We are grateful to Gurdon laboratory members for useful discussion. K.M. is a Research Fellow at Wolfson College and is supported by the Herchel Smith Postdoctoral Fellowship and the Great Britain Sasakawa Foundation. Gurdon laboratory is supported by grants from the Wellcome Trust (RG69899) and MRC to J.B.G.

<ol>
	<li>Miyamoto, K., Gurdon, J. B., Trounson, A., Gosden, R., Eichenlaub-Ritter, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insights+into+the+amphibian+egg+to+understand+the+mammalian+oocyte.">Insights into the amphibian egg to understand the mammalian oocyte.</a> Biology and Pathology of the Oocyte: Role in Fertility, Medicine, and Nuclear Reprogramming. , 1-11 (2013).</li><li>Heasman, J., Kofron, M., Wylie, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beta-catenin+signaling+activity+dissected+in+the+early+Xenopus+embryo:+a+novel+antisense+approach.">Beta-catenin signaling activity dissected in the early Xenopus embryo: a novel antisense approach.</a> Developmental biology. 222 (1), 124-134 (2000).</li><li>Oelgeschlager, M., Kuroda, H., Reversade, B., De Robertis, E. 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L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+generating+transgenic+frog+embryos.">A method for generating transgenic frog embryos.</a> Methods in molecular biology. 97, 393-414 (1999).</li><li>Kroll, K. L., Amaya, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+Xenopus+embryos+from+sperm+nuclear+transplantations+reveal+FGF+signaling+requirements+during+gastrulation.">Transgenic Xenopus embryos from sperm nuclear transplantations reveal FGF signaling requirements during gastrulation.</a> Development. 122 (10), 3173-3183 (1996).</li><li>Smith, S. J., Fairclough, L., Latinkic, B. V., Sparrow, D. B., Mohun, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Xenopus+laevis+transgenesis+by+sperm+nuclear+injection.">Xenopus laevis transgenesis by sperm nuclear injection.</a> Nature protocols. 1 (5), 2195-2203 (2006).</li><li>Drury, K. C., Schorderet-Slatkine, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+cycloheximide+on+the+'autocatalytic'+nature+of+the+maturation+promoting+factor+(MPF)+in+oocytes+of+Xenopus+laevis.">Effects of cycloheximide on the 'autocatalytic' nature of the maturation promoting factor (MPF) in oocytes of Xenopus laevis.</a> Cell. 4 (3), 269-274 (1975).</li><li>Smith, L. D., Ecker, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+the+oocyte+nucleus+in+physiological+maturation+in+Rana+pipiens.">Role of the oocyte nucleus in physiological maturation in Rana pipiens.</a> Developmental biology. 19 (3), 281-309 (1969).</li><li>Miyamoto, K., Pasque, V., Jullien, J., Gurdon, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nuclear+actin+polymerization+is+required+for+transcriptional+reprogramming+of+Oct4+by+oocytes.">Nuclear actin polymerization is required for transcriptional reprogramming of Oct4 by oocytes.</a> Genes &amp; development. 25 (9), 946-958 (2011).</li><li>Schneider, P. N., Hulstrand, A. M., Houston, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fertilization+of+Xenopus+oocytes+using+the+host+transfer+method.">Fertilization of Xenopus oocytes using the host transfer method.</a> J. Vis. Exp. (45), (2010).</li><li>Ishibashi, S., Cliffe, R., Amaya, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+efficient+bi-allelic+mutation+rates+using+TALENs+in+Xenopus+tropicalis).">Highly efficient bi-allelic mutation rates using TALENs in Xenopus tropicalis).</a> Biology open. 1 (12), 1273-1276 (2012).</li><li>Sakane, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+mutagenesis+of+multiple+and+paralogous+genes+in+Xenopus+laevis+using+two+pairs+of+transcription+activator-like+effector+nucleases.">Targeted mutagenesis of multiple and paralogous genes in Xenopus laevis using two pairs of transcription activator-like effector nucleases.</a> Development, growth &amp; differentiation. 56 (1), 108-114 (2014).</li><li>Nakayama, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simple+and+efficient+CRISPR/Cas9-mediated+targeted+mutagenesis+in+Xenopus+tropicalis.">Simple and efficient CRISPR/Cas9-mediated targeted mutagenesis in Xenopus tropicalis.</a> Genesis. 51 (12), 835-843 (2013).</li><li>Guo, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+RNA/Cas9-mediated+genome+editing+in+Xenopus+tropicalis.">Efficient RNA/Cas9-mediated genome editing in Xenopus tropicalis.</a> Development. 141 (3), 707-714 (2014).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

