS: Eine fehlerhafte Abdichtung der Venen auf den Zylinder wird eine Quelle der Leck zu können, benötigen Reintervention, und das Risiko einer Infektion und experimentellen Ausfall deutlich zu erhöhen. </li></ol></li><li> Zur Verstärkung (Mesh) das zweite Segment, lassen Sie die beiden Zylinder (mit der Vene angebracht) von den L-förmigen Stücke (2.3 und Abbildung 1). <ol><li> Seien Sie sanft und die Vene nicht berühren mit allen Instrumenten. Schieben Sie die erste Masche auf dem Zylinder dann auf die Vene. Ein Push / Pull-Gedränge wird das Netz auf der Vene zu bekommen. </li><li> Sobald das Gitter auf der gesamten Oberfläche der Vene sichern jacketed Vene zu den Zylindern mit Ethibon 3-0. </li><li> Bauen Sie die Vene / Zylinder-Verbindung an die L-förmigen Träger und überträgt es auf die Perfusion Kammer, die zuvor mit Medium gefüllt ist. </li></ol></li><li> Verbinden jedes Metallzylinder (in-und Abfluss) zu einem Y-Verteiler mit Peroxid behandelten Silikonschlauch mit einem Innendurchmesser von 3,2 mm. </li><li> Verbinden der Ausflussteiler mit einem zweiten Y-Verteiler mit der gleichen Art von Schläuchen. Von diesem Y-Splitter, verwenden Sie ein Rohr, um den Druck durch Perfusion beider Schiffe zu messen. Das andere ein in die Kolonne, um einen geschlossenen Schleifensystem (Figur 2) zu bilden. </li><li> Im Inkubator, verwenden Sie eine lange (ein Meter Länge) Rohr, um die Drucksäule mit dem Pumpenkopf zu verbinden. </li><li> Füllen Sie das durch den Anschluss des Pumpenkopfes mit dem Zulauf Y-Splitter mit einem anderen großen Länge Schlauch-Set (Abbildung 1). </li></ol> 4. Veins Perfusion <ol><li> Nach der Montage ist EVPS Completed, füllen Sie die Spalte mit Medium (Aufenthalt unter der Vene Ablaufkanal, damit Nachfüllen). Noch ein Medium in die Spalte, bis das System voll ist. Bewegen ganze System in den Inkubator bei 37 ± 0,1 ° C bei einem pH-Wert gehalten wird konstant bei 7,40 ± 0,01 (unter Verwendung eines CO 2 / pH-Algorithmus auf der Grundlage der Henderson-Hasselbach-Gleichung). </li><li> Bringen Sie die Zahnradpumpe Kopf außerhalb des Inkubators und verbinden Sie es mit der Zahnradpumpe Laufwerk. Schrauben Sie die Stäbe, um die Montage zu sichern. </li><li> Schalten Sie die Pumpleistung, stellen Sie sicher, dass es auf der Driving-Software aktiviert und erhalten Sie 5 min für das Medium, das gleichermaßen in jedem Abteil verteilt werden. </li><li> Um den Druck zu überwachen, verwenden Sie einen arteriellen Leitungsüberwachung. Verbinden der EVPS Druckausgang (es den arteriellen Katheter entspricht), um den Druckwandler mit dem Computer verbunden ist. <ol><li> Sicherstellen, dass das Rohr vollständig mit Medium gefüllt ist und keine Luftblasen enthalten. De-Blase das Kultursystem durch die &quot;arterielle line &quot;Röhre (Abbildung 2). Achten Sie auf die Anzeige und suchen Sie nach einer pulsierenden Niere Signal von 60 Imp / min mit konstanter Amplitude. An diesem Punkt ist der durchschnittliche Druck zwischen 0-10 mm Hg. Wenn der Druck &lt;0, und die Säule schrittweise leert suchen Sie nach einem Leck (Vene Sicherheiten oder unzureichende Abdichtung zwischen der Vene und der Röhre). </li></ol></li><li> Stellen Sie den minimalen Druck bis 6 mm Hg für eine Venentest oder bei 90 mm Hg für eine arterielle Test. Unter diesen Bedingungen gilt für eine Lufteinspritzvorrichtung den erforderlichen Druck auf die Säule und System. </li><li> Ändern das Medium alle 2 Tage durch die Verwendung des Rohres an der Drucksäule verbunden ist. Um Schäden zu vermeiden Druckänderung, öffnen Sie die Spalte Stecker ersten. </li></ol> 5. Abschluss der Perfusion <ol><li> Nach 3 oder 7 Tage der Perfusion: Nehmen Sie die EVPS aus dem Inkubator und demontieren die Venen. Entsorgen Sie die 5 mm proximalen und distalen Venenenden am Gerät angebrachten. Schneiden Sie eine zentrale, 5 mm dick rings von der verbleibenden Segment und fixieren in Formalin (Morphometrie). Frieren Sie die verbleibenden Fragmente und zu Pulver für weitere molekulare Analysen zu reduzieren. </li></ol>

