Die Autoren möchte Benjamin J Weigler, D.V.M, Ph.d. und Walt Mandeville, D.V.M (Tier-Ressourcen & Campus besuchen Tierarzt, Universität von Nevada, Reno) für ihre hervorragende Tieren Dienstleistungen bereitgestellt, um die Mäuse sowie ihren Rat auf chirurgische Eingriffe.

Das folgende Protokoll genehmigt wurde durch die institutionelle Animal Care und verwenden Committee (IACUC) an der Universität von Nevada-Reno (UNR) Tier Ressourcen und erfüllt alle institutionellen ethischen Richtlinien bezüglich der Verwendung von Versuchstieren.
(1) Tiere.
<ol><li>Erhalten Sie Reifen (4-6 Wochen alt) C57BL/6 Mäusen mit einem Gewicht zwischen 20-30 g. Haus der Kolonie von Labormäusen in eine zentralisierte Tierstation am UNR Tier Ressourcen.</li>
</ol>(2) partielle Obstruktion Chirurgie
Hinweis: In einem Raum gewidmet chirurgische Eingriffe sind Operationen durchgeführt. Alle chirurgischen Instrumente sind vor der Operation autoklaviert. Sterile OP Kittel und Handschuhe sollten von allen Personal im OP jederzeit getragen werden.
<ol><li>Vorbereitung für die OP Maus<ol>
<li>Überprüfen Sie die Narkose Delivery-System um die Versorgung mit Sauerstoff zu gewährleisten und Isofluran ist ausreichend für Verfahren. Schalten Sie die Stromversorgung Sauerstoff. Schalten Sie den Gas-Durchflussmesser und passen Sie an, um 500-1000 mL/min Platz das Tier in der Induktion Kammer und verschließen Sie oben.</li>
		<li>Schalten Sie den Verdampfer Isoflurane auf 5 %, und überwachen Sie das Tier zu, bis es Liegerad wird. Wechseln Sie die Narkose Liefersystem zu die Bugnase</li>
		<li>Spülen der Induktion Handelskammer Restgas mit Sauerstoff, dann schalten Sie die Induktion Kammer Linie unter Beibehaltung der Bugnase Zeile öffnen.</li>
		<li>Entfernen Sie das Tier aus der Kammer zu und legen Sie vorsichtig ophthalmologischen Salbe auf die Augen des Tieres.</li>
		<li>Legen Sie die Bugnase auf einen vorgeheizten warm, wenn Gas fließt weiterhin.</li>
		<li>Ändern Sie die Sauerstoffzufuhr in 100-200 mL/min, mit 2-3 % Isofluran. Wenn das Tier beginnt zu bewegen, betäubt, Gentlyrestrain das Tier mit der Nase Kegel auf bis zu vollständig wieder.</li>
		<li>Überwachung der Atmung und Reaktion auf die Stimulation während des Verfahrens und den Prozentsatz der Isofluran (2-5 %) nach Bedarf anpassen. Tierische Anesthetization Ebene wird durch den Mangel an Zehe Prise Reflex überwacht, bevor Chirurgie durchgeführt wird.</li>
		<li>Injizieren Sie Schmerzmittel (Buprenorphin, 1 µg/g Körpergewicht) intraperitoneal Weg von der Einschnitt-Website.</li>
		<li>Wenden Sie Haar Entfernung Lotion auf dem Bauch mit einem sauberen Wattestäbchen an. Lassen Sie die Lotion sitzen für 3-5 min auf Maus, dann das Haar mit Gaze und Baumwolle Tupfer entfernen. Wiederholen Sie diesen Schritt, bis alle Haare aus dem Bauch der Maus entfernt wurde.</li>
		<li>Reinigen Sie die Haut mit 70 % Ethanol mit Gaze und Baumwolle Tupfer. Gelten Sie Swabsticks oder Povidon-Jod-Lösung um den Bauch zu reinigen.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Partielle Obstruktion Chirurgie<ol>
<li>Drapieren Sie die Operationsstelle mit sterilen Papier 25 x 50 cm mit einer 2,5 x 2,5 cm Öffnung in der Mitte für den OP-Bereich. Sichern Sie den Faltenwurf des Tieres indem man sterile Streifen an den Rändern der Öffnung und die Haut.</li>
		<li>Machen Sie einem ~3.0 cm Bauchschnitt längs mit Nr. 15 Klinge Skalpell, um sicherzustellen, dass nur die Haut eingeschnitten ist und schneiden in der Musculoperitoneal Schicht zu diesem Zeitpunkt zu vermeiden.</li>