Wir hier ausführlich eine neue Methode, um mütterliche Faktoren zum Abbau oder exogene Faktoren vor der Befruchtung überexprimieren. Dieses System erfordert zwei Mikroinjektionen, sondern überspringt die Operation von Fröschen, in der Host-Übertragungsmethode 7,17 verwendet. Es ist optimal, um den Frosch Operation Schritt im Hinblick auf die Pflege der Tiere zu entfernen. Darüber hinaus haben wir nicht zu berücksichtigen, für die Qualität der Gast weiblichen Frösche für die Transferexperimente zu nehmen, was bedeutet, dass wir von einem biologischen Faktor, der den Erfolg der Experimente betrifft loszuwerden. Daher in diesem System die Qualität der Eizellen von PMSG grundiert Frösche erhalten ist ein wichtiger Faktor, der biologischen Schlüssel für erfolgreiche Experimente ist. Die Qualität der Eizellen nach der Entnahme der Eierstöcke oder nach defolliculation beurteilt werden. Wenn irgendeine Abnormalität in diesen Phasen beobachtet wird, ist es optimal, einen weiteren Ovar von neuen Frosches sammeln. Ein weiterer Punkt, wenn man die Qualität der Oozyten zu überprüfen, ist nach Eizellreifung. Wenn weniger als 80% der progesteronE-behandelten Oozyten zeigen Anzeichen von Reife, können Sie nicht in der Lage, die genug Anzahl von Embryonen für weitere Analysen zu erhalten. Die Verwendung von enzymatischen defolliculation statt manuell defolliculation ist auch ein weiterer Vorteil der Verwendung dieses Systems, um die Arbeit für defolliculation reduzieren. Jedoch ist es immer noch möglich, dass eine manuelle defolliculation kann eine besser als der enzymatischen Behandlung. Wie in 3 gezeigt, fast 10% der in vitro gereiften Eizellen können die Schwimm Kaulquappenstadium erreichen. Diese Daten werden aus 13 unabhängigen Experimenten einschließlich der in 8 und neue Injektion Versuche berichtet gesammelt. Host-Übertragungsmethode benötigt 75-150 Oozyten in jeder Behandlung zur Gewinnung von aussagekräftigen Daten, da 30-60% der übertragenen Oozyten können die Neurulastadium 17 zu erreichen. Unsere Methode beginnt normalerweise mit 200-300 Oozyten in jeder Versuchsgruppe seit etwa 40-60% der gespalten Embryonen können die zu erreichenMuskelreaktion Bühne. Diese Daten legen nahe, dass beide Methoden unterstützt eine angemessene Entwicklungsrate. Bisher haben wir erhalten 10 Leben Frösche von Steuer mRNA injiziert und Kontrollantisense-Oligo-injizierten Oozyten mit dieser Technik, was darauf hinweist, dass dieser Ansatz unterstützt die Entwicklung durch Metamorphose. Unsere Oozyte manipulations ICSI Verfahren bietet die Möglichkeit, die Rolle der mütterliche Faktoren in sehr frühen embryonalen Entwicklung zu testen, kurz nach der Befruchtung. Darüber hinaus kann die Überexpression von Chromatin modifizierenden Faktoren vor der Befruchtung ermöglichen es, mütterlichen Chromatin vor der Befruchtung für das Verständnis für die Entwicklung notwendige mütterliche Chromatinzustände umzugestalten. Diese Strategie kann auch gut mit aktuellen Gen-Editing-Systeme wie TALENs (TALEN) 18,19 und CRISPR / CAS9 20,21 da diese schon vor der Befruchtung ausgedrückt werden zu arbeiten. Daher hat unser neuer Ansatz eine potential, für viele Anwendungen in der Zukunft verwendet werden.