<ol>
	<li>Sal Go, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Executive+summary:+heart+disease+and+stroke+statistics--2014+update:+a+report+from+the+american+heart+association.">Executive summary: heart disease and stroke statistics--2014 update: a report from the american heart association.</a> Circulation. 129, 399-410 (2014).</li><li>Sal Conte, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Results+of+PREVENT+III:+a+multicenter,+randomized+trial+of+edifoligide+for+the+prevention+of+vein+graft+failure+in+lower+extremity+bypass+surgery.">Results of PREVENT III: a multicenter, randomized trial of edifoligide for the prevention of vein graft failure in lower extremity bypass surgery.</a> Journal of Vascular Surgery. 43, 742-751 (2006).</li><li>Yu, P., Nguyen, B. T., Tao, M., Bai, Y., Ozaki, C. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+vein+graft+hemodynamic+manipulations+to+enhance+experimental+utility.">Mouse vein graft hemodynamic manipulations to enhance experimental utility.</a> The American Journal of Pathology. 178, 2910-2919 (2011).</li><li>Davies, M. G., Hagen, P. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reprinted+article+&amp;#34;Pathophysiology+of+vein+graft+failure:+a+review&amp;#34;.">Reprinted article &amp;#34;Pathophysiology of vein graft failure: a review&amp;#34;.</a> European journal of vascular and endovascular surgery : the official journal of the European Society for Vascular Surgery. 42, S19-S29 (2011).</li><li>Berard, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+hemodynamic+forces+in+the+ex+vivo+arterialization+of+human+saphenous+veins.">Role of hemodynamic forces in the ex vivo arterialization of human saphenous veins.</a> Journal of Vascular Surgery. 57, 1371-1382 (2013).</li><li>Vijayan, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+reduction+of+medial+and+intimal+thickening+in+porcine+saphenous+vein+grafts+with+a+polyglactin+biodegradable+external+sheath.">Long-term reduction of medial and intimal thickening in porcine saphenous vein grafts with a polyglactin biodegradable external sheath.</a> Journal of Vascular Surgery. 40, 1011-1019 (2004).</li><li>Jeremy, J. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+biology+of+saphenous+vein+grafts+fitted+with+external+synthetic+sheaths+and+stents.">On the biology of saphenous vein grafts fitted with external synthetic sheaths and stents.</a> Biomaterials. 28, 895-908 (2007).</li><li>Zilla, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Constrictive+external+nitinol+meshes+inhibit+vein+graft+intimal+hyperplasia+in+nonhuman+primates.">Constrictive external nitinol meshes inhibit vein graft intimal hyperplasia in nonhuman primates.</a> The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 136, 717-725 (2008).</li><li>Zilla, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Utilization+of+shape+memory+in+external+vein-graft+meshes+allows+extreme+diameter+constriction+for+suppressing+intimal+hyperplasia:+a+non-human+primate+study.">Utilization of shape memory in external vein-graft meshes allows extreme diameter constriction for suppressing intimal hyperplasia: a non-human primate study.</a> Journal of Vascular Surgery. 49, 1532-1542 (2009).</li><li>Yeoman, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+constitutive+model+for+the+warp-weft+coupled+non-linear+behavior+of+knitted+biomedical+textiles.">A constitutive model for the warp-weft coupled non-linear behavior of knitted biomedical textiles.</a> Biomaterials. 31, 8484-8493 (2010).</li><li>Longchamp, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+external+mesh+reinforcement+to+reduce+intimal+hyperplasia+and+preserve+the+structure+of+human+saphenous+veins.">The use of external mesh reinforcement to reduce intimal hyperplasia and preserve the structure of human saphenous veins.</a> Biomaterials. 35, 2588-2599 (2014).</li><li>Saucy, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+vivo+pulsatile+perfusion+of+human+saphenous+veins+induces+intimal+hyperplasia+and+increased+levels+of+the+plasminogen+activator+inhibitor+1.">Ex vivo pulsatile perfusion of human saphenous veins induces intimal hyperplasia and increased levels of the plasminogen activator inhibitor 1.</a> European Surgical Research. Europaische Chirurgische Forschung. Recherches Chirurgicales Europeennes. 45, 50-59 (2010).</li><li>Dubuis, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atorvastatin-loaded+hydrogel+affects+the+smooth+muscle+cells+of+human+veins.">Atorvastatin-loaded hydrogel affects the smooth muscle cells of human veins.</a> The Journal of pharmacology and experimental. 347, 574-581 (2013).</li><li>Deglise, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+connexin43+expression+in+human+saphenous+veins+in+culture+is+associated+with+intimal+hyperplasia.">Increased connexin43 expression in human saphenous veins in culture is associated with intimal hyperplasia.</a> Journal of Vascular Surgery. 41, 1043-1052 (2005).</li><li>Muto, A., Model, L., Ziegler, K., Eghbalieh, S. D., Dardik, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+vein+graft+adaptation+to+the+arterial+circulation:+insights+into+the+neointimal+algorithm+and+management+strategies.">Mechanisms of vein graft adaptation to the arterial circulation: insights into the neointimal algorithm and management strategies.</a> Circulation Journal : Official Journal of the Japanese Circulation Society. 74, 1501-1512 (2010).</li><li>Tao, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simplified+murine+intimal+hyperplasia+model+founded+on+a+focal+carotid+stenosis.">A simplified murine intimal hyperplasia model founded on a focal carotid stenosis.</a> The American Journal of Pathology. 182, 277-287 (2013).</li><li>Berard, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Salvage+treatment+for+venous+aneurysm+complicating+vascular+access+arteriovenous+fistula:+use+of+an+exoprosthesis+to+reinforce+the+vein+after+aneurysmorrhaphy.">Salvage treatment for venous aneurysm complicating vascular access arteriovenous fistula: use of an exoprosthesis to reinforce the vein after aneurysmorrhaphy.</a> European Journal of Vascular and Endovascular Surgery : the Official Journal of the European Society for Vascular Surgery. 40, 100-106 (2010).</li></ol>

Die Autoren haben nichts zu offenbaren.

