Name: dissection of the mouse pancreas for histological analysis and metabolic profiling
Uploaded: 2017-08-19T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 21 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Dissection of the Mouse Pancreas for Histological Analysis and Metabolic Profiling at JoVE.com

MAK bestätigt Unterstützung für diese Arbeit von den National Institutes of Health / National Cancer Institute grant-Nummer - 1R15CA152985-01A1. Dieses Projekt wurde auch von Miami University Undergraduate Research Award Program, die Miami University Doktorat-Studium Möglichkeiten für Scholarship Program und der Miami University Sommer Scholars Program unterstützt.

durchgeführt, in dem Video und weiter unten beschriebenen Abläufe von der institutionellen Animal Care und Nutzung Committee (IACUC) an der Universität Miami genehmigt worden.
 1. Vorbereitung und Impuls-Test <ol><li>stellen zwei verschiedene Bereiche für den chirurgischen Eingriff, dem OP-Tisch und dem Post-OP-Tisch. Inszenieren Sie beide Bereiche mit allen Materialien und Utensilien notwendig.
	<ol><li>Bühne, die das Betriebssystem Tabelle unter eine belüftete Haube. Ordnen Sie die Tabelle mit der Ausrüstung in einer Weise, die die kontinuierliche und ungehinderte Leistung des Verfahrens erlaubt.</li>
		<li>Schaffen eine postoperative Tabelle im selben Raum und in der Nähe der Haupt-Tabelle des Vorgangs. Beide Tabellen als sterile Umgebungen während des Verfahrens zu erhalten.</li>
	</ol></li> <li>Ort die folgenden liefert auf dem OP-Tisch: ein Glas mit Deckel, eine 15 mL Tube, einem Paar Chirurgische Scheren, ein Squeeze-Flasche von 70 % Ethanol, zwei Schaumstoffplatten, zwei Zangen, zwei 1 mL 21 Gauge Spritzen, zwei 50 mL Röhrchen ein Zentrifugenröhrchen , eine kryogene Durchstechflasche, vier chirurgischen Pads, zehn Pins, einem Dispenser sterilisieren Tücher und Sharps Container.</li>
	<li>Legen Sie die folgenden Lieferungen auf dem Post-OP-Tisch: eine Analysenwaage, einer 4 L Dewar von flüssigem Stickstoff, einem flachen breiten Mund Dewar, einem schwimmenden Reaktionscup Rack, ein paar Chirurgische Scheren, zwei Zangen, vier kryogene Fläschchen und ein Spender von sterile Tücher.</li>
	<li>Füllen Sie ein 50 mL und eine 15 mL Tube zu 75 % des Volumens mit Formalin.</li>
	<li>Mit einem Stift in jeder Ecke ein OP Pad, ein ca. 30 cm x 30 cm Hartschaumplatten dienen als Dissektion Board befestigen. Nutzen Sie die verbleibenden vier Stifte während des Betriebs. Bereiten Sie eine kleinere Hartschaumplatten mit einem OP Pad übertragen die Organe auf der Post-Op-Tisch. 
	Achtung: Isofluran (99,9 %) ist eine giftige Chemikalie, und sollte in einer Abzugshaube verwendet werden, um das Höchstmaß an Sicherheit aus der Aufräumvorgang Narkose Abgas 8 sicherzustellen. Weitere Informationen über die Risiken für die Forscher im Zusammenhang mit der Verwendung der Open-Drop-Methode mit Isofluran finden Sie in einem Artikel von Taylor und Mook 8.</li>
	<li>Eine OP Pad in das Glasgefäß und Einweichen mit ein paar Tropfen von Isofluran (99,9 %) und einem Papiertuch über den Rand zu direkten Kontakt der Maus mit der Isofluran zu verhindern. Ebenso eine OP Pad verwenden, um säumen den verbleibenden Schlauch und Tränken mit ein paar Tropfen Isoflurane und legen Sie eine zusätzliche Pad über den Rand zu direkten Kontakt zwischen der Maus und der Isofluran verhindern.</li>
	<li>Pour Flüssigstickstoff in den flachen breiten Mund Dewar, bis das Maximum füllen Zeile erreicht ist.</li>
	<li>Statt der Maus ausgewählt für die Dissektion in die Narkose Kammer, d. h. das Glasgefäß mit einem Pad, getränkt mit ein paar Tropfen Isofluran (99,9 %) bedeckt mit Deckel, für ~ 1 min. 
	Hinweis: Diese Zeit variiert von Maus zu Maus. Sobald die Maus bewusstlos ist, entfernen Sie es aus der Kammer und platzieren Sie es auf das Bedienboard.</li>
	<li>Ausrichten die Maus, sodass es Bauchseite bis und mit dem Kopf wies Weg von der Wissenschaftler aufliegt. Legen Sie den Kopf in die Röhre, gesäumt von einer OP Pad getränkt mit ein paar Tropfen von Isofluran (99,9 %), und führen Sie einen Impuls-Test durch eine Prise Fuß um sicherzustellen, dass die Maus nicht auf Reize reagiert.
	<ol><li>Wenn dieser Test fehlschlägt und die Maus auf den Fuß Kneiftest reagiert, wiederholen Sie Schritt 1.8.</li>
	</ol></li></ol> 2. Erster Schnitt, Herz durchbohren und Euthanasie <ol><li>Pin die Gliedmaßen der Maus auf die chirurgische Dämmplatte und nass die ventrale Seite der Maus mit 70 % igem Ethanol.</li>
	<li>Die Fell/Haut in der Nähe der Harnröhrenöffnung mit Zange zusammendrücken und leicht nach oben ziehen. Machen Sie einen Schnitt mit der chirurgische Schere durch die Bauchhöhle der Harnröhrenöffnung auf der Mittellinie beginnend und endend am Kinn.
	<ol><li>Nahe des Startpunktes des ersten Schnittes, einseitig das Fell/Haut mit der Zange greifen und machen ein weiterer Schnitt mit der Schere nach unten und schräg in Richtung der hinteren Pfote.</li>
		<li>Wiederholen Sie diesen Vorgang auf die gleiche Weise auf der gegenüberliegenden Seite. 