		<li>Mit Zange und chirurgische Scheren, trennen Sie vorsichtig die Haut von der Musculoperitoneal-Schicht ohne jeden Schnitt, die Musculoperitoneal Schicht. Nachdem die Schichten ausreichend (ca. 1 cm x 4 cm) getrennt wurden, identifizieren die Linea Alba auf der Musculoperitoneal Ebene und Schnitt ~ 2 cm entlang der Linea Alba, die intraperitonealen Hohlraum mit Mikro-Pinzetten und Scheren verfügbar zu machen.</li>
		<li>Genau lokalisieren Sie und identifizieren Sie der Blinddarm. Langsam und sanft entfernen der Blinddarm aus dem intraperitoneale Hohlraum mit Mikro-Pinzetten, bringen die proximalen Colon und Ileum mit der Blinddarm außerhalb auf der sterilen Tuch. Sofort befeuchten Sie das Darmgewebe mit 0,9 % sterile Kochsalzlösung getränkten Gaze und halten Sie exponierte Gewebe ständig befeuchtet, während sie sich außerhalb der Bauchhöhle.</li>
		<li>Lokalisieren Sie und identifizieren Sie das Mesenterium zwischen Ileum und proximalen Colon. Machen Sie einen Einschnitt (~ 1 cm) in dem Mesenterium parallel, und knapp unterhalb der Krummdarm und vermeiden Sie, schneiden alle Gefäßsystem.</li>
		<li>Nehmen Sie einen autoklaviert Silikonring (6 mm in der Länge, 4 mm Außendurchmesser, 3,5 mm Innendurchmesser). Längsrichtung geschnitten Sie, um den Schlauch öffnen und öffnen Sie den Ring mit Mikro-Pinzetten.</li>
		<li>Stecken Sie ein Ende des geöffneten Rings durch die Inzision im Mesenterium Gewebe. Eine ausgefüllte Ringform zurückzukehren Sie den Ring bringen ein Ende in Kontakt mit anderen, mit der Krummdarm, umgeben von den Ring.</li>
		<li>Sicherzustellen Sie, dass der Silikonring vollständig Ileum umgibt, schließen Sie den Ring mit Naht und legen Sie den Darm vorsichtig zurück in die intraperitoneale Hohlraum.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Chirurgie-Schließung<ol>
<li>Führen Sie eine einfache kontinuierliche Naht auf der Musculoperitoneal Ebene entlang der Linea Alba, schließen die Musculoperitoneal Wunde mit einer resorbierbaren Naht. Nachdem die Naht abgeschlossen ist, reinigen Sie eine Blutung mit 0,9 % sterile Kochsalzlösung getränkten Gaze.</li>
		<li>Um die Wunde mit einer separaten Nylon-Naht vollständig zu schließen führen Sie eine einfache kontinuierliche Naht auf der Haut.</li>
		<li>Nachdem beide Fäden abgeschlossen haben, reinigen Sie die Wunde mit neuen Swabstick oder Povidon-Jod.</li>
		<li>Intraperitoneale Injektion Antibiotika (Gentamicin, 150 μL pro Maus basierend auf 20-30 g Körpergewicht).</li>
		<li>Nach Abschluss des Verfahrens, schalten Sie Verdampfer Isoflurane und lassen das Tier nur fließende atmen Sauerstoff bis es beginnen Bewusstsein zu gewinnen.</li>
		<li>Sobald das Tier erwacht ist, legen Sie das Tier in einem separaten Recovery-Bereich mit thermischen Unterstützung bis vollständig erholt.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. postoperative Beobachtung.
<ol><li>Bewegen Sie nach Abschluss der Operation die Tiere in einem Inkubator in einen Aufwachraum wo Temperatur und Feuchtigkeit reguliert. Überwachen Sie die Tiere nach der Operation alle 15 min für die erste Stunde dann alle 30 Minuten für die zweite Stunde, während die Tiere in den Inkubator.</li>
	<li>Sobald die vorgeschriebene Beobachtung abgeschlossen ist, bewegen Sie die Tiere an ihre eigenen individuellen Käfig und überwachen sie täglich für klinische Indikationen Schmerzen18, und um sicherzustellen, dass die Operationswunde richtig ohne irgendwelche Anzeichen von Komplikationen (Heilung ist Dehiszenz) vorhanden.</li>
</ol>