Diese Studie deckt eine Ex-vivo-Perfusion Venensystem (EVPS) zu umfangreichen hämodynamischen Studien in menschlichen Adern durchzuführen. Dieses System ermöglicht Saphenavenen Perfusion unter definierten hämodynamischen Parameter in Abwesenheit erschwerender entzündlichen und Wachstumsfaktoren von zirkulierenden Zellen, die in vivo freigesetzt wird. Somit stellt es ein besseres Verständnis der zugrundeliegenden Bahnen in der Steuerung der IH in menschlichen Venentransplantate 5,11,12,15 beteiligt. Reproduzierbare und messbare hämodynamische Störungen werden in vivo begrenzt. Mehrere komplexe murinen mikrochirurgische Eingriffe sind beschrieben worden. Verwendung eines Bypass Isotransplantat Modell über Zwischenschaltung einer Hohlvene von einem Donor-Maus in die rechte Arteria carotis communis und die zusätzliche Schaffung eines Abflusses Zweig Ligierung Mitte Transplantat oder carotis Stenose fließt und SS akut verringert und verbessert IH 3. Außen nach innen gegenüber Umbau kann weiter unter seinrogated mit einem mittleren Brenn gegen distalen A. carotis Stenose 16. In großen Tieren (Schaf, Schwein und Pavian), sind Bypassgrafts technisch einfacher und eine attraktive Ansatz zur präklinischen große Geräte wie der Mensch Mesh in der vorliegenden Studie verwendet 8-10 testen. , Die Kosten und die geringe Zahl der validierten molekularen Werkzeugen begrenzen jedoch die Verwendung dieser Strategien. Schließlich diese Strömungs Manipulationen ständig verändern Wandspannung und nicht auf einen einzigen Bestandteil verhören. Darüber hinaus werden die komplizierten Beziehungen zwischen den Hämodynamik und die Immun-und Hormonsystem weiter zu begrenzen die Analyse einer einzigen Schauspieler. Mehrere Probleme treten bei der Verwendung des EVPS. 1) Low-grade bakterielle Kontamination oft menschliche Vene Ernte und der Ex-vivo Abwesenheit von zirkulierenden Zellen stehen als wichtige Ursache der Infektion begleitet. Dies wird vor allem durch Händewaschen verhindert die Stücke separat Autoklavieren dann alles Material vorzu verwenden. Außerdem wird die Anordnung in weniger als 90 Minuten und unter strenger Asepsis durchgeführt. 2) Dichtungs dass erträgt wiederholte Sterilisation. Aus diesem Grund wurde eine rechteckige PMMA-GS Konstruktion verwendet, wobei die Verwendung der Verbindungen und Begrenzungs Verformung. 3) SS und der Wandspannung an definierten Zeitpunkten berechnet, bezogen auf das Gefäßlumen Radius (Histologie), der Strömung und Viskosität konstant ist. Die Integration einer Längs Bildgebung (High-Definition-Kamera, Laser oder Doppler), die kontinuierlich überwacht den Venendurchmesser und / oder Durchfluss Nähere Informationen zu lokalen Strömungsänderungen liefern und eine zyklische Belastung Berechnungen. 4) Die beiden parallelen Venensegmenten kann es zu unkontrollierten Unterschiede in ihrer Wand Compliance und Radius haben. So können wir vergleichen Segmente nur von einem gleichen Vene und davon ausgehen, dass unter dem gleichen Druck, ist in beiden Segmenten die Durchflussrate Muster. In dieser Studie wurden Adern pulsierende laminare Strömung vorgelegt; jedoch 50% Of intimalen hyperplastischen Läsionen treten in den Ende-zu-Seite perianastomotic Bereiche des Venentransplantats, wobei eine laminare Strömung gestört wird. Turbulenzen können durch die Zugabe einer zweiten Pumpe modelliert werden, wobei die erste Pump nicht synchronisiert. Zukünftige Studien werden durchgeführt, um speziell die Auswirkungen der Laminar-Flow-Unterbrechung auf IH und der potenziell positiven Effekt des Mattenbewehrung. Interessanterweise ist die flexible Struktur des Gewebes ermöglicht Umfangshülle an der Anastomose-Sites, wie bereits ausgeführt, um aneurysma Fisteln 17 (Figur 4) zu reparieren. So könnte das Netz als nützlich erweisen, um perianastomotic Dilatation, Laminar-Flow-Störung zu begrenzen und damit an der Anastomose Websites reduzieren IH. Dies kann besonders vorteilhaft in distalen Bypass, häufig von Durchmesser Missverhältnis zwischen der Vene und der Schienbeinarterie oder peroneus betroffen sein. Zusammenfassend ist die hier gezeigte Setup ermöglicht die parallele Durchblutung des menschlichen veins, unter identischen Bedingungen hämodynamischen. Diese Daten zeigen, daß die Verwendung eines makroporösen äußeren rohrförmigen Polyesternetz ist eine effiziente Methode, um die Entwicklung von IH in Venentransplantaten in ein arterielles Umgebung 11 eingeführt zu begrenzen. Dieses System kann mehrere Bereiche der Forschung profitieren. Vor allem zeigt sich, als ein mächtiges Werkzeug, um prä-klinischen Studien die Prüfung der Machbarkeit und Effizienz der verschiedenen Ansätze zur IH in Menschenmaterial zu reduzieren durchzuführen und ist eine wertvolle Ergänzung zu in vivo Tiermodellen. Andere Prothesenträger oder kämmt mit pharmazeutischen Wirkstoffen beschichtet werden mit dieser Methode 6-10 bewertet werden. Darüber hinaus könnte man sich vorstellen, lokal angewendet pharmakologischer Moleküle zu testen IH in menschlichem Gewebe unter nahezu physiologischen Zustand zu verhindern. Gentherapie Interventionen sind auch erreichbar, Transduzieren einer Venensegment zu überexprimieren oder Schweigen Zielgene von Interesse. Abschließend wird unser System unsere un erhöhenVerständnis der hämodynamischen Beitrag zur menschlichen Venentransplantat Krankheiten. Es bietet eine innovative Plattform, um neue therapeutische Strategien zu testen und kann als eine entstehen &quot;Bank, neben Übersetzungs-Tool.&quot;