		Hinweis: Die Fell/Haut kann eine breitere Öffnung erstellen festgenagelt werden, aber ist nicht notwendig.</li>
	</ol></li> <li>Herzen suchen und entfernen Sie das Perikard, die der Sac in der Herzgegend, zur Vermeidung von Verstopfungen der Spritzennadel ist.
	<ol><li>Der Herzbeutel mit der Zange fassen und mit der Schere ausschneiden. Führen Sie die Herz-Punktion durch sorgfältig die Spritzennadel in das schlagende Herz und beginnen Sie langsam den Kolben zurückziehen.</li>
		<li>Für die optimale Blutentnahme, verwenden Sie den Kolben der Nadel zu imitieren die Pumpfunktion des Herzens und vermeiden zu schnelles zeichnen. 
		Hinweis: In der Regel etwa 1 mL Blut gesammelt werden können.</li>
		<li>Nach Abschluss der Blutentnahme, zerstreuen das Blut in die Zentrifugenröhrchen und entsorgen Sie die Spritze in die Scharfbehälter.</li>
		<li>Nach der Herz-Punktion durchführen Euthanasie durch Entfernen der Anlagen verbinden Herzen. 
		Hinweis: Heparin, ein Antigerinnungsmittel, wurde die Spritze in diesem Verfahren vor Herz durchbohren um das Blut zu gerinnen für Serum-Sammlung in dieser spezifischen Studie ermöglichen nicht hinzugefügt. Jedoch wenn der Forscher Blutgerinnung Sammle Plasma verhindern wollte, Heparin konnte hinzugefügt werden, die Spritze vor der Herz-Punktion.</li>
	</ol></li> <li>Wenn die Studie Genotypisierung der Maus beinhaltet, einen Teil des Ohrs mit der Schere schneiden und legen Sie in ein Zentrifugenröhrchen für eine Überprüfung der Genotyp.</li></ol>
 3. Bauchspeicheldrüse Extraktion <ol><li>suchen den Magen auf der linken Seite der Maus. Beginnen Sie vorsichtig (um reißen zu vermeiden) trennt die Bauchspeicheldrüse, Magen und Zwölffingerdarm mit zwei Pinzetten. 
	Hinweis: Wenn die Bauchspeicheldrüse vom Magen und Darm zu trennen, ist es sehr wichtig, dass die Zange vorsichtig verwendet werden, um das Pankreas-Gewebe Weg von den Organen zu führen und zu nicht zerdrücken oder reißen die Bauchspeicheldrüse mit der Zange.
	<ol><li>Weiterhin die Bauchspeicheldrüse aus den Dünndarm Jejunum und Ileum, trennen und schließlich von der Blinddarm des Dickdarms.</li>
	</ol></li> <li>An den Blinddarm, positionieren Sie die Zange und Trennung der Bauchspeicheldrüse entlang der restlichen Doppelpunkt in Richtung Enddarm. 
	Hinweis: An dieser Stelle ist es bequem zu schneiden und entfernen den Teil aus dem Magen in die Region des Dickdarms, die unmittelbar vor dem Rektum.</li>
	<li>Suchen Sie die Bauchspeicheldrüse und Milz zugeordnet. Schieben Sie die Bauchspeicheldrüse zur rechten Seite der Maus. Trennen Sie die restlichen Verbindungen zwischen der Bauchspeicheldrüse und der Brusthöhle mit der Zange, vollständig zu lösen, der Bauchspeicheldrüse und der angrenzenden Milz.</li>
	<li>Die Bauchspeicheldrüse zu entfernen und zur Prüfung verteilt. Lassen Sie die Milz an der Bauchspeicheldrüse zu Identifizierungszwecken befestigt.
	<ol><li>Entfernen Sie alle Bindegewebe, Fett und mesenterialen Gewebe aus der Bauchspeicheldrüse. 
		Hinweis: Dieses Gewebe ist von weißer Farbe und somit aus dem Gewebe der Bauchspeicheldrüse, das pinker Farbe ist leicht unterschieden werden kann. Dies ist besonders wichtig, wenn die ganze Bauchspeicheldrüse entfernt werden muss. Zum Beispiel, wenn die Bauchspeicheldrüse muss abgewogen und im Vergleich zu Körpergewicht oder zwischen Gruppen von Tieren. In der Ptf1a Cre / +; LSL-Kras G12D / + Mausmodell, speziell in den älteren Monaten harten faserigen Bauchspeicheldrüsen-Gewebe vorhanden sein könnten. In diesem Fall muss sorgfältige Entfernung der Bauchspeicheldrüse durchgeführt werden, da der Darm im Tumorgewebe interlaced sein könnte. In fortgeschrittenen Fällen abnorme Milz und Leber können auch vorhanden sein.</li>
	</ol></li> <li>Auf Wunsch entfernen andere Organe an dieser Stelle.</li></ol>
 4. Datenerhebung und-Speicherung <ol><li>nach der Extraktion der Organe, verschieben die Proben in den postoperativen Bereich für Erhaltung.</li>
	<li>Wiegen jedes Organ und legen Sie sie in ihre jeweiligen kryogenen Vial. 
	Hinweis: entlang with die Masse jeder Probe sollte etwaige Unregelmäßigkeiten zu Referenzzwecken aufgezeichnet werden.</li>
	<li>Sobald die Organe gewogen sind, legen Sie sie in den flüssigen Stickstoff für Snap einfrieren.</li>
	<li>Nach dem Fang Einfrieren, aufbewahren der Organe bei-80 ° C für die Langzeitspeicherung.</li>
	<li>Stellen die Formalin aufbewahrt Proben auf der Bank-Oberseite über Nacht und am nächste Morgen ändern ihre Lösung von Formalin in 70 % igem Ethanol. 
	Hinweis: Diese Beispiele sollten gespeichert werden, bei 4 ° C für die Langzeitspeicherung.</li>
	<li>Für langfristige Lagerung, Einfrieren die Blut und Ohr Punch bei-80 ° c. Lassen Sie für Serum-Sammlung aus dem Blut das Blut gerinnen für 30 min dann Zentrifugieren sie. Die Serum-Teil mit einer Pipette zu entfernen und dann speichern bei-80 ° c</li>