<ol><li>Millat, B., Guillon, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiopathology+and+principles+of+intensive+care+in+intestinal+obstructions%5BTitle%5D)+AND+%22Rev+Prat%22%5BJournal%5D)">Physiopathology and principles of intensive care in intestinal obstructions.</a> Rev Prat. 43, 667-672 (1993).</li>
<li>Tonelli, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+developments+in+Crohn%27s+disease%3A+solution+of+doctrinal+mysteries+and+reinstatement+as+a+surgically+treatable+disease.+1.+The+process+is+not+a+form+of+enteritis+but+lymphedema+contaminated+by+intestinal+contents%5BTitle%5D)+AND+%22Chir+Ital%22%5BJournal%5D)">New developments in Crohn's disease: solution of doctrinal mysteries and reinstatement as a surgically treatable disease. 1. The process is not a form of enteritis but lymphedema contaminated by intestinal contents.</a> Chir Ital. 52, 109-121 (2000).</li>
<li>Limsrivilai, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Meta-analytic+Bayesian+model+for+differentiating+intestinal+tuberculosis+from+Crohn%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Meta-analytic Bayesian model for differentiating intestinal tuberculosis from Crohn's disease.</a> Am J Gastroenterol. 112, 415-427 (2017).</li>
<li>Dvorak, D., Adamova, Z., Bar, T., Slovacek, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Internal+hernia+as+a+cause+of+small+bowel+obstruction%5BTitle%5D)+AND+%22Rozhl+Chir%22%5BJournal%5D)">Internal hernia as a cause of small bowel obstruction.</a> Rozhl Chir. 96, 34-36 (2017).</li>
<li>Massani, M., Capovilla, G., Ruffolo, C., Bassi, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gastrointestinal+stromal+tumour+%28GIST%29+presenting+as+a+strangulated+inguinal+hernia+with+small+bowel+obstruction%5BTitle%5D)+AND+%22BMJ+Case+Rep%22%5BJournal%5D)">Gastrointestinal stromal tumour (GIST) presenting as a strangulated inguinal hernia with small bowel obstruction.</a> BMJ Case Rep. , (2007).</li>
<li>Chen, J., Chen, H., Sanders, M., Perrino, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+SRF%2FCArG-dependent+gene+transcription+during+chronic+partial+obstruction+of+murine+small+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22Neurogastroenterol+Motil%22%5BJournal%5D)">Regulation of SRF/CArG-dependent gene transcription during chronic partial obstruction of murine small intestine.</a> Neurogastroenterol Motil. 20, 829-842 (2008).</li>
<li>Chang, I. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+of+interstitial+cells+of+Cajal+and+development+of+electrical+dysfunction+in+murine+small+bowel+obstruction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Loss of interstitial cells of Cajal and development of electrical dysfunction in murine small bowel obstruction.</a> J Physiol. 536 (Pt 2), 555-568 (2001).</li>
<li>Liu, D. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Voltage+dependent+potassium+channel+remodeling+in+murine+intestinal+smooth+muscle+hypertrophy+induced+by+partial+obstruction%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Voltage dependent potassium channel remodeling in murine intestinal smooth muscle hypertrophy induced by partial obstruction.</a> PLoS One. 9 (2), e86109(2014).</li>
<li>Guo, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Down-regulation+of+hydrogen+sulfide+biosynthesis+accompanies+murine+interstitial+cells+of+Cajal+dysfunction+in+partial+ileal+obstruction%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Down-regulation of hydrogen sulfide biosynthesis accompanies murine interstitial cells of Cajal dysfunction in partial ileal obstruction.</a> PLoS One. 7, e48249(2012).</li>
<li>Yang, J., Zhao, J., Chen, P., Nakaguchi, T., Grundy, D., Gregersen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interdependency+between+mechanical+parameters+and+afferent+nerve+discharge+in+hypertrophic+intestine+of+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol-Gastr+L%22%5BJournal%5D)">Interdependency between mechanical parameters and afferent nerve discharge in hypertrophic intestine of rats.</a> Am J Physiol-Gastr L. 310, G376-G386 (2016).</li>
<li>Zhao, J., Liao, D., Yang, J., Gregersen, H. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2857539/">Biomechanical remodeling of obstructed guinea pig jejunum.</a> J Biomech. 43, 1322-1329 (2010).</li>
<li>Bowen, E. J., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/22129371">Duodenal Brunner's glade adenoma causing chronic small intestinal obstruction in a dog.</a> J Small Anim Pract. 53, 136-139 (2012).</li>
<li>Bettini, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypertrophy+of+intestinal+smooth+muscle+in+cats%5BTitle%5D)+AND+%22Res+Vet+Sci%22%5BJournal%5D)">Hypertrophy of intestinal smooth muscle in cats.</a> Res Vet Sci. 75, 43-53 (2003).</li>
<li>Macdonald, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Smooth+muscle+phenotypic+plasticity+in+mechanical+obstruction+of+the+small+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurogastroenterol+Motil%22%5BJournal%5D)">Smooth muscle phenotypic plasticity in mechanical obstruction of the small intestine.</a> J Neurogastroenterol Motil. 20, 737-740 (2008).</li>
<li>Ha, S. E., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28806761">Transcriptome analysis of PDGFRα+ Cells identifies T-types Ca2+ channel CACNA1G as a new pathological marker for PDGFRα+ cell hyperplasia.</a> PLoS One. 12, e0182265(2017).</li>
<li>Park, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serum+response+factor+is+essential+for+prenatal+gastrointestinal+smooth+muscle+development+and+maintenance+of+differentiated+phenotype%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurogastroenterol+Motil%22%5BJournal%5D)">Serum response factor is essential for prenatal gastrointestinal smooth muscle development and maintenance of differentiated phenotype.</a> J Neurogastroenterol Motil. 21, 589-602 (2015).</li>
<li>Spencer, N. J., Sanders, K. M., Smith, T. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Migrating+motor+complexes+do+not+require+electrical+slow+waves+in+the+mouse+small+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Migrating motor complexes do not require electrical slow waves in the mouse small intestine.</a> J Physiol. 553, 881-893 (2003).</li>
<li>Langford, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coding+of+facial+expressions+of+pain+in+the+laboratory+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Coding of facial expressions of pain in the laboratory mouse.</a> Nat Methods. 7, 447-449 (2010).</li>
<li>Terez, S. D., Notari, L., Sun, R., Zhao, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+smooth+muscle+responses+to+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Neurogastroenterol+Motil%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of smooth muscle responses to inflammation.</a> Neurogastroenterol Motil. 24, 802-811 (2012).</li>
<li>Chen, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Smooth+muscle+hyperplasia%2Fhypertrophy+is+the+most+prominent+histological+change+in+Crohn%27s+fibrostenosing+bowel+strictures%3A+A+semiquantitative+analysis+by+using+a+novel+histological+grading+scheme%5BTitle%5D)+AND+%22J+Crohns+Colitis%22%5BJournal%5D)">Smooth muscle hyperplasia/hypertrophy is the most prominent histological change in Crohn's fibrostenosing bowel strictures: A semiquantitative analysis by using a novel histological grading scheme.</a> J Crohns Colitis. 11, 92-104 (2017).</li>
<li>Huizinga, J. D., Chen, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interstitial+Cells+of+Cajal%3A+Update+on+Basic+and+Clinical+Science%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Gastroenterol+Rep%22%5BJournal%5D)">Interstitial Cells of Cajal: Update on Basic and Clinical Science.</a> Curr Gastroenterol Rep. 16, 363(2014).</li>
<li>Jirkof, P., Touvieille, A., Cinelli, P., Arras, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Buprenorphine+for+pain+relief+in+mice%3A+repeated+injections+vs+sustained-release+depot+formulation%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Animal%22%5BJournal%5D)">Buprenorphine for pain relief in mice: repeated injections vs sustained-release depot formulation.</a> Lab Animal. 49, 177-187 (2015).</li>
<li>Spencer, N. J., Dinning, P. J., Brookes, S. J., Costa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insights+into+the+mechanisms+underlying+colonic+motor+patterns%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Insights into the mechanisms underlying colonic motor patterns.</a> J Physiol. 594, 4099-4116 (2016).</li>
</ol>