Xenopus laevis ist eine weit verbreitete, leistungsfähige Modellorganismus, um die Entwicklung 1 zu untersuchen. Dies liegt daran, Xenopus Eiern ungewöhnlich groß sind (ungefähr 1,2-1,4 mm, im Vergleich zu Säugetier-Gegenstücke etwa 0,1 mm) und reichlich vorhanden. Eier enthalten mütterlich synthetisiert und gespeichert Komponenten, die genug, um die embryonale Entwicklung bis Mitte Blastula Übergang fahren sind (MBT, in der Phase 8-8,5 auftretenden mit 4.000-8.000 Zellen). MBT wird durch zygotischen Genom-Aktivierung, die dann produziert embryonalen Genprodukten Weiterentwicklung direkt verbunden. Zahlreiche Studien zielte darauf ab, mütterliche Faktoren wichtig für die Entwicklung zu identifizieren. Viele Untersuchungen beruhen auf der Injektion von Antisense-Oligonukleotide (Oligos) mit Morpholino-Oligonukleotide in befruchtete Embryonen, wobei Abbau der mütterlichen Proteine ​​können im Gastrula-Stadium 2-4 einzuhalten. Alternativ werden mRNAs befruchteten em injiziertbryonen um Genfunktionen zu stören oder zu Schicksale überexprimiert Proteine ​​zu verfolgen. Jedoch ist die Injektion in die Ein-Zell Embryonen normalerweise nicht beeinflusst Expressionsniveaus von mütterlichen Proteine ​​bei den sehr frühen embryonalen Stadien vor MBT. Heasman und Wylie gründete die Host-Übertragungsverfahren, um dieses Problem zu überwinden, 5. In ihrer Methode werden manuell defollikuliert Oozyten, die mit Antisense-Oligos injiziert und in Wirts Weibchen 6 übertragen. Proteine ​​werden vor der Befruchtung herunterreguliert, so dass die Rollen von regulierte Proteine ​​in frühen embryonalen Entwicklung untersucht werden können. Das mütterliche Abreicherungsverfahren führte zur Identifizierung von mehreren einzigartigen Entwicklungsrollen mütterlicher Proteine, wie in 7 überprüft. In diesem Bericht werden wir ausführlich unsere neu entwickelte Methode, bei der mütterliche Erschöpfung oder Überexpression von mRNA vor der Befruchtung wird ohne manuelle defolliculation und Host-Übertragungs erreicht8. Hand defolliculation erfordert viel Zeit und Host-Übertragungs braucht oft geschickte Techniken und die spezifische Lizenz für Tierchirurgie, wodurch die häufige Verwendung von mütterlichem Erschöpfung Verfahren behindern. Defolliculation und Host-Übertragungs durch enzymatische defolliculation 9,10 und intrazytoplasmatische Spermieninjektion (ICSI) von 11 bis 13 ersetzt sind. ICSI, Eier wurde ursprünglich zur transgenen Fröschen 12 zu produzieren. Sperma und embryonalen Kerne wurden in in vitro gereiften Eizellen Amphibien 11,14,15 transplantiert. Hier zeigen wir unsere Schritt-für-Schritt-Methode, um Spermien in vitro gereiften Eizellen, die waren zu injizieren mit Antisense-Oligos oder pre-mRNA injiziert.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="589">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Name of Reagent/ Equipment</td>
			<td style="width:87px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:167px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Pregnant Mare Serum Gonadotropin (PMSG)&#160;</td>
			<td style="width:87px;">MSD Animal Health</td>
			<td style="width:119px;">Vm 01708/4309</td>
			<td>PMSG-Intervet 5000iu powder and solvent for solution for injection</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Ethyl 3-aminobenzoate methanesulfonate salt (MS222)</td>
			<td style="width:87px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">A5040</td>
			<td>For anesthesia</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:216px;">Liberase TM Research Grade</td>
			<td style="width:87px;">Roche</td>
			<td style="width:119px;">05 401 127 001</td>
			<td>For oocyte defolliculation. Store at -20oC</td>
		</tr>
		<tr height="72">
			<td height="72" style="height:72px;width:216px;">Drummond Nanoject</td>
			<td style="width:87px;">Drummond Scientific Company</td>
			<td style="width:119px;">3-000-205/206</td>
			<td>For microinjection</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">glass capillary&#160;</td>
			<td style="width:87px;">Alpha laboratories</td>
			<td style="width:119px;">7&#8221; Drummond #3-000-203-G/XL</td>
			<td>For microinjection</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Micropipette Puller&#160;</td>
			<td style="width:87px;">SUTTER Instrument</td>
			<td style="width:119px;">Model D-97</td>
			<td>For microinjection</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">UltraPure Agarose</td>
			<td style="width:87px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">16500-500</td>
			<td>For invitro maturation and ICSI</td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:216px;">14 ml ultra-clear centrifuge tube&#160;</td>
			<td style="width:87px;">Beckman Coulter United Kingdom Ltd</td>
			<td style="width:119px;">344060</td>
			<td>For sperm purification</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">OptiPrep Density Gradient Medium (Iodixanol)</td>
			<td style="width:87px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">D1556</td>
			<td>For sperm purification</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Digitonin</td>
			<td style="width:87px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">D141</td>
			<td>Cell permeabilization reagent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Shaker</td>
			<td style="width:87px;">Hybaid&#160;</td>
			<td style="width:119px;">HB-SHK-1</td>
			<td>For oocyte defolliculation.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Dissecting microscope (Stereo zoom microscope)</td>
			<td style="width:87px;">ZEISS</td>
			<td style="width:119px;">Semi SV6</td>
			<td>For oocyte collection and microinjection</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">50 &#956;m pore filter</td>
			<td style="width:87px;">CellTrics</td>
			<td style="width:119px;">04-0042-2317</td>
			<td>For sperm purification</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Ultracentrifuge</td>
			<td style="width:87px;">Beckman Coulter</td>
			<td style="width:119px;">Optima L-100XP</td>
			<td>For sperm purification</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">50 ml centrifuge tube</td>
			<td style="width:87px;">Cellstar Greiner Bio-One</td>
			<td style="width:119px;">227261 or 210261</td>
			<td>Oocyte collection and defolliculation reaction</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">15 ml centrifuge tube</td>
			<td style="width:87px;">FALCON</td>
			<td style="width:119px;">352097</td>
			<td>For sperm purification</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">90 mm Petri dish&#160;</td>
			<td style="width:87px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:119px;">101VR20/C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Easy-Grip Cell Culture Dish, 60x15 mm</td>
			<td style="width:87px;">FALCON</td>
			<td style="width:119px;">353004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Easy-Grip Cell Culture Dish, 35x15 mm</td>
			<td style="width:87px;">FALCON</td>
			<td style="width:119px;">351008</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