</ol> 5. Clean Up <ol><li>desinfizieren die Dissektion Werkzeuge mit der Sterilisation Tücher. Verschluss der Röhre, gesäumt von den Isofluran getränkt OP Pad. Ersetzen Sie die OP Pad auf der Dämmplatte mit einem frischen OP Pad. Entsorgen Sie die Teile der Maus, die nicht pro Anlage gesammelt wurden &#39; s Tier Entsorgung Politik.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Fesinmeyer, M. D., Austin, M. A., Li, C. I., De Roos, A. J., Bowen, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differences+in+Survival+by+Histologic+Type+of+Pancreatic+Cancer.">Differences in Survival by Histologic Type of Pancreatic Cancer.</a> Cancer Epidemiol Biomarkers Prev. 14 (7), 1766-1773 (2005).</li><li>Jackson-Grusby, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+cancer+in+mice.">Modeling cancer in mice.</a> Oncogene. 21 (35), 5504-5514 (2002).</li><li>Heid, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+requirement+of+Rac1+in+a+mouse+model+of+pancreatic+cancer.">Early requirement of Rac1 in a mouse model of pancreatic cancer.</a> Gastroenterology. 141 (2), 719-730 (2011).</li><li>Hingorani, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preinvasive+and+invasive+ductal+pancreatic+cancer+and+its+early+detection+in+the+mouse.">Preinvasive and invasive ductal pancreatic cancer and its early detection in the mouse.</a> Cancer cell. 4 (6), 437-450 (2003).</li><li>Shi, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=KRAS2+Mutations+in+Human+Pancreatic+Acinar-Ductal+Metaplastic+Lesions+Are+Limited+to+Those+with+PanIN+Implications+for+the+Human+Pancreatic+Cancer+Cell+of+Origin.">KRAS2 Mutations in Human Pancreatic Acinar-Ductal Metaplastic Lesions Are Limited to Those with PanIN Implications for the Human Pancreatic Cancer Cell of Origin.</a> Mol Cancer Res. 7 (2), 230-236 (2009).</li><li>LaConti, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+serum+metabolomics+profiles+associated+with+malignant+progression+in+the+KrasG12D+mouse+model+of+pancreatic+ductal+adenocarcinoma.">Distinct serum metabolomics profiles associated with malignant progression in the KrasG12D mouse model of pancreatic ductal adenocarcinoma.</a> BMC Genomics. 16 (1), 1-10 (2015).</li><li>Ludwig, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surveying+the+serologic+proteome+in+a+tissue-specific+kras(G12D)+knockin+mouse+model+of+pancreatic+cancer.">Surveying the serologic proteome in a tissue-specific kras(G12D) knockin mouse model of pancreatic cancer.</a> Proteomics. 16 (3), 516-531 (2016).</li><li>Taylor, D. K., Mook, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isoflurane+Waste+Anesthetic+Gas+Concentrations+Associated+with+the+Open-Drop+Method.">Isoflurane Waste Anesthetic Gas Concentrations Associated with the Open-Drop Method.</a> J Am Assoc Lab Anim Sci. 48 (1), 61-64 (2009).</li><li>Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+sample+collection+in+small+laboratory+animals.">Blood sample collection in small laboratory animals.</a> J Pharmacol Pharmacother. 1 (2), 87-93 (2010).</li><li>Li, D. S., Yuan, Y. H., Tu, H. J., Liang, Q. L., Dai, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+protocol+for+islet+isolation+from+mouse+pancreas.">A protocol for islet isolation from mouse pancreas.</a> Nature Protocols. 4 (11), 1649-1652 (2009).</li><li>Auer, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+frozen+tissue+storage+conditions+on+the+integrity+of+RNA+and+protein.">The effects of frozen tissue storage conditions on the integrity of RNA and protein.</a> Biotech Histochem. 89 (7), 518-528 (2014).</li><li>Ma, J., Leung, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limbic+System+Participates+in+Mediating+the+Effects+of+General+Anesthetics.">Limbic System Participates in Mediating the Effects of General Anesthetics.</a> Neuropsychopharmacology. 31, 1177-1192 (2006).</li><li>Ijichi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aggressive+pancreatic+ductal+adenocarcinoma+in+mice+caused+by+pancreas-specific+blockade+of+transforming+growth+factor-&#946;+signaling+in+cooperation+with+active+Kras+expression.">Aggressive pancreatic ductal adenocarcinoma in mice caused by pancreas-specific blockade of transforming growth factor-&#946; signaling in cooperation with active Kras expression.</a> Genes Dev. 20 (22), 3147-3160 (2006).</li><li>Abiatari, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Moesin-dependent+cytoskeleton+remodelling+is+associated+with+an+anaplastic+phenotype+of+pancreatic+cancer.">Moesin-dependent cytoskeleton remodelling is associated with an anaplastic phenotype of pancreatic cancer.</a> J Cell Mol Med. 14 (5), 1166-1179 (2010).</li><li>Goodpaster, A. M., Romick-Rosendale, L. E., Kennedy, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=a+Statistical+significance+analysis+of+nuclear+magnetic+resonance-based+metabonomics+data.">a Statistical significance analysis of nuclear magnetic resonance-based metabonomics data.</a> Analytical biochemistry. 401, 134-143 (2010).</li><li>Yadav, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Idiopathic+Tumefactive+Chronic+Pancreatitis:+Clinical+Profile,+Histology,+and+Natural+History+After+Resection.">Idiopathic Tumefactive Chronic Pancreatitis: Clinical Profile, Histology, and Natural History After Resection.</a> Clin Gastroenterol Hepatol. 1 (2), 129-135 (2003).</li></ol>