Die Autoren haben nichts preisgeben.

Wir zeigten, dass Mäuse erhält der Darm PO-Operation konsequent und reproduzierbar intestinalen glatten Muskel-Hypertrophie, entwickeln die menschliche Darmverschluss imitiert. Intestinale Obstruktion Operationen wurden für verschiedene Tiere wie Mäuse7, Ratten10, Meerschweinchen11, Hund12 und Katzen13entwickelt. Die Maus-Modell der Darmverschluss hat Zeit, Kosten, Größe und phänotypischen Vorteile gegenüber anderen größeren Tiermodellen. Die Entwicklung der Hypertrophie bei Mäusen oder Ratten dauert nur 10-14 Tagen10, im Vergleich zu 2-4 Wochen in den Meerschweinchen, Hunde und Katzen11,12,13. Kosten für Kauf und Pflege Mäuse ist auch einen enormen finanziellen Vorteil im Vergleich zu anderen Modellen. Darüber hinaus sind Mäuse, kleine und einfache Handhabung für die PO-Operation. Am wichtigsten ist, entwickeln Mäuse PO-Operation erhalten, schrittweise und ausführlich Hypertrophie im Dünndarm, während andere größere Tiere weniger umfangreiches Wachstum entwickeln.
Es gibt mehrere wichtige Faktoren zu berücksichtigen, wenn Sie versuchen, zuverlässige Hypertrophie durch Darm PO-Operation zu produzieren. Mehrere Forschergruppen haben verwendet Ringe in verschiedenen Größen und platziert einen Ring an verschiedenen Standorten entlang der Darm teilweise Hindernisse7,9,10,11,12zu erstellen, 13,14. Jedoch sollte ein Silikonring der optimalen Größe für Mäuse verwendet werden wie ein größerer Ring erzeugt wenig oder gar keine Blockade im Ileum wo Hypertrophie entwickelt nie, oder nur teilweise (Abbildung 4A). Umgekehrt, wenn ein Ring zu klein war, es in der Nähe von vollständigen Blockierung des Ileum erstellt die induzierte intestinale Ischämie und/oder beschädigt die Schleimhaut verursacht Sepsis, zum frühen Tod innerhalb einer Woche (Abbildung 4 b). Wir verwendeten einen Silikon-Ring mit einer bestimmten Größe (6 mm in der Länge, 4 mm Außendurchmesser, 3,5 mm Innendurchmesser) auf einen Monat alt Mäuse (Table of Materials). Verschiedene Größen der Ringe sollten getestet und für Mäuse in verschiedenen Größen verwendet, um die optimale Blockade im Ileum zu erstellen. Ein weiterer wichtiger Faktor ist die Position des Ringes auf den Darm. Das Ileum, in der Nähe von Ileocecal Ventil, ist der beste Ort um den Ring zu platzieren, um teilweise Hindernissen robust zu produzieren. Andere Regionen wie das Jejunum oder verschiedene Regionen des Ileum vom Ileocecal Ventil, haben einen ähnlichen Ring um Hypertrophie7induzieren auf sie gesetzt hatte. Allerdings bewegt sich durch die serosal Oberfläche des Darms wird stark von peritonealen Flüssigkeit geschmiert, ein Ring einfach auf diese Teile des Darms platziert wegen die Kontraktionskraft des Darmes fäkal Material durchschieben. Da der Ring über die gesamte Länge des Darms geschoben wird, schneidet es mesenterialen Arterien in Auerbach und Umgebung: Darm, verursacht Blutungen innerviert. Wenn ein Ring am Ende des Ileum neben Ileocecal Ventil eingefügt wird, wird es körperlich bewegen verhindert weitere sperrige naturgemäß der Blinddarm. Der Blinddarm kann leicht entfernt und genommen aus dem Bauch in der Chirurgie um den Ileocecal Ventil-Region zu finden, da der Blinddarm mit dem Ileum und proximalen Colon verbindet. Das Ileum und Colon an der Blinddarm verbunden ganz ähnlich aussehen und ein Ring kann versehentlich auf den proximalen Colon statt Ileum platziert werden. Wenn ein Ring auf den proximalen Colon, wie auch auf das Jejunum verlegt wurde der Ring wurde nach unten gedrückt und beschädigt mesenterialen Arterien, was zu umfangreichen Blutungen (Abb. 4). Zur Vermeidung dieses Abhandenkommen sollten Ileum immer richtig gelegen und erkannt, bevor der Ring eingeführt ist. Ileum läuft in der Mitte der Blinddarm während der Doppelpunkt in einer Seite des Beutels Blinddarm ausgeführt wird.
Dieses PO-Operation-Protokoll gilt als eine größere Operation für Mäuse. Alle chirurgischen Instrumente und Materialien sollten vor Gebrauch sterilisiert werden, und Operation sollte in die saubere Umwelt von einem speziellen Operationssaal durchgeführt werden, um Verschmutzung, zu minimieren, was zu Infektionen und Entzündungen bei Mäusen führen kann. Darüber hinaus sollte ein Schmerzmittel zu Mäusen nach der Operation erfolgen. Wir haben eine slow-Release-Version von Buprenorphin ist wirksam bis zu 7-8 h-22. Darüber hinaus haben die Mäuse nach der Operation, schwer zu kauen und schlucken festen Nahrung. Für bis zu 5 Tage nach der Operation, die Mäuse mit weiche Nahrung (solide Diät mit ein bisschen Wasser hinzugefügt, um Nahrung zu erweichen) zur Verfügung gestellt und nach 5 Tagen auf normale feste Ernährung umgestellt.
Unser Darm PO-Operation stellt eine in Vivo Hypertrophie Modell für intestinale Obstruktion in der SMC, ICC, und PDGFRα+ Zellen sind ungewöhnlich umgebaut. Dieses PO-Modell eignet sich auch ideal für Verständnis wie enterische Neurone durch PO verändert werden und wie die großen motorischen Aktivitäten in der kleinen und großen Darm23betroffen sind. Diese Zellen können dynamisch unter pathologischen Bedingungen sowie unter kultivierten Bedingungen15,16umgebaut werden. Wir beobachteten, dass diese Zellen in Mäusen SO verhielt sich ein bisschen anders als normale Mäuse ohne Operation (Abbildung 2 und Abbildung 3). Die meisten Darmverschluss beim Menschen erfolgt durch abdominale Verwachsungen nach der Operation führt zu glatten Muskel-Hypertrophie3,4,5,21entwickelt. Nach der Operation SO haben wir auch festgestellt, dass SMC, ICC und PDGFRα+ Zellen wurden leicht hypertrophe im Dünndarm, im Vergleich zu (Abbildung 3), was darauf hindeutet, dass eine Operation selbst intestinalen glatten Muskel-Hypertrophie auslösen kann. Wenn dies der Fall ist, SO ist Chirurgie keine komplette Negativkontrolle für PO-Operation. Nein und SO als ein Vergleich mit PO Darm verwendet werden sollte.
Zusammenfassend lässt sich sagen fanden wir ein Kosten/Zeit effektive, zuverlässige und wiederholbare PO chirurgische Protokoll bei Mäusen, die robust Darm Hindernisse erzeugt. Während der Entwicklung der Behinderung SMC, ICC, PDGFRα+sowie neuronale Zellen sind dynamisch in verschiedenen Gewebeschichten und Gebietsschemas umgebaut. Dieses in-Vivo Obstruktion-Modell bietet neue Einblicke in unser Wissen wie phänotypischen Veränderungen auftreten behindert Darm auf zellulärer Ebene.