Herz-Kreislauf-Erkrankungen sind die häufigste Ursache von Morbidität und Mortalität in den westlichen Ländern 1. Trotz der Fortschritte in der endovaskulären Behandlungen gemacht, bleibt Bypass-Operation die Hauptstütze der modernen Therapien, also über eine halbe Million Venentransplantate werden jährlich in den Vereinigten Staaten durchgeführt. Trotz jahrzehntelanger Forschung, 30-60% der unteren Extremität Venentransplantate nicht jedoch innerhalb der ersten Jahre durch Intimahyperplasie (IH) 2. Mechanische Kräfte, besonders niedrige Schubspannung (SS) und hohe Wandspannung, sind ausschlaggebend für die Initiierung und Entwicklung dieser hyperplastische Reaktion 3,4. Um dieses Problem zu lösen, wurde eine Ex-vivo-Perfusion Venen-System (EVPS) erzeugt werden, um unter streng kontrollierten hämodynamischen Bedingungen (Druck und Scherbeanspruchung), das Verhalten des menschlichen Stammvenen untersuchen. In dieser Studie, nach dem Einsetzen in die arterielle Zirkulation artigen Hochdruck (Mittelwert = 100 mm Hg) war ausreichend, um prolif stimulierenZusammenarbeit und Migration glatter Muskelzellen in der Intima-Schicht (IH) 5. Säugetierstudien haben die Verwendung von externen Verstärkung als eine effiziente Methode, um die &quot;arterialisierten Vene&quot; unterstützt und wirken der akuten hämodynamischen Veränderungen der Vene Flächen einmal in einem arteriellen Milieu implantiert vorgeschlagen. Die Maschenüberdehnung verhindert, erhöhte Scherspannung und reduzierte Wandspannung und damit IH 6-10. Allerdings sind die zugrunde liegenden Mechanismen und ihre Anwendbarkeit auf die menschliche Venen in die Verbesserung der Durchgängigkeit Bypass noch nicht vollständig charakterisiert. Unsere EVPS wurde verwendet, um zu vergleichen, in der Bedingung imitiert die Änderungen eine Vene Gesichter einmal in einem arteriellen Therapie eingesetzt (hohe Scherbeanspruchung und Druck), die das Verhalten des menschlichen Stammvenen in Abwesenheit und Anwesenheit eines externen makroporöse Polyester Netzschlauch. Durch die Verhinderung der pathologischen Umbau-und IH, das Netz bereitgestellt Beweise für ihre mögliche klinische Effizienz 11 </sup&gt;. Diese Studie 1) stellt ein Modell der ex vivo Perfusion menschlichen Stammvenen unter kontrolliertem Druck und Scherspannung 2) zeigt, dass externe makroporöse Polyester-Mesh reduziert IH und liefert wichtige Informationen für die mögliche klinische Anwendung.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1113">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:453px;">Name</td>
			<td style="width:371px;">Company</td>
			<td style="width:145px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:144px;">Comments</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">RPMI 1640 - Glutamax</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>61870-010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"><a name="RANGE!A3">Penicilline/Streptomycine/Fungizone</a></td>
			<td>Bioconcept</td>
			<td>4-02F00-H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dextran from Leuconostoc spp. 500 gr.</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>31390</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tampon PBS CHUV pH 7.1-7.3 1 lt.</td>
			<td>Laboratorium und Grosse Apotheke Dr. G. Bichsel AG</td>
			<td>100 0 324 00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cryosectionning embedding medium - Tissue-Tek OCT Compound</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-373-65</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Silicon Tubing (Peroxide) L/S 16 (96400-16 ) - 7.5m</td>
			<td>Idex Health &#38; Science GMBH</td>
			<td>MF0037ST</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Y-splitter&#160;</td>
			<td>Idex Health &#38; Science GMBH</td>
			<td>Y-connector</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">35 mm Culture dish</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>CLS430165-100EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">15 ml Falcon tube</td>
			<td>BD Bioscence</td>
			<td>352096</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">50 ml Falcon tube</td>
			<td>BD Bioscence</td>
			<td>352098</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Gearing pump - Reglo-Z</td>
			<td>Idex Health &#38; Science GMBH</td>
			<td>SM 895&#160;</td>
			<td>&#160;App-Nr 03736-00194</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pump Head</td>
			<td>Idex Health &#38; Science GMBH</td>
			<td>MI0008&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Monitoring Kit TRANSPAC IV</td>
			<td>icumedical</td>
			<td>011-0J736-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">20 mL Syringes</td>
			<td>B. Braun Medical SA</td>
			<td>4612041-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Etibon 3-0 FS-2</td>
			<td>Ethicon- Johnson&#38;Johnson</td>
			<td>EH7346H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Mesh ProVena 6-8mm</td>
			<td>B. Braun Medical SA</td>
			<td>1105012-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">NaCl: Sodium Chlorure Solution perfusion 0.9% (100 ml)</td>
			<td>B. Braun Medical SA</td>
			<td>534534</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Masterflex L/S Standard Drive</td>
			<td>Cole-Parmer Instrument Co</td>
			<td>7521-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Acquisition card</td>
			<td>National Instruments</td>
			<td>PCI-6024 E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Flowmeter module</td>
			<td>Transonic Systems Inc.</td>
			<td>TS410 and T402</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Stopcock with 3-ways</td>
			<td>BD Connexta Luerlock</td>
			<td>394600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Millex Filter</td>
			<td>Milian</td>
			<td>SE2M229I04</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

procedure for human saphenous veins ex vivo perfusion and external reinforcement

Die Hauptstütze der modernen Therapien für umfangreiche arterielle Verschlusskrankheit ist venösen Bypass. Allerdings ist seine Haltbarkeit durch Intimahyperplasie (IH), die schließlich führt zu Gefäßverschluss und Transplantatversagen bedroht. Mechanische Kräfte, besonders niedrige Schubspannung und hohe Wandspannung, sind Gedanken zu initiieren und diese zellulären und molekularen Veränderungen zu erhalten, aber ihre genaue Beitrag bleibt entwirrt werden. Um wahlweise die Rolle von Druck und Scherbelastung auf die Biologie der IH zu bewerten, wurde eine Ex-vivo-Perfusion System (EVPS) geschaffen, um Segmente der menschlichen Stammvenen unter arterieller Therapie (hohe Schubspannung und Hochdruck) durchströmen. Weitere technische Innovationen erlaubt den gleichzeitigen Durchblutung der beiden Segmente aus der gleichen Ader, eine mit einem externen Netz verstärkt. Venen wurden mit einem No-Touch-Technik geerntet und sofort in das Labor für die Montage in der EVPS übertragen. Ein Segment des frisch isolATED Vene wurde nicht durchblutet (Kontrolle, Tag 0). Die beiden anderen Segmente wurden für bis zu 7 Tagen durchströmt, wobei ein vollständig mit einer 4 mm (Durchmesser) äußere Maschen geschützt. Der Druck, die Strömungsgeschwindigkeit und Pulsrate wurden kontinuierlich überwacht und eingestellt, um die in die Oberschenkelarterie vorherrschenden hämodynamischen Bedingungen nachzuahmen. Nach Beendigung der Perfusion wurden die Venen abmontiert und zur histologischen und molekularen Analyse verwendet. Unter Ex-vivo-Bedingungen, Hochdruck-Perfusion (arteriell, Mittelwert = 100 mm Hg) ist ausreichend, IH und Umbau der menschlichen Adern zu erzeugen. Diese Änderungen sind in der Gegenwart eines externen Polyesternetz reduziert.