Die Autoren haben nichts preisgeben.

Bedeutung im Hinblick auf bestehende Methoden Während andere informelle Videos von Maus Sezierungen vorhanden sind, in diesem video Artikel finden die ersten Profi-Qualität, Peer review, visuelle Demonstration aller die detaillierten Schritte erforderlich für die Extraktion und die Ernte von der Maus Bauchspeicheldrüse durch Dissektion10 . Mit der Bauchspeicheldrüse wird eine Hauptorgel für metabolische Aktivität und Insulin ermöglicht Produktion, Dissektion und Ernte d...

Die Maus hat ein wichtiges Tier Modell des menschlichen pankreatischen Krebses1,2entwickelt. In der Ptf1aCre / +; LSL-KrasG12D / + Maus-Modell, die Kristen Ratte Sarkom (K-Ras) Onkogen ist ausschließlich in der Bauchspeicheldrüse, was Einleitung von präkanzerösen Läsionen in der Bauchspeicheldrüse, bekannt als Pankreas intraepitheliale Neoplasie (liegen), dass der Fortschritt aktiviert zu pankreatischen duktalen Adenokarzinome, gemeinhin als PDACs3. Dieses Maus-Modell-System bietet eines der verfügbaren Tiermodelle für menschlichen pankreatischen Krebs4,5, mit dem zusätzlichen Vorteil, die sich die liegen innerhalb der ersten fünf Monate des Lebens und häufig Fortschritte PDAC innerhalb einer einzelne Jahr4,5, während Bauchspeicheldrüsenkrebs am häufigsten bei Menschen 60-70 Jahre alt tritt.
Extraktion der Bauchspeicheldrüse durch Dissektion aus der Ptf1aCre / +; LSL-KrasG12D / + Mäuse in verschiedenen Altersstufen ermöglicht detaillierte längs histologische Untersuchung der Entwicklung von Krebs in der Bauchspeicheldrüse PDAC3,4 von den frühesten Stadien der PanIN durch das Fortschreiten bis , 5. Ernte der Bauchspeicheldrüsenkrebs im Alter von fünf bis fünfzehn Monate Gewebe vorzubereiten Auszüge zu globalen Veränderungen im Pankreas4 Stoffwechsel zu charakterisieren, die auftreten, während der Übergang vom gesunden zum erkrankten Gewebe verwendet werden 6,7.
Dieser Artikel stellt eine komplette visuelle Anleitung die erforderlichen Schritte zum Ausführen einer Maus Bauchspeicheldrüse Extraktion und enthält Richtlinien für die Lagerung der Bauchspeicheldrüse zur weiteren Analyse. Dieses Handbuch wird für Einzelpersonen forschen auf andere Pankreas Erkrankungen, darunter Diabetes Typ I und besonders nützlich für Studenten und Forscher neu in Forschung, die Ernte von Pankreas Maus sollte gleichermaßen wertvoll sein Präparation für metabolic profiling oder histologische Analysen.