manipulation and in vitro maturation of xenopus laevis oocytes, followed by intracytoplasmic sperm injection, to study embryonic development

Amphibian eggs have been widely used to study embryonic development. Early embryonic development is driven by maternally stored factors accumulated during oogenesis. In order to study roles of such maternal factors in early embryonic development, it is desirable to manipulate their functions from the very beginning of embryonic development. Conventional ways of gene interference are achieved by injection of antisense oligonucleotides (oligos) or mRNA into fertilized eggs, enabling under- or over-expression of specific proteins, respectively. However, these methods normally require more than several hours until protein expression is affected, and, hence, the interference of gene functions is not effective during early embryonic stages. Here, we introduce an experimental system in which expression levels of maternal proteins can be altered before fertilization. Xenopus laevis oocytes obtained from ovaries are defolliculated by incubating with enzymes. Antisense oligos or mRNAs are injected into defolliculated oocytes at the germinal vesicle (GV) stage. These oocytes are in vitro matured to eggs at the metaphase II (MII) stage, followed by intracytoplasmic sperm injection (ICSI). By this way, up to 10% of ICSI embryos can reach the swimming tadpole stage, thus allowing functional tests of specific gene knockdown or overexpression. This approach can be a useful way to study roles of maternally stored factors in early embryonic development.