Darm Hindernisse sind eine teilweise oder vollständige Blockierung im kleinen oder großen Darm, der verdaute Nahrung, Flüssigkeit und Gas bewegt durch den Darm-1verhindert. Aufgrund der Obstruktion induziert die Blockade die Darmwände, verdickt werden, Verengung der Lumen-2. Darmverschluss kann auftreten durch Abdominal- oder Becken-Operationen, die Abdominal-Adhäsion Gewebeanordnung verursachen oder von GI Störungen wie entzündlichen Darmerkrankungen (Morbus Crohn), Divertikulitis, Hernien, Volvulus, Striktur, Invagination, Verstopfung, fäkale Impaktion, Pseudoobstruktion, Krebs und Tumore3,4,5. Intestinale Blockaden in diesen Fällen führen oft zu der Hypertrophie der Tunica Muscularis des Darms6.
PO des lumens induziert Darm Ausdehnung und glatten Muskulatur Schichtdicke um das Hindernis als Reaktion auf die Notwendigkeit, funktionellen Peristaltik7,8,9,10weiter erhöht, 11,12,13. Tiermodelle der Darm PO wurden entwickelt, um studieren glatten Muskel-Hypertrophie in Mäusen7Ratten10, Meerschweinchen11, Hunde12und Katzen13 , die konsequent entwickeln ähnliche Hypertrophie innerhalb der intestinale Muskelschichten.
Ein Maus-Modell der Darm PO ist der kostengünstigste Weg zu generieren und Darm Hindernisse in Vivozu untersuchen. Mithilfe von einen Silikonring chirurgisch gelegt Umgebung Ileum sind Dünndarm Hindernisse bei Mäusen durchgeführt. Die PO-Mäuse zeigten frühe Zunahme der Anzahl der Zellen (Hyperplasie) und eine Erhöhung im Muskel Schichtdicke (Hypertrophie) nach PO Chirurgie8,15. SMC sind die primären Kunststoff Zellen, die innerhalb der glatten Muskulatur Schichten als Reaktion auf die hypertrophe Bedingungen14wachsen, aber andere Zellen wie ICC und PDGFRα+ -Zellen, die mit SMC eng verbunden sind, sind auch neu besiedelt. Wir haben bereits berichtet, dass die PO-Mäuse Hypertrophie im Dünndarm entwickeln, in denen SMC sind entdifferenzierten in PDGFRα+ Zellen, die höchst proliferative7,15,16. Umgekehrt sind ICC verkommen und verloren in den hypertrophierten Glattmuskel-Schichten bei der Entwicklung der intestinalen Obsruction7. Ein weiterer großer Vorteil des PO-Modells ist seine Fähigkeit, Veränderungen im enterischen Nervensystem und Vermehrung von neurogenen motorischen Muster zu bewirken. Die große Verbreitung neurogenen motorischen Muster im Dünndarm Maus der migrierenden Motor Komplex (MMC), ist die neurogene und erfordert keine ICC oder elektrische langsame Wellen17. Das PO-Modell kann klare Einblicke in wie MMCs und enterischen Nerven durch partielle Obstruktion umgebaut werden.
Hier schlagen wir eine murinen Protokoll für Darm PO-Operation mit einem Silikonring. PO-Operation zuverlässig empfangen Mäuse produzieren Hypertrophie in der Tunica Muscularis des Dünndarms. Innerhalb hypertrophe Muskeln sind SMC, ICC, PDGFRα+und neuronalen Zellen drastisch umgebaut.

<table><tbody><tr><td>Surgical drape</td><td>Medical and veterinary supplies</td><td>SMS40</td><td>40&amp;rdquo;X100 yards</td></tr><tr><td>Underpad, econ, pro plus</td><td>Medical and veterinary supplies</td><td>MSC281224</td><td>17x24&amp;rdquo;</td></tr><tr><td>Iris scissors</td><td>Braintree scientific, Inc</td><td>SC-i-130</td><td></td></tr><tr><td>Iris scissors</td><td>Vantage</td><td>V95-304</td><td></td></tr><tr><td>Dumont electronic &amp;amp; jeweler tweezers</td><td>Dumont</td><td>98-180-3</td><td></td></tr><tr><td>Braided absorbable suture</td><td>Covidien polysorb</td><td>SL-5687G</td><td>5-0, polyglactin</td></tr><tr><td>Nylon non-absorbable mono filament</td><td>AD surgical</td><td>S-N618R13</td><td>6-0, nylon</td></tr><tr><td>Surgical blade</td><td>Dynarex</td><td></td><td>No.15</td></tr><tr><td>Needle holder</td><td>Jacobson microvascular</td><td>36-1342TC</td><td>8.5 inch</td></tr><tr><td>Scalpel handle</td><td>Flinn scientific</td><td>AB1049</td><td></td></tr><tr><td>Microsurgical scissor</td><td>WPI</td><td>503305</td><td></td></tr><tr><td>Petrolatum ophthalmic ointment</td><td>Puralube VET</td><td></td><td>3.5 g</td></tr><tr><td>Fluriso (isoflurane)</td><td>Vetone</td><td>V1 502017</td><td>250 ml</td></tr><tr><td>Steri-strip reinforced skin closure</td><td>3M</td><td>R1547</td><td></td></tr><tr><td>Surgical gloves</td><td>Medline</td><td>MSG2270</td><td></td></tr><tr><td>Ear loop face mask</td><td>The safety zone</td><td>RS700</td><td></td></tr><tr><td>Avant gauze non-woven sponges</td><td>Caring</td><td>PRM25444</td><td></td></tr><tr><td>Surgical cup</td><td>Admiral&amp;nbsp; craft OYC-2</td><td>725-A42</td><td>2.5 oz</td></tr><tr><td>Swabstick</td><td>ChloraPrep</td><td>260103</td><td>2% w/v Chlorhexidine&amp;nbsp; Gluconate (CHG) and 70% v/v Isopropyl Alcohol (IPA)</td></tr><tr><td>Cotton tipped applicator</td><td>Puritan</td><td>806-WC</td><td></td></tr><tr><td>Buprenorphine</td><td>Zoo pharm</td><td>BZ8069317</td><td>1 mg/ml</td></tr><tr><td>Gentamycin sulfate</td><td>Vetone</td><td>G-6336-04</td><td>100 mg/ml</td></tr><tr><td>Fast acting gel cream remover</td><td>Veet</td><td>8111002</td><td></td></tr><tr><td>Syringe</td><td>AHS</td><td>AH01T2516</td><td>1 ml with needle</td></tr><tr><td>Silicon ring</td><td>VWR</td><td>60985-720</td><td>6 mm in length, 4 mm exterior diameter, 3.5 mm interior diameter</td></tr><tr><td>C57BL/6 mice</td><td>The Jackson Laboratory</td><td></td><td>4-6 weeks old</td></tr></tbody></table>