<table><tbody><tr><td>Glass Jar&amp;nbsp;</td><td>Corning</td><td>3140-150</td><td>The glass jar used in the video has been discontinued.&amp;nbsp; This is its replacement.</td></tr><tr><td>Lid of Glass Jar</td><td>Corning</td><td>9985-150</td><td>The glass jar lid used in the video has been discontinued.&amp;nbsp; This is its replacement.</td></tr><tr><td>15 mL Falcon Tubes</td><td>Fisher Scientific</td><td>339650</td><td></td></tr><tr><td>Surgical Scissors</td><td>Fisher Scientific</td><td>9201</td><td></td></tr><tr><td>Squeeze bottle&amp;nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>03-409-10DD</td><td></td></tr><tr><td>100% Ethanol</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-032-103</td><td></td></tr><tr><td>Formalin</td><td>Fisher Scientific</td><td>245-684</td><td></td></tr><tr><td>Foam Boards</td><td>Therapak</td><td>562908</td><td></td></tr><tr><td>Forceps</td><td>Fisher Scientific</td><td>200205SHN</td><td></td></tr><tr><td>1 mL 21G Syringes</td><td>BD Biosciences</td><td>309624</td><td></td></tr><tr><td>50 mL Falcon Tubes</td><td>Fisher Scientific</td><td>339652</td><td></td></tr><tr><td>2.0 mL Microcentrifuge Tubes&amp;nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>02-681-258</td><td></td></tr><tr><td>Surgical Pads</td><td>Fisher Scientific</td><td>S67011</td><td></td></tr><tr><td>T-Pins Length:&amp;nbsp; 2&quot;&amp;nbsp;</td><td>Advance Store Products</td><td>X32T-05</td><td></td></tr><tr><td>Sterilizing Wipes</td><td>Professional Disposables International Inc.</td><td>Q85084</td><td></td></tr><tr><td>Sharps Container</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-827-122</td><td></td></tr><tr><td>Analytical Balance</td><td>Marshall Scientific</td><td>ME-AE200</td><td></td></tr><tr><td>4L Dewar</td><td>Taylor-Wharton</td><td>4LD</td><td></td></tr><tr><td>Shallow Wide Mouth Dewar</td><td>Fisher Scientific</td><td>F3087-V</td><td></td></tr><tr><td>Floating Microtube Rack</td><td>VWR</td><td>60986-100</td><td></td></tr><tr><td>Cryogenic Vial 1.2 mL, Sterile</td><td>Fisher Scientific</td><td>10-500-25</td><td></td></tr><tr><td>Isothesia (Isoflurane)&amp;nbsp;</td><td>Henry Schein Animal Health</td><td>050033</td><td></td></tr><tr><td>Liquid Nitrogen</td><td>Wright Brothers</td><td>NIT-60-XX</td><td></td></tr><tr><td>Mouse Kras Strain</td><td>The Jackson Laboratory</td><td>OO8179</td><td></td></tr><tr><td>Mouse Cre Strain</td><td>MMRRC</td><td>OOO435-UNC</td><td></td></tr></tbody></table>

dissection of the mouse pancreas for histological analysis and metabolic profiling

Wir haben die Bauchspeicheldrüse spezifischen Transkriptionsfaktor, 1a Cre-Rekombinase untersucht; Lox-Stop-Lox-Kristen Ratte Sarkom, Glycin, Asparaginsäure an das 12-Codon (Ptf1aCre / +; LSL-KrasG12D / +) Belastung als ein Modell des menschlichen pankreatischen Krebses Maus. Unsere aktuellen Studien soll neue metabolischen Biomarker der Bauchspeicheldrüsenkrebs Progression ermittelt. Wir haben durchgeführt, metabolic profiling von Urin, Kot, Blut, sowie Pankreas-Gewebe-Extrakte und histologische Analysen der Bauchspeicheldrüse, die Krebsentwicklung zu inszenieren. Die Maus-Bauchspeicheldrüse ist keine wohldefinierte solide Organ wie beim Menschen, sondern ist ein diffus verteilte weichen Gewebe, das nicht leicht zu erkennen ist von Einzelpersonen mit Maus Innere Anatomie nicht vertraut oder von Personen, die wenig oder gar keine Erfahrung durchführen Maus-Organ-Sektionen. Der Zweck dieses Artikels ist es, eine detaillierte schrittweise bieten visuelle Demonstration, Novizen bei der Entfernung der Maus Bauchspeicheldrüse durch Dissektion zu führen. Dieser Artikel sollte besonders wertvoll für Studenten und Forscher neue Forschung, die Ernte der Maus Bauchspeicheldrüse durch Präparation für metabolic profiling oder histologische Analysen benötigt.