Die EVPS bietet ein wertvolles Werkzeug, um eine unabhängige Beurteilung der hämodynamischen Kräfte auf die menschliche Vena saphena-Transplantate Umbau-und IH. Abbildung 1 zeigt die Perfusionskammer und die Vene Unterstützung. In den 1A und B, die Vene Träger vor (1A) und nach (Abbildung 1B) Anordnung bzw. abgebildet ist. Es ist zusammengesetzt (von oben nach unten) der Ebene 1 Edelstahlrohr Mess 9 cm, die als Träger für 2 L-förmigen Teile, die leicht gleiten können (von links nach rechts) dient und eine zuverlässige Technik passen Sie die Größe, um die Unterstützung der Vene. Jedes dieser Teile enthält eine Scheibe POM, ein Stahlzylinder (Ader-Anschluss) anstelle von integrierten Schraube (Pfeil) fixiert passen. 1C-D zeigt die Perfusionskammer allein (C) und nach dem Einsetzen der Aderträger (D). Auf der Perfusionskammer sind Vertiefungen ausgebildetHalten Sie die Vene Unterstützung an Ort und Stelle (oben) und Knick des Verbindungsrohres vermeiden, kommen in die und aus der Vene (unten). Abbildung 2 zeigt Echtzeit-Bilder (2A) und eine schematische Darstellung (Abbildung 2B) der EVPS. Die Perfusionskammer, Venen und dessen Halterung sowie der Drucksäule werden in einer kontrollierten Umgebung (Temperatur, CO 2 und O 2), während die Pumpe, Druckeinspritzvorrichtung, und Steuereinrichtungen bleiben alle außerhalb des Inkubators gehalten. Die Figur veranschaulicht die Getriebepumpe (1), die eine pulsierende Signal durch einen Computer (2), die die Strömungsgeschwindigkeit (3) überwacht, Druck gesteuert erzeugt (4) und steuert die minimale diastolische Druck (5); zwei Segmenten eines gleichen Vena saphena parallel zu der Transfusionspumpe innerhalb separaten Perfusionskammern verbunden (6a und 6b) in einem Zellkulturbrutschrank gestellt. In Abbildung 3, Zeigt, histomorphometrische Analyse, dass die Außenbewehrung verhindert Intimahyperplasie und pathologischen Remodeling Medien sonst nach 7 Tagen unter Hochdruck (arterieller Therapie, Mittelwert = 100 mm Hg) Perfusion beobachtet. In 3A, repräsentativ für histologische Schnitte mit Hämatoxylin-Eosin (HE) zeigt die Auskleidung des Lumens von Kernen von Endothelzellen und die Kerne von SMCs in der Medienschicht unter allen Bedingungen. 3B-C zeigt repräsentative Van Gieson elastische Lamina ( VGEL) gefärbten Schnitten. In 3B ist die Intima in Venen mit hohem Druck perfundiert verdickt (IH) (Mittelwert = 100 mm Hg) während 7 Tagen im Vergleich zur Kontrolle nicht-perfundierten Venen weitgehend ein Phänomen in der Gegenwart eines externen Gitter verringert. 3C illustriert die pathologische nach außen Umbau-und Medien Ausdünnung in den Venen zu 7 Tage des Arteriendrucks unterzogen. Dies wird hauptsächlich durch die äußere Verstärkung verhindert. Furthermore, in 3D, Trichrom-Färbung nach Masson (blau = Bindegewebe, rot = Muskel) verbindet diesen pathologischen Remodeling der Persistenz von nur einer der drei Muskelschichten und Akkumulation von glatten Muskelzellen in der Innenschicht (Intima). Die äußere Verstärkung erhält die Verteilung des SMCs und Medienstruktur. Figur 4 zeigt eine gegenwärtige klinische Anwendung des externen Netzes. Ein anschauliches Beispiel ist durch externe Verstärkung eines Aneurysma arteriovenöse Fistel (Hämodialyse) vorgesehen ist. 4A zeigt eine Zeitverlaufsdarstellung der Vene Verstärkung (von oben nach unten). Zuerst wurde das Netz um ein starres Rohr angeordnet, während die Vene Ende an einem Dorn (oberes Feld) befestigt ist. Dann wurde die Vene des Rohres dank der Dorn durchgezogen wird. Sobald die Vene war an Ort und Stelle, wurde das Rohr langsam zurückgezogen, so dass das Netz rund um die Vene (upper und Mitte). In diesem speziellen Fall wurde das Verfahren auf beiden Seiten der Venen wiederholt, und die Adern Segmente und Mattenbewehrung durch eine End-zu-End-Anastomose (unteres Bild) zusammengesetzt. 4B stellt eine vergrößerte Ansicht des arterio-venösen Ende to-Anastomose, die zeigen, dass das Gitter um die Anastomose durch das Binden entlang der hinteren Wand der Arterie gewickelt. <img alt="Figur 1" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/52079/52079fig1highres.jpg" width="500" /> Abbildung 1. Die Vene Unterstützung und Perfusion Kammer. A. Die Vene Unterstützung von 1 Glattrohr zusammengesetzt, 2 L-förmigen Stücke, Scheiben und Zylinder (bilden die von oben nach unten). B. einmal die Vene Unterstützung zusammengebaut. C. Blick auf die Durchblutung Kammer. D. Die Perfusion Kammer wurde entwickelt, um an Ort und Stelle die Vene Unterstützung zu halten und ermöglicht seinen connectIon zu der Vene und Verbindungsrohre. <img alt="Figur 2" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/52079/52079fig2highres.jpg" width="500" /> Abbildung 2. Die Ex-vivo-Perfusion-System. A. Das komplett zusammen EVPS in der Zellkultur-Inkubator. B. Schematische Darstellung. 1) die Pumpe Erzeugung eines pulsierenden Niere Welle; 2) der Computer die Steuerung der Druck, Durchfluss (Art, Geschwindigkeit und Amplitude); 3) die Durchflussmesser; 4) der Druckwandler - Arterienleitung; 5) die Druckeinspritzventil; (6b), 6) zwei Abschnitte eines selben Vena saphena ohne (6a) oder mit externen Netzverstärkung perfundiert. <img alt="Figur 3" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/52079/52079fig3highres.jpg" width="500" /> Abbildung 3. Die externe Verstärkung verhindert Intimahyperplasie. Ein. Repräsentative histologische Schnitte mit Hämatoxylin-Eosin (HE) gefärbt. Balken stellt 50 um. BC. Repräsentative histologische Schnitte für Elastin (VGEL) gefärbt. l = m = Lumen Medien, IH = Intimahyperplasie. Balken stellt 50 um. D. Repräsentative histologische Schnitte mit Masson Trichrom gefärbt. Balken stellt 50 um. <img alt="Figur 4" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/52079/52079fig4highres.jpg" width="500" /> Abbildung 4. Externe Verstärkung einer aneurysmatischen Fistel. A. Zeitverlauf Fotografien von Venen Verstärkung (von oben nach unten). B. Größere Ansicht des arteriovenösen Ende-zu-Seit-Anastomose.

Watch this Scientific Journal Video about Procedure for Human Saphenous Veins Ex Vivo Perfusion and External Reinforcement at JoVE.com

Procedure for Human Saphenous Veins Ex Vivo Perfusion and External Reinforcement

Die Mechanismen, die zur Entwicklung von Intimahyperplasie (IH) und Vene Transplantatversagen sind immer noch wenig verstanden. Diese Studie beschreibt eine Ex-vivo-System für die menschliche Venen unter kontrollierten Durchfluss und Druck durchströmen. Darüber hinaus die Effizienz der externen Mattenbewehrung zur Begrenzung der Entwicklung der IH bewertet.