a mouse model of intestinal partial obstruction

Darm Hindernisse, die behindern oder blockieren peristaltische Bewegung, können durch abdominale Adhäsionen und meist gastrointestinale (GI) Krankheiten einschließlich tumoröse Wucherungen entstehen. Jedoch verursacht durch Darm Hindernisse sind kaum erforscht und die zelluläre Mechanismen Umgestaltung beteiligt. Verschiedenen Tiermodellen der Darm Hindernisse wurden entwickelt, aber die Maus-Modell ist das beste Kosten/Zeit wirksam. Die Maus-Modell nutzt die chirurgische Implantation einer teilweisen Darmverschluss (PO), die eine hohe Sterblichkeitsrate hat, wenn es nicht korrekt durchgeführt wird. Darüber hinaus nicht Mäuse erhalten PO Chirurgie Hypertrophie zu entwickeln, wenn eine entsprechende Blockade ist nicht oder nicht richtig platziert. Hier beschreiben wir ein detailliertes Protokoll auf PO-Operation, die zuverlässige und reproduzierbare Darm Hindernisse mit einer sehr niedrigen Sterblichkeit produziert. Dieses Protokoll nutzt einen chirurgisch platzierte Silikon-Ring, der Ileum umgibt die Verdauungs-Bewegung in den Dünndarm teilweise blockiert. Die teilweise Blockade macht den Darm aufgrund der Halt des Verdauungssystems Bewegung erweitert werden. Die Ausdehnung des Darms induziert Hypertrophie der glatten Muskulatur auf der oralen Seite des Ringes, die nach und nach über 2 Wochen bis es Todesursachen entwickelt. Die chirurgische PO-Maus-Modell bietet eine in Vivo Modell der hypertrophen Darmgewebe nützlich für die Untersuchung von krankhafter Veränderungen der Darmzellen einschließlich der glatten Muskelzellen (SMC), interstitiellen Zellen von Cajal (ICC), PDGFRα+, und neuronale Zellen während der Entwicklung von Darmverschluss.