Abbildung 1 zeigt eine Übersicht über den Arbeitsbereich Umwelt und Abbildung 2 zeigt das Post-OP-Feld. Während diese Einstellung die minimale Menge an Ausrüstung bietet und Inszenierung, Einzelpersonen dies am besten individuell verändern können. Das Protokoll sollte entsprechend den spezifischen Bedürfnissen des Experiments optimiert werden. Dieses Verfahren wird in einer Weise durchgeführt, die das Leben einer Maus, er...

Watch this Scientific Journal Video about Dissection of the Mouse Pancreas for Histological Analysis and Metabolic Profiling at JoVE.com

Dissection of the Mouse Pancreas for Histological Analysis and Metabolic Profiling

Dieser video Artikel enthält eine ausführliche Demonstration der Verfahren erforderlich, um erfolgreich die Bauchspeicheldrüse von einer Maus entfernen durch Präparation für histologische Analyse und metabolic profiling.

Dissektion der Maus Bauchspeicheldrüse für histologische Analyse und Metabolic Profiling

We have been investigating the pancreas specific transcription factor, 1a cre-recombinase; lox-stop-lox- Kristen rat sarcoma, glycine to aspartic acid at ...

dissection-mouse-pancreas-for-histological-analysis-metabolic

Research

JoVE Journal

Medicine

36.5K Aufrufe.  Miami University. Dieser video Artikel enthält eine ausführliche Demonstration der Verfahren erforderlich, um erfolgreich die Bauchspeicheldrüse von einer Maus entfernen durch Präparation für histologische Analyse und metabolic profiling.

Serie: Dissection of the Mouse Pancreas for Histological Analysis and Metabolic Profiling

Mimicking and Manipulating Pancreatic Acinar-to-Ductal Metaplasia in 3-dimensional Cell Culture

The differentiation of acinar cells to ductal cells during pancreatitis and in the early development of pancreatic cancer is a key process that requires further study. To understand the mechanisms regulating acinar-to-ductal metaplasia (ADM), ex vivo 3D culture and differentiation of primary acinar cells to ductal cells offers many advantages over other systems. With the technique herein, modulation of protein expression is simple and quick, requiring only one day to isolate, stimulate or virally infect, and begin culturing primary acinar cells to investigate the ADM process. In contrast to using basement membrane matrix, the seeding of acinar cell clusters in collagen I extracellular matrix, allows acinar cells to retain their acinar identity before manipulation. This is vital when testing the contribution of various components to the induction of ADM. Not only are the effects of cytokines or other ectopically administered factors testable through this technique, but the contribution of common mutations, increased protein expression, or knockdown of protein expression is testable via viral infection of primary acinar cells, using adenoviral or lentiviral vectors. Moreover, cells can be re-isolated from collagen or basement membrane matrix at the endpoint and analyzed for protein expression.

Primary acinar cell isolation, protein expression or activity modulation, culture, and down-stream applications are abundantly useful in the ex vivo study of acinar-to-ductal metaplasia (ADM), an early event in the development of pancreatic cancer.

Nachahmung und Manipulation von pankreatischen Acinar-duktale Metaplasie im 3-dimensionalen Zellkultur

The differentiation of acinar cells to ductal cells during pancreatitis and in the early development of pancreatic cancer is a key process that requires ...

Forschung

Krebsforschung

Isolating and Analyzing Cells of the Pancreas Mesenchyme by Flow Cytometry

The pancreas is comprised of epithelial cells that are required for food digestion and blood glucose regulation. Cells of the pancreas microenvironment, including endothelial, neuronal, and mesenchymal cells were shown to regulate cell differentiation and proliferation in the embryonic pancreas. In the adult, the function and mass of insulin-producing cells were shown to depend on cells in their microenvironment, including pericyte, immune, endothelial, and neuronal cells. Lastly, changes in the pancreas microenvironment were shown to regulate pancreas tumorigenesis. However, the cues underlying these processes are not fully defined. Therefore, characterizing the different cell types that comprise the pancreas microenvironment and profiling their gene expression are crucial to delineate the tissue development and function under normal and diseased states. Here, we describe a method that allows for the isolation of mesenchymal cells from the pancreas of embryonic, neonatal, and adult mice. This method utilizes the enzymatic digestion of mouse pancreatic tissue and the subsequent fluorescence-activated cell sorting (FACS) or flow-cytometric analysis of labeled cells. Cells can be labeled by either immunostaining for surface markers or by the expression of fluorescent proteins. Cell isolation can facilitate the characterization of genes and proteins expressed in cells of the pancreas mesenchyme. This protocol was successful in isolating and culturing highly enriched mesenchymal cell populations from the embryonic, neonatal, and adult mouse pancreas.

Here, we describe a method for the isolation of cells in the pancreas microenvironment from embryonic, neonatal and adult mouse tissue, focusing on the isolation of mesenchymal cells. This method allows profiling of cell gene expression and protein secretion in order to elucidate the extrinsic signals that regulate pancreas development, function, and tumorigenesis.

Isolierung und Analyse von Zellen des Pankreas Mesenchyme durch Durchflusszytometrie

The pancreas is comprised of epithelial cells that are required for food digestion and blood glucose regulation. Cells of the pancreas microenvironment, ...