Verfahren für Menschen V. saphena<em&gt; Ex-vivo-</em&gt; Perfusion und Außen Verstärkung

The mainstay of contemporary therapies for extensive occlusive arterial disease is venous bypass graft. However, its durability is threatened by intimal ...

procedure-for-human-saphenous-veins-ex-vivo-perfusion-external

Universidad San Sebastian

Research

JoVE Journal

Medicine

Procedure for Human Saphenous Veins Ex Vivo Perfusion and External Reinforcement

11.1K Aufrufe.  Brigham and Women's Hospital/Harvard Medical School.  Die Mechanismen, die zur Entwicklung von Intimahyperplasie (IH) und Vene Transplantatversagen sind immer noch wenig verstanden. Diese Studie beschreibt eine Ex-vivo-System für die menschliche Venen unter kontrollierten Durchfluss und Druck durchströmen. Darüber hinaus die Effizienz der externen Mattenbewehrung zur Begrenzung der Entwicklung der IH bewertet. 

Serie: Procedure for Human Saphenous Veins Ex Vivo Perfusion and External Reinforcement

Technique of Subnormothermic Ex Vivo Liver Perfusion for the Storage, Assessment, and Repair of Marginal Liver Grafts

The success of liver transplantation has resulted in a dramatic organ shortage. In most transplant regions 20-30% of patients on the waiting list for liver transplantation die without receiving an organ transplant or are delisted for disease progression. One strategy to increase the donor pool is the utilization of marginal grafts, such as fatty livers, grafts from older donors, or donation after cardiac death (DCD). The current preservation technique of cold static storage is only poorly tolerated by marginal livers resulting in significant organ damage. In addition, cold static organ storage does not allow graft assessment or repair prior to transplantation.
These shortcomings of cold static preservation have triggered an interest in warm perfused organ preservation to reduce cold ischemic injury, assess liver grafts during preservation, and explore the opportunity to repair marginal livers prior to transplantation. The optimal pressure and flow conditions, perfusion temperature, composition of the perfusion solution and the need for an oxygen carrier has been controversial in the past.
In spite of promising results in several animal studies, the complexity and the costs have prevented a broader clinical application so far. Recently, with enhanced technology and a better understanding of liver physiology during ex vivo perfusion the outcome of warm liver perfusion has improved and consistently good results can be achieved.
This paper will provide information about liver retrieval, storage techniques, and isolated liver perfusion in pigs. We will illustrate a) the requirements to ensure sufficient oxygen supply to the organ, b) technical considerations about the perfusion machine and the perfusion solution, and c) biochemical aspects of isolated organs.

Technique of Subnormothermic Ex Vivo Liver Perfusion for the Storage, Assessment, and Repair of Marginal Liver Grafts

Marginal grafts, such as fatty livers, grafts from older donors, or livers retrieved after cardiac death (DCD) tolerate conventional, cold static storage only poorly. We developed a novel model of subnormothermic ex vivo liver perfusion for preservation, assessment, and repair of marginal liver grafts prior to transplantation.

Technik der Subnormothermic<em&gt; Ex-vivo-</em&gt; Leberperfusion für die Lagerung, Bewertung, Reparatur von Marginal Lebertransplantate

The success of liver transplantation has resulted in a dramatic organ shortage. In most transplant regions 20-30% of patients on the waiting list for ...

Forschung

Medizin

Method of Isolated Ex Vivo Lung Perfusion in a Rat Model: Lessons Learned from Developing a Rat EVLP Program

The number of acceptable donor lungs available for lung transplantation is severely limited due to poor quality. Ex-Vivo Lung Perfusion (EVLP) has allowed lung transplantation in humans to become more readily available by enabling the ability to assess organs and expand the donor pool. As this technology expands and improves, the ability to potentially evaluate and improve the quality of substandard lungs prior to transplant is a critical need. In order to more rigorously evaluate these approaches, a reproducible animal model needs to be established that would allow for testing of improved techniques and management of the donated lungs as well as to the lung-transplant recipient. In addition, an EVLP animal model of associated pathologies, e.g., ventilation induced lung injury (VILI), would provide a novel method to evaluate treatments for these pathologies. Here, we describe the development of a rat EVLP lung program and refinements to this method that allow for a reproducible model for future expansion. We also describe the application of this EVLP system to model VILI in rat lungs. The goal is to provide the research community with key information and &#8220;pearls of wisdom&#8221;/techniques that arose from trial and error and are critical to establishing an EVLP system that is robust and reproducible.

Method of Isolated Ex Vivo Lung Perfusion in a Rat Model: Lessons Learned from Developing a Rat EVLP Program

Ex-Vivo Lung Perfusion (EVLP) has allowed lung transplantation in humans to become more readily available by enabling the ability to assess organs and expand the donor pool. Here, we describe the development of a rat EVLP program and refinements that allow for a reproducible model for future expansion.

Methode Isolated<em&gt; Ex vivo</em&gt; Lung Perfusion in einem Rattenmodell: Lehren aus Entwicklung einer Ratte EVLP Programm gelernt

The number of acceptable donor lungs available for lung transplantation is severely limited due to poor quality. Ex-Vivo Lung Perfusion (EVLP) has allowed ...

An Ex vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast

The study of hormone action in the human breast has been hampered by lack of adequate model systems. Upon in vitro culture, primary mammary epithelial cells tend to lose hormone receptor expression. Widely used hormone receptor positive breast cancer cell lines are of limited relevance to the in vivo situation. Here, we describe an ex vivo model to study hormone action in the human breast. Fresh human breast tissue specimens from surgical discard material such as reduction mammoplasties or mammectomies are mechanically and enzymatically digested to obtain tissue fragments containing ducts and lobules and multiple stromal cell types. These tissue microstructures kept in basal medium without growth factors preserve their intercellular contacts, the tissue architecture, and remain hormone responsive for several days. They are readily processed for RNA and protein extraction, histological analysis or stored in freezing medium. Fluorescence activated cell sorting (FACS) can be used to enrich for specific cell populations. This protocol provides a straightforward, standard approach for translational studies with highly complex, varied human specimens.

An Ex vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast

We have developed a novel ex vivo model to study hormone action in the human breast. It is based on tissue microstructures isolated from surgical breast tissue specimens which preserve tissue architecture, intercellular interactions, and paracrine signaling.

Ein<em&gt; Ex-vivo-</em&gt; Modell um die Hormonwirkung in der menschlichen Brust Studieren

The study of hormone action in the human breast has been hampered by lack of adequate model systems. Upon in vitro culture, primary mammary epithelial ...