Partielle Obstruktion (PO) wurde operativ in einen Monat alt Mäuse induziert, indem man einen Silikonring um Ileum in der Nähe der Ileocecal Schließmuskel. Dieser Ring erstellt eine teilweise Blockade im Ileum. Schein-Operationen (SO) auch ohne Ring auf Alter/Geschlecht durchgeführt wurden abgestimmt Mäuse und diese Mäuse nicht zeigen keine Symptome ähnlich denen in PO Mäuse gefunden. Mäuse erholten sich schnell von der PO-Operation innerhalb weniger Stunden. Sie zeigte keine offensichtliche Verhaltensänderungen oder Schwäche innerhalb der ersten Woche, aber nach der ersten Woche begannen sie allmählich Anzeichen einer PO: einen aufgeblähten Bauch und weniger und kleinere fäkale Pelletherstellung. PO-Mäuse wurden auf 8 und 13 Tage Post-PO-Operation zusammen mit SO Kontrollmäusen geopfert. Des Dünndarms war teilweise gefüllt und aufgebläht auf 8 Tage Post-PO Chirurgie und voll gefüllt und aufgebläht auf 13 Tage Post-PO Chirurgie, verglichen, um SO zu steuern, Mäuse (Abbildung 1A). Fäkale Pellet-Bildung im Dickdarm von 8 und 13 Tage Post-PO Chirurgie Mäuse verringerte sich im Vergleich zu SO Kontroll-Mäusen (Abbildung 1 b). Ileale Gewebe, das den Ring nur vorgeschaltet war wurde seziert und der glatten Muskulatur wurde von Hämatoxylin und Eosin (H & E) Färbung analysiert. Die glatte Muskelschicht war Sexualpartners an 8 Tagen Post-PO Chirurgie und viel weiter Sexualpartners an 13 Tagen Post-PO Chirurgie (Abbildung 2). Wir beobachteten auch Veränderungen in neuronalen Zellen innerhalb der Tunica Muscularis in PO-Mäusen durch den Einsatz von Immunchemie, SMC, ICC und PDGFRα+. Jede Zelle war mit Zelltyp spezifische Marker beschriftet: MYH11 (SMC), KIT (ICC), PDGFRA (PDGFRα+ -Zellen) und PGP9.5 (Nervenzellen). SMC sind in drei Schichten des Gewebes gefunden: längs-Muskel (LM), kreisförmigen Muskeln (CM) und die Muscularis Schleimhäute (MM) im Ileum. SMC wuchsen nach und nach zu hohen Wachstumsraten in allen drei Schichten bei 8 und 13 Tage Post-PO Chirurgie (Abbildung 3). Wie bei ICCs befinden sich ihre Subpopulationen in die tiefe muskuläre Plexus (DMP), Auerbach Region (MY) und Subserosal Region (SS). ICC-DMP, ICC-MY und ICC-SS wurden jedoch innerhalb der Intra/intermuscular Schichten (Abbildung 3) verkommen. Ähnlich wie bei ICC Subpopulationen, befinden sich Subpopulationen von PDGFRα+ Zellen (PαC) in das DMP, MY und SS. Im PO-Mäuse, PαC-DMP, mein PαC, und PαC-SS wurden dynamisch innerhalb der intermuscular Schichten der PO Mäuse umgebaut: sie wuchsen auf 8 Tage Post-PO Chirurgie und artete in 13 Tagen Post-PO Chirurgie (Abbildung 3). Zu guter Letzt wurden Auerbach Plexus (MP), submucosal Plexus (SP), Subserosal Neuronen (SS), und magensaftresistenten Motoneuronen (EMN) deutlich in den Inter/intramuskuläre Regionen der PO Mäuse auf 8 und 13 Tage Post-PO Chirurgie (Abbildung 3) verloren.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57381/57381fig1v2.jpg"> Abbildung 1: Teilweiser Darmverschluss induzierte chirurgisch in einem Mausmodell. PO PO chirurgisch induzierten war. Einen Monat alten Mäusen wurden betäubt, ihr Bauch wurde durch einen Schnitt eröffnet ein Silikonring wurde gelegt, um Ileum und die Eröffnung wurde durch Vernähen geschlossen. Mäuse, die operiert durften entweder 8 oder 13 Tage lang erholen. Alter und Geschlecht SO Mäuse auf in der gleichen Weise wie PO Mäuse betrieben wurden außer gab es keine Platzierung eines Ringes aufeinander abgestimmt. (A) Brutto-Bilder von den GI-Trakt in den Mäusen, die PO unterzogen oder SO Chirurgie. Bilder sind von Mäusen um 8 und 13 Tage nach der Operation (B) GI-Trakt seziert von Mäusen in A. Dünndarm stromaufwärts des Ringes wurde auf 8 und 13 Tage Post-PO-Operation aufgetrieben und fäkale Pellets im Dickdarm wurden auch kleinere bei beiden 8 und 13 Tageschirurgie als Post-PO im Vergleich zu 13 Tage Post-SO Chirurgie Mäuse aufgrund der teilweise obstruktive Silikonring. Maßstabsleisten sind 0,5 cm. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/57381/57381fig1v2large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57381/57381fig2.jpg"> Abbildung 2: Glatte Muskelschicht geändert in der chirurgischen Mausmodell. Vertreter H & E Färbung des Ileum Querschnitte aus Darm PO SO und kein Betrieb (NO) Mäuse. Glatte Muskelzellen (SM) und Schleimhaut (Mu) Schichten sind dicker PO Mäuse auf 8 und 13 Tage Post-PO-Operation als die Beschwerdepunkte und keine Mäuse. Maßstabsleisten sind 50 µm. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/57381/57381fig2large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57381/57381fig3.jpg"> Abbildung 3. Dynamische zellulären Umbau im glatten Muskel-Hypertrophie infolge teilweiser Darmverschluss. Repräsentative konfokale Laser-scanning-Bilder der hypertrophen ileal Querschnitte von PO, also und keine Mäuse. -Proteins Färbung mit Antikörper (rot) der MYH11 (SMC), KIT (ICC), PDGFRA (PDGFRα+ -Zellen) oder PGP9.5 (NC, neuronalen Zellen), Co befleckt mit DAPI (blau). SMC in Schleimhaut Muscularis (MM), kreisförmig Muskel (CM), und längs Muskelschichten (LM), sowie PDGFRα+ Zellen in tiefe muskuläre Plexus (DMP), Auerbach Region (MY) und Subserosal Region (SS) wuchsen in hypertrophe Ileum bei 8 und 13 Tage Post-PO Chirurgie beim ICC in DMP, MY und SS, Auerbach-Plexus (MP), submucosal Plexus (SP), Subserosal NC (SS) sowie enterischen Motoneuronen (EMN) waren verkommen. Maßstabsleisten sind 50 µm. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/57381/57381fig3large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57381/57381fig4.jpg"> Abbildung 4. Ergebnisse der Silikonringe, die zu groß, zu klein oder auf den Doppelpunkt fehl am Platze sind. (A) keine glatten Muskel-Hypertrophie entsteht im Ileum, wenn der Ring zu groß, um Verstopfung zu verursachen ist. Der Ring aus wenig bis keine Blockade des Ileum. (B) intestinale Ischämie entsteht im Ileum, wenn der Ring zu klein ist. Der Ring gefertigt eine fast vollständige Blockade des Ileum, die das Gewebe schädigen und zum frühen Tod führen, bevor Hypertrophie entwickelt. (C) Hypertrophie der glatten Muskulatur in den Darm aufgrund einer falschen Ring entwickelt. Der Ring auf den Doppelpunkt wurde durch lumenal Inhalt (Kot), nach unten verschoben das Mesenterium Gefäßsystem beschädigt und verursacht massive Blutungen im Darm. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/57381/57381fig4large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.</a>

Watch this Scientific Journal Video about A Mouse Model of Intestinal Partial Obstruction at JoVE.com

A Mouse Model of Intestinal Partial Obstruction

Darm Hindernisse sind eine teilweise oder vollständige Blockierung des Darms, die starke Bauchschmerzen, Übelkeit, Erbrechen, und verhindert den Durchgang von Stuhl verursachen können. Dieses Verfahren zum Erstellen von Darm teilweise Obsructions bei Mäusen ist zuverlässig bei der Untersuchung der Mechanismen, die krankhaften Zellwachstum und Tod im Darm.