Entwicklungsbiologie

Single-cell Transcriptomic Analyses of Mouse Pancreatic Endocrine Cells

Pancreatic endocrine cells, which are clustered in islets, regulate blood glucose stability and energy metabolism. The distinct cell types in islets, including insulin-secreting &#946; cells, are differentiated from common endocrine progenitors during the embryonic stage. Immature endocrine cells expand via cell proliferation and mature during a long postnatal developmental period. However, the mechanisms underlying these processes are not clearly defined. Single-cell RNA-sequencing is a promising approach for the characterization of distinct cell populations and tracing cell lineage differentiation pathways. Here, we describe a method for the single-cell RNA-sequencing of isolated pancreatic &#946; cells from embryonic, neonatal and postnatal pancreases.

We describe a method for the isolation of endocrine cells from embryonic, neonatal and postnatal pancreases followed by single-cell RNA sequencing. This method allows analyses of pancreatic endocrine lineage development, cell heterogeneity and transcriptomic dynamics.

Einzellige Transkriptomischen Analysen der Maus endokrinen Zellen der Bauchspeicheldrüse

Pancreatic endocrine cells, which are clustered in islets, regulate blood glucose stability and energy metabolism. The distinct cell types in islets, ...

Pancreatic Tissue Dissection to Isolate Viable Single Cells

The pancreas includes two major systems: the endocrine system, which produces and secretes hormones, and the exocrine system, which accounts for approximately 90% of the pancreas and includes cells that produce and secrete digestive enzymes. The digestive enzymes are produced in the pancreatic acinar cells, stored in vesicles called zymogens, and are then released into the duodenum via the pancreatic duct to initiate metabolic processes. The enzymes produced by the acinar cells can kill cells or degrade cell-free RNA. In addition, acinar cells are fragile, and common dissociation protocols result in a large number of dead cells and cell-free proteases and RNases. Therefore, one of the biggest challenges in pancreatic tissue digestion is recovering intact and viable cells, especially acinar cells. The protocol presented in this article shows a two-step method that we developed to meet this need. The protocol can be used to digest normal pancreata, pancreata that include pre-malignant lesions, or pancreatic tumors that include a large number of stromal and immune cells.

Pancreatic metaplastic cells are precursors of malignant cells that give rise to pancreatic tumors. However, isolating intact viable pancreatic cells is challenging. Here, we present an efficient method for pancreatic tissue dissociation. The cells can then be used for single-cell RNA sequencing (scRNA-seq) or for two- or three-dimensional co-culturing.

Pankreasgewebedissektion zur Isolierung lebensfähiger Einzelzellen

The pancreas includes two major systems: the endocrine system, which produces and secretes hormones, and the exocrine system, which accounts for ...

In situ Quantification of Pancreatic Beta-cell Mass in Mice

Tracing changes of specific cell populations in health and disease is an important goal of biomedical research. The process of monitoring pancreatic beta-cell proliferation and islet growth is particularly challenging. We have developed a method to capture the distribution of beta-cells in the intact pancreas of transgenic mice with fluorescence-tagged beta-cells with a macro written for ImageJ (rsb.info.nih.gov/ij/). Following pancreatic dissection and tissue clearing, the entire pancreas is captured as a virtual slice, after which the GFP-tagged beta-cells are examined. The analysis includes the quantification of total beta-cell area, islet number and size distribution with reference to specific parameters and locations for each islet and for small clusters of beta-cells. The entire distribution of islets can be plotted in three dimensions, and the information from the distribution on the size and shape of each islet allows a quantitative and qualitative comparison of changes in overall beta-cell area at a glance.

In situ Quantification of Pancreatic Beta-cell Mass in Mice

The following protocol outlines the process of pancreatic dissection for virtual slice imaging, and the subsequent quantification of all GFP-tagged beta-cells in the entire pancreas.

In situ Quantifizierung von Pankreas-Beta-Zellmasse in Mäuse

Tracing changes of specific cell populations in health and disease is an important goal of biomedical research. The process of monitoring pancreatic ...

Biologie

Leprdb Mouse Model of Type 2 Diabetes: Pancreatic Islet Isolation and Live-cell 2-Photon Imaging Of Intact Islets

Type 2 diabetes is a chronic disease affecting 382 million people in 2013, and is expected to rise to 592 million by 2035 1. During the past 2 decades, the role of beta-cell dysfunction in type 2 diabetes has been clearly established 2. Research progress has required methods for the isolation of pancreatic islets. The protocol of the islet isolation presented here shares many common steps with protocols from other groups, with some modifications to improve the yield and quality of isolated islets from both the wild type and diabetic Leprdb (db/db) mice. A live-cell 2-photon imaging method is then presented that can be used to investigate the control of insulin secretion within islets.

Leprdb Mouse Model of Type 2 Diabetes: Pancreatic Islet Isolation and Live-cell 2-Photon Imaging Of Intact Islets

We present here a protocol for the isolation of islets from the mouse model of type 2 diabetes, Leprdb and details of a live-cell assay for measurement of insulin secretion from intact islets that utilizes 2 photon microscopy.