Human Dupuytren's Ex Vivo Culture for the Study of Myofibroblasts and Extracellular Matrix Interactions

Organ fibrosis or &#8220;scarring&#8221; is known to account for a high death toll due to the extensive amount of disorders and organs affected (from cirrhosis to cardiovascular diseases). There is no effective treatment and the in vitro tools available do not mimic the in vivo situation rendering the progress of the out of control wound healing process still enigmatic.
To date, 2D and 3D cultures of fibroblasts derived from DD patients are the main experimental models available. Primary cell cultures have many limitations; the fibroblasts derived from DD are altered by the culture conditions, lack cellular context and interactions, which are crucial for the development of fibrosis and weakly represent the derived tissue. Real-time PCR analysis of fibroblasts derived from control and DD samples show that little difference is detectable. 3D cultures of fibroblasts include addition of extracellular matrix that alters the native conditions of these cells. 
As a way to characterize the fibrotic, proliferative properties of these resection specimens we have developed a 3D culture system, using intact human resections of the nodule part of the cord. The system is based on transwell plates with an attached nitrocellulose membrane that allows contact of the tissue with the medium but not with the plastic, thus, preventing the alteration of the tissue. No collagen gel or other extracellular matrix protein substrate is required. The tissue resection specimens maintain their viability and proliferative properties for 7 days. This is the first &#8220;organ&#8221; culture system that allows human resection specimens from DD patients to be grown ex vivo and functionally tested, recapitulating the in vivo situation.

Human Dupuytren&#039;s Ex Vivo Culture for the Study of Myofibroblasts and Extracellular Matrix Interactions

Dupuytren&#8217;s disease (DD) is a fibroproliferative disease of the palm of the hand. Here, we present a protocol to culture resection specimens from DD in a three-dimensional (3D) culture system. Such short-term culture system allows preservation of the 3D structure and molecular properties of the fibrotic tissue.

Menschen Dupuytren&#39;sche<em&gt; Ex vivo</em&gt; Kultur für das Studium der Myofibroblasten und extrazellulären Matrix-Interaktionen

Organ fibrosis or &#8220;scarring&#8221; is known to account for a high death toll due to the extensive amount of disorders and organs affected (from ...

Ex Situ Normothermic Machine Perfusion of Donor Livers

In contrast to conventional static cold preservation (0-4 &#176;C), ex situ machine perfusion may provide better preservation of donor livers. Continuous perfusion of organs provides the opportunity to improve organ quality and allows ex situ viability assessment of donor livers prior to transplantation. This video article provides a step by step protocol for ex situ normothermic machine perfusion (37 &#176;C) of human donor livers using a device that provides a pressure and temperature controlled pulsatile perfusion of the hepatic artery and continuous perfusion of the portal vein. The perfusion fluid is oxygenated by two hollow fiber membrane oxygenators and the temperature can be regulated between 10 &#176;C and 37 &#176;C. During perfusion, the metabolic activity of the liver as well as the degree of injury can be assessed by biochemical analysis of samples taken from the perfusion fluid. Machine perfusion is a very promising tool to increase the number of livers that are suitable for transplantation.

Ex Situ Normothermic Machine Perfusion of Donor Livers

Here we present a protocol describing oxygenated ex situ machine perfusion of donor liver grafts. This article contains a step by step protocol to procure and prepare the liver graft for machine perfusion, prepare the perfusion fluid, prime the perfusion machine and perform oxygenated normothermic machine perfusion of the liver graft.

Ex-situ-normothermen Maschine Perfusion von Spenderlebern

In contrast to conventional static cold preservation (0-4 &#176;C), ex situ machine perfusion may provide better preservation of donor livers. Continuous ...

Normothermic Ex Vivo Kidney Perfusion for the Preservation of Kidney Grafts prior to Transplantation

Kidney transplantation has become a well-established treatment option for patients with end-stage renal failure. The persisting organ shortage remains a serious problem. Therefore, the acceptance criteria for organ donors have been extended leading to the usage of marginal kidney grafts. These marginal organs tolerate cold storage poorly resulting in increased preservation injury and higher rates of delayed graft function. To overcome the limitations of cold storage, extensive research is focused on alternative normothermic preservation methods.
Ex vivo normothermic organ perfusion is an innovative preservation technique. The first experimental and clinical trials for ex vivo lung, liver, and kidney perfusions demonstrated favorable outcomes.
In addition to the reduction of cold ischemic injury, the method of normothermic kidney storage offers the opportunity for organ assessment and repair. This manuscript provides information about kidney retrieval, organ preservation techniques, and isolated ex vivo normothermic kidney perfusion (NEVKP) in a porcine model. Surgical techniques, set up for the perfusion solution and the circuit, potential assessment options, and representative results are demonstrated.

Normothermic Ex Vivo Kidney Perfusion for the Preservation of Kidney Grafts prior to Transplantation

The severe organ shortage has resulted in increased use of marginal kidney grafts for transplantation. This has triggered interest in alternative storage methods, since marginal grafts especially tolerate cold storage poorly. The technique of normothermic ex vivo kidney perfusion (NEVKP) represents a novel preservation method for kidney grafts prior to &#160;transplantation.

Normothermen<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Kidney Perfusion für die Erhaltung der Nierentransplantate vor der Transplantation

Kidney transplantation has become a well-established treatment option for patients with end-stage renal failure. The persisting organ shortage remains a ...

A Small Animal Model of Ex Vivo Normothermic Liver Perfusion

There is a significant shortage of liver allografts available for transplantation, and in response the donor criteria have been expanded. As a result, normothermic ex vivo liver perfusion (NEVLP) has been introduced as a method to evaluate and modify organ function. NEVLP has many advantages in comparison to hypothermic and subnormothermic perfusion including reduced preservation injury, restoration of normal organ function under physiologic conditions, assessment of organ performance, and as a platform for organ repair, remodeling, and modification. Both murine and porcine NEVLP models have been described. We demonstrate a rat model of NEVLP and use this model to show one of its important applications &#8212; the use of a therapeutic molecule added to liver perfusate. Catalase is an endogenous reactive oxygen species (ROS) scavenger and has been demonstrated to decrease ischemia-reperfusion in the eye, brain, and lung. Pegylation has been shown to target catalase to the endothelium. Here, we added pegylated-catalase (PEG-CAT) to the base perfusate and demonstrated its ability to mitigate liver preservation injury. An advantage of our rodent NEVLP model is that it is inexpensive in comparison to larger animal models. A limitation of this study is that it does not currently include post-perfusion liver transplantation. Therefore, prediction of the function of the organ post-transplantation cannot be made with certainty. However, the rat liver transplant model is well established and certainly could be used in conjunction with this model. In conclusion, we have demonstrated an inexpensive, simple, easily replicable NEVLP model using rats. Applications of this model can include testing novel perfusates and perfusate additives, testing software designed for organ evaluation, and experiments designed to repair organs.