Embryonalentwicklung ICSI-Embryonen unter Verwendung von in vitro gereiften Eizellen wurde (3A) untersucht. Reifungsgeschwindigkeiten von GV-Oozyten, um den MII Stufe sind variabel und hängt weitgehend von der Qualität der Oozyten. In guten Experimente fast 100% der GV-Oozyten reagieren auf Progesteron und zeigen Anzeichen von Eizellreifung, zuletzt als Eier am MII Stadium. Alle gereiften Eizellen wurden ICSI (7 ohne Oligo-injizierten Oozyten 3A, n = 13 für die Steuerung verwürfelten oligo-injizierten Oocyten und n =) unterzogen und etwa 25% der injizierten Eier abgespalten. Etwa 60% oder 80% des gespaltenen Embryonen aus Steuer oligo-injizierten Oozyten oder nicht injizierten Oozyten erzeugt jeweils erreichte die Blastula / Gastrulastadium. Unter den Blastula / Gastrula Embryonen waren von guter Qualität (fast keine Anzeichen von anomaler Spaltung und Apoptose) etwa die Hälfte der Embryonen in Oligo-Proben injiziert, während 82% der Blastula / Gastrula Embryonen waren von guter Qualität in non-injizierten Proben (3A). Schließlich, 41% und 11% der gespaltenen Embryonen in Oligo-injizierten Proben erreichten die Muskelreaktionen und die Schwimm Kaulquappe Stufen eingesetzt werden, wobei 60% und 29% der gespaltenen Embryonen nicht injizierten Proben war (3A). Diese ICSI-Embryonen werden die Mischung aus normalen und abnormalen Embryonen (3B). Einige von ihnen Metamorphose und zu entwickeln, um Frösche 8 reifen. Diese Ergebnisse legen nahe, dass die Injektion von Antisense-Oligonukleotide in GV-Oozyten, gefolgt von IVM und ICSI, ermöglicht eine effiziente frühen Embryonalentwicklung. Obwohl die Injektion von Antisense-Oligos selbst abnimmt Embryonalentwicklung, sind wir immer noch in der Lage, genug Embryonen für viele experimentelle Zwecke wie etwa die Überprüfung Entwicklungsraten zu erhalten, RT-PCR, Western-Blot und so weiter. <img alt="Figur 1" src="/files/ftp_upload/52496/52496fig1highres.jpg" /> Feige<html> ure 1: Typische Beispiele für Xenopus laevis Oozyten von guter Qualität oder schlechte Qualität für in-vitro-Reifung Experimente. (A) Ein Beispiel für eine schlechte Qualität Oozyten. Beispielsweise werden Oozyten zeigt fleckige Pigmentierung nicht für nachfolgende Experimente verwendet. Jede Xenopus laevis etwa 1,2-1,4 mm im Durchmesser. (B) Ein teilweise defollikuliert Eizelle. Die rechte Hälfte der Eizelle durch Follikelzellen, die durch das Vorhandensein der Blutgefäße erkennen kann abgedeckt. Ein Pfeil zeigt einen Bereich frei von Follikel-Zellen und in der die Injektionsnadel injiziert wird. (C) Ein Beispiel für gute Qualität Oozyten, die gleich große sind und zeigen, gleichmäßig pigmentierte Tierhalbkugeln mit klaren Kontrast zwischen dem Tier Hemisphäre und der pflanzlichen Hemisphäre. 2496 / 52496fig2highres.jpg &quot;/&gt; Abbildung 2:. Xenopus laevis Oozyten vor und nach der Reifung Nach Eizellreifung, an der Spitze der Tierhälften und Follikelzellen erscheinen klare weiße Flecken sind abgezogen. Jede Xenopus laevis Oozyten ist etwa 1 mm im Durchmesser. <img alt="Figur 3" src="/files/ftp_upload/52496/52496fig3highres.jpg" /> Abbildung 3: Entwicklung der ICSI-Embryonen aus in vitro gereiften Eizellen produziert. (A) Entwicklung von ICSI-Embryonen auf jeder Stufe zusammengefasst. Oocyten injiziert mit Steuer verwürfelten Antisense-Oligonukleotide (Oligo Steuereinspritzung) oder ohne Injektion (non-Injektion), gefolgt von IVM und ICSI. Die entsprechende Anzahl von Embryonen in jeder Stufe oberhalb der Balken dargestellt. Mittelwert ± SEM dargestellt. N = 4-13 unabhängigen Experimenten / verschiedene females. (B) Beispiele für überlebende ICSI-Embryonen. Diese Schwanzknospen-Embryonen wurden in einem Experiment, bei dem etwa 200 Oozyten wurden als Ausgangsmaterial verwendet wird produziert.

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Manipulation and In Vitro Maturation of Xenopus laevis Oocytes, Followed by Intracytoplasmic Sperm Injection, to Study Embryonic Development

We describe methods of manipulating Xenopus laevis immature oocytes, in vitro maturation of oocytes to eggs, and intracytoplasmic sperm injection. This protocol allows degradation of some maternal proteins and overexpression of genes of interest at fertilization, and hence is valuable to study roles of specific factors in early embryonic development.

Manipulation und<em&gt; In-vitro-</em&gt; Ausbau der<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; Eizellen, von Intrazytoplasmatische Spermieninjektion gefolgt, um embryonale Entwicklungsstudie

Amphibian eggs have been widely used to study embryonic development. Early embryonic development is driven by maternally stored factors accumulated during ...

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Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Manipulation and In Vitro Maturation of Xenopus laevis Oocytes, Followed by Intracytoplasmic Sperm Injection, to Study Embryonic Development

22.0K Aufrufe.  University of Cambridge. We describe methods of manipulating Xenopus laevis immature oocytes, in vitro maturation of oocytes to eggs, and intracytoplasmic sperm injection. This protocol allows degradation of some maternal proteins and overexpression of genes of interest at fertilization, and hence is valuable to study roles of specific factors in early embryonic development.