Lepr<sup&gt; Db</sup&gt; Mausmodell des Typ-2-Diabetes: Pancreatic Islet Isolation und Live-cell 2-Photonen-Imaging von intakten Inseln

Type 2 diabetes is a chronic disease affecting 382 million people in 2013, and is expected to rise to 592 million by 2035 1. During the past 2 decades, ...

Medizin

Isolation and Culture of Mouse Primary Pancreatic Acinar Cells

This protocol permits rapid isolation (in less than 1 hr) of murine pancreatic acini, making it possible to maintain them in culture for more than one week. More than 20 x 106 acinar cells can be obtained from a single murine pancreas. This protocol offers the possibility to independently process as many as 10 pancreases in parallel. Because it preserves acinar architecture, this model is well suited for studying the physiology of the exocrine pancreas in vitro in contrast to cell lines established from pancreatic tumors, which display many genetic alterations resulting in partial or total loss of their acinar differentiation.

In this publication, we describe a rapid and convenient procedure for isolating and culturing primary pancreatic acinar cells from the murine pancreas. This method constitutes a valuable approach to study the physiology of fresh primary normal/untransformed exocrine pancreatic cells.

Isolierung und Kultivierung von primären Maus Azinuszellen des Pankreas

This protocol permits rapid isolation (in less than 1 hr) of murine pancreatic acini, making it possible to maintain them in culture for more than one ...

Observing Islet Function and Islet-Immune Cell Interactions in Live Pancreatic Tissue Slices

Live pancreatic tissue slices allow for the study of islet physiology and function in the context of an intact islet microenvironment. Slices are prepared from live human and mouse pancreatic tissue embedded in agarose and cut using a vibratome. This method allows for the tissue to maintain viability and function in addition to preserving underlying pathologies such as type 1 (T1D) and type 2 diabetes (T2D). The slice method enables new directions in the study of the pancreas through the maintenance of the complex structures and various intercellular interactions that comprise the endocrine and exocrine tissues of the pancreas. This protocol demonstrates how to perform staining and time-lapse microscopy of live endogenous immune cells within pancreatic slices along with assessments of islet physiology. Further, this approach can be refined to discern immune cell populations specific for islet cell antigens using major histocompatibility complex-multimer reagents.

This study presents the application of live pancreatic tissue slices to the study of islet physiology and islet-immune cell interactions.

Beobachtung der Inselfunktion und der Wechselwirkungen zwischen Insel-Immunzellen in lebenden Pankreasgewebeschnitten

Live pancreatic tissue slices allow for the study of islet physiology and function in the context of an intact islet microenvironment. Slices are prepared ...

Immunologie und Infektion

A Mouse Model for Chronic Pancreatitis via Bile Duct TNBS Infusion

Chronic pancreatitis (CP) is a complex disease involving pancreatic inflammation and fibrosis, glandular atrophy, abdominal pain and other symptoms. Several rodent models have been developed to study CP, of which the bile duct 2,4,6 -trinitrobenzene sulfonic acid (TNBS) infusion model replicates the features of neuropathic pain seen in CP. However, bile duct drug infusion in mice is technically challenging. This protocol demonstrates the procedure of bile duct TNBS infusion for generation of a CP mouse model. TNBS was infused into the pancreas through the ampulla of Vater in the duodenum. This protocol optimized drug volume, surgical techniques, and drug handling during the procedure. TNBS-treated mice showed features of CP as reflected by bodyweight and pancreas weight reductions, changes in pain-associated behaviors, and abnormal pancreatic morphology. With these improvements, mortality associated with TNBS injection was minimal. This procedure is not only critical in generating pancreatic disease models but is also useful in local pancreatic drug delivery.

Chronic pancreatitis (CP) is a disease characterized by inflammation and fibrosis of the pancreas, often associated with intractable abdominal pain. This article focuses on refining the technique to generate a mouse model of CP via bile duct infusion with 2,4,6 -trinitrobenzene sulfonic acid (TNBS).

Ein Mausmodell für chronische Pankreatitis mittels Gallengangs-TNBS-Infusion

Chronic pancreatitis (CP) is a complex disease involving pancreatic inflammation and fibrosis, glandular atrophy, abdominal pain and other symptoms. ...

Acinar-to-Ductal Metaplasia Induction: A Method to Study Acinar Cell to Ductal Cell Differentiation in 3D Ex Vivo Culture

Source: Fleming Martinez, A. K. et. al. <a href="https://www.jove.com/v/59096/" target="_blank">Mimicking and Manipulating Pancreatic Acinar-to-Ductal Metaplasia in 3-dimensional Cell Culture</a>. J. Vis. Exp. (2019).
This video describes the technique of differentiating pancreatic acinar cells to ductal cells in ex vivo 3D culture. This helps to understand the mechanisms regulating the acinar-to-ductal metaplasia (ADM), a key process in the early development of pancreatic cancer.

Induktion der Azinus-zu-duktalen Metaplasie: Eine Methode zur Untersuchung der Differenzierung von Azinuszellen zu duktalen Zellen in 3D-Ex-vivo-Kultur

Source: Fleming Martinez, A. K. et. al. Mimicking and Manipulating Pancreatic Acinar-to-Ductal Metaplasia in 3-dimensional Cell Culture. J. Vis. Exp. ...