A Small Animal Model of Ex Vivo Normothermic Liver Perfusion

There is a significant liver donor shortage, and criteria for liver donors have been expanded. Normothermic ex vivo liver perfusion (NEVLP) has been developed to evaluate and modify organ function. This study demonstrates a rat model of NEVLP and tests the ability of pegylated-catalase, to mitigate liver preservation injury.

Ein kleines Tier Modell der Ex Vivo Normothermic Leber Perfusion

There is a significant shortage of liver allografts available for transplantation, and in response the donor criteria have been expanded. As a result, ...

Optocardiography and Electrophysiology Studies of Ex Vivo Langendorff-perfused Hearts

Small animal models are most commonly used in cardiovascular research due to the availability of genetically modified species and lower cost compared to larger animals. Yet, larger mammals are better suited for translational research questions related to normal cardiac physiology, pathophysiology, and preclinical testing of therapeutic agents. To overcome the technical barriers associated with employing a larger animal model in cardiac research, we describe an approach to measure physiological parameters in an isolated, Langendorff-perfused piglet heart. This approach combines two powerful experimental tools to evaluate the state of the heart: electrophysiology (EP) study and simultaneous optical mapping of transmembrane voltage and intracellular calcium using parameter sensitive dyes (RH237, Rhod2-AM). The described methodologies are well suited for translational studies investigating the cardiac conduction system, alterations in action potential morphology, calcium handling, excitation-contraction coupling and the incidence of cardiac alternans or arrhythmias.

The objective of this study was to establish a method for investigating cardiac dynamics using a translational animal model. The described experimental approach incorporates dual-emission optocardiography in conjunction with an electrophysiological study to assess electrical activity in an isolated, intact porcine heart model.

Optokardiographie und Elektrophysiologie Studien an Ex Vivo Langendorff-perfundierten Herzen

Small animal models are most commonly used in cardiovascular research due to the availability of genetically modified species and lower cost compared to ...

Determining and Controlling External Power Output During Regular Handrim Wheelchair Propulsion

The use of a manual wheelchair is critical to 1% of the world&#39;s population. Human powered wheeled mobility research has considerably matured, which has led to improved research techniques becoming available over the last decades. To increase the understanding of wheeled mobility performance, monitoring, training, skill acquisition, and optimization of the wheelchair-user interface in rehabilitation, daily life, and sports, further standardization of measurement set-ups and analyses is required. A crucial stepping-stone is the accurate measurement and standardization of external power output (measured in Watts), which is pivotal for the interpretation and comparison of experiments aiming to improve rehabilitation practice, activities of daily living, and adaptive sports. The different methodologies and advantages of accurate power output determination during overground, treadmill, and ergometer-based testing are presented and discussed in detail. Overground propulsion provides the most externally valid mode for testing, but standardization can be troublesome. Treadmill propulsion is mechanically similar to overground propulsion, but turning and accelerating is not possible. An ergometer is the most constrained and standardization is relatively easy. The goal is to stimulate good practice and standardization to facilitate the further development of theory and its application among research facilities and applied clinical and sports sciences around the world.

Accurate and standardized assessment of external power output is crucial in the evaluation of physiological, biomechanical, and perceived stress, strain, and capacity in manual wheelchair propulsion. The current article presents various methods to determine and control power output during wheelchair propulsion studies in the laboratory and beyond.

Bestimmung und Steuerung der externen Leistung während des regulären Handrim-Rollstuhlantriebs

The use of a manual wheelchair is critical to 1% of the world&#39;s population. Human powered wheeled mobility research has considerably matured, which ...

External Cephalic Version: Is it an Effective and Safe Procedure?

External cephalic version (ECV) is an effective procedure for reducing the number of cesarean sections. To date, there is no video publication showing the methodology of this procedure. The main objective is to show how to perform ECV with a specific protocol with tocolysis before the procedure and analgesia. Moreover, we describe and analyze the factors associated with successful ECV, and also compare to deliveries in the general pregnant population.
A retrospective and descriptive analysis of ECV carried out at the Hospital Clinico Universitario Virgen de la Arrixaca in Murcia (Spain) between 1/1/2014 and 12/31/2018 was assessed. The latest data available of labor deliveries in the local center, which is the biggest maternity department in Spain, were from 2018.
320 patients were recruited and 3 pregnant women were lost during the study. ECV was carried out at 37&#177;3 weeks gestation. ECV was successful in 82.5% (N=264). 19 complications were reported (5.9%): 8 vaginal bleeding (2.5%), 9 fetal bradycardia (2.8%), 1 preterm rupture of membranes (0.3%) and 1 cord prolapse (0.3%). A previous vaginal delivery increases the success rate of ECV ORadjusted=3.03 (1.62-5.68). Maternal Body Mass Index (BMI) affects the success of ECV ORadjusted=0.94 (0.89-0.99). Patients with BMI&#62;40 kg/m2 have an ORadjusted=0.09 (0.009-0.89) compared with those with BMI &#60;25 kg/m2. If ECV was successful, the cesarean delivery index is 22.2% (17.5-27.6%), the eutocic delivery index is 52.1% (46.1-58.1%) and the instrumented vaginal delivery index is 25.7% (20.7-31.2%). There are no differences in cesarean and eutocic delivery indexes after successful ECV. However, a successful ECV is associated with a 6.29% increase in the instrumented delivery rate (OR=1.63).
ECV is an effective procedure to reduce the number of cesarean sections for breech presentations. Maternal BMI and previous vaginal delivery are associated with ECV success. Successful ECV does not modify the usual delivery pattern.

This article shows how to perform the external cephalic version (ECV) by two experienced obstetricians in the obstetric operating room in the presence of an anesthesiologist and a midwife. The ECV is carried out with analgesia and tocolysis. Two attempts are made under ultrasonography control.

Externe Cephalic Version: Ist es ein effektives und sicheres Verfahren?

External cephalic version (ECV) is an effective procedure for reducing the number of cesarean sections. To date, there is no video publication showing the ...