Ein Maus-Modell der teilweisen Darmverschluss

Intestinal obstructions, that impede or block peristaltic movement, can be caused by abdominal adhesions and most gastrointestinal (GI) diseases including ...

a-mouse-model-of-intestinal-partial-obstruction

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Biology

21.1K Aufrufe.  University of Nevada, Reno School of Medicine. Darm Hindernisse sind eine teilweise oder vollständige Blockierung des Darms, die starke Bauchschmerzen, Übelkeit, Erbrechen, und verhindert den Durchgang von Stuhl verursachen können. Dieses Verfahren zum Erstellen von Darm teilweise Obsructions bei Mäusen ist zuverlässig bei der Untersuchung der Mechanismen, die krankhaften Zellwachstum und Tod im Darm.

Serie: A Mouse Model of Intestinal Partial Obstruction

Functional Assessment of Intestinal Motility and Gut Wall Inflammation in Rodents: Analyses in a Standardized Model of Intestinal Manipulation

Inflammation of the gastrointestinal tract is a common reason for a variety of human diseases. Animal research models are critical in investigating the complex cellular and molecular of intestinal pathology. Although the tunica mucosa is often the organ of interest in many inflammatory diseases, recent works demonstrated that the muscularis externa (ME) is also a highly immunocompetent organ that harbours a dense network of resident immunocytes.1,2 These works were performed within the standardized model of intestinal manipulation (IM) that leads to inflammation of the bowel wall, mainly limited to the ME. Clinically this inflammation leads to prolonged intestinal dysmotility, known as postoperative ileus (POI) which is a frequent and unavoidable complication after abdominal surgery.3 The inflammation is characterized by liberation of proinflammatory mediators such as IL-64 or IL-1&beta; or inhibitory neurotransmitters like nitric oxide (NO).5 Subsequently, tremendous numbers of immunocytes extravasate into the ME, dominated by polymorphonuclear neutrophils (PMN) and monocytes and finally maintain POI.2 Lasting for days, this intestinal paralysis leads to an increased risk of aspiration, bacterial translocation and infectious complications up to sepsis and multi organ failure and causes a high economic burden.6
In this manuscript we demonstrate the standardized model of IM and in vivo assessment of gastrointestinal transit (GIT) and colonic transit. Furthermore we demonstrate a method for separation of the ME from the tunica mucosa followed by immunological analysis, which is crucial to distinguish between the inflammatory responses in these both highly immunoactive bowel wall compartments. All analyses are easily transferable to any other research models, affecting gastrointestinal function.

Postoperative ileus (POI) is a complication of abdominal surgery leading to increased morbidity and a prolonged hospital stay. Because prophylactic or therapeutic strategies are lacking intensified research is necessary. Therefore we established a standardized and feasible mouse model to investigate the pathophysiology of POI and to study potential therapeutic options.

Functional Assessment of Darmmotilität und Darmwand Entzündung in Nagetiere: Analysen in einem standardisierten Modell der intestinalen Manipulation

Inflammation of the gastrointestinal tract is a common reason for a variety of human diseases. Animal research models are critical in investigating the ...

Forschung

Medizin

Modeling Colitis-Associated Cancer with Azoxymethane (AOM) and Dextran Sulfate Sodium (DSS)

Individuals with inflammatory bowel disease (IBD), such as Crohn's disease (CD) or ulcerative colitis (UC) are at increased risk of developing colorectal cancer (CRC) over healthy individuals. This risk is proportional to the duration and extent of disease, with a cumulative incidence as high as 30% in individuals with longstanding UC with widespread colonic involvement.1 Colonic dysplasia in IBD and colitis associated cancer (CAC) are believed to develop as a result of repeated cycles of epithelial cell injury and repair while these cells are bathed in a chronic inflammatory cytokine milieu.2 While spontaneous and colitis-associated cancers share the quality of being adenocarcinomas, the sequence of underlying molecular events is believed to be different.3 This distinction argues the need for specific animal models of CAC.
Several mouse models currently exist for the study of CAC. Dextran sulfate sodium (DSS), an agent with direct toxic effects on the colonic epithelium, can be administered in drinking water to mice in multiple cycles to create a chronic inflammatory state. With sufficient duration, some of these mice will develop tumors.4 Tumor development is hastened in this model if administered in a pro-carcinogenic setting. These include mice with genetic mutations in tumorigenesis pathways (APC, p53, Msh2), as well as mice pre-treated with genotoxic agents (azoxymethane [AOM], 1,2-dimethylhydrazine [DMH]).5 
The combination of DSS with AOM as a model for colitis associated cancer has gained popularity for its reproducibility, potency, low price, and ease of use. Though they have a shared mechanism, AOM has been found to be more potent and stable in solution than DMH. While tumor development in other models generally requires several months, mice injected with AOM and subsequently treated with DSS develop adequate tumors in as little as 7-10 weeks.6, 7 Finally, AOM and DSS can be administered to mice of any genetic background (knock out, transgenic, etc.) without cross-breeding to a specific tumorigenic strain. Here, we demonstrate a protocol for inflammation-driven colonic tumorigenesis in mice utilizing a single injection of AOM followed by three seven-day cycles of DSS over a 10 week period. This model induces tumors with histological and molecular changes closely resembling those occurring in human CAC and provides a highly valuable model for the study of oncogenesis and chemoprevention in this disease.8

Modeling Colitis-Associated Cancer with Azoxymethane AOM and Dextran Sulfate Sodium DSS

We demonstrate a protocol in which administration of the genotoxic agent azoxymethane (AOM) followed by three cycles of the pro-inflammatory agent dextran sulfate sodium (DSS) rapidly and consistently generates colon tumors in mice with morphologic and molecular similarities to those seen in human colitis-associated cancer.

Modeling Colitis-assoziierten Krebs mit Azoxymethan (AOM) und Dextransulfat Natrium (DSS)

Individuals with inflammatory bowel disease (IBD), such as Crohn's disease (CD) or ulcerative colitis (UC) are at increased risk of developing colorectal ...

Murine Model of Intestinal Ischemia-reperfusion Injury

Intestinal ischemia is a life-threatening condition associated with a broad range of clinical conditions including atherosclerosis, thrombosis, hypotension, necrotizing enterocolitis, bowel transplantation, trauma and chronic inflammation. Intestinal ischemia-reperfusion (IR) injury is a consequence of acute mesenteric ischemia, caused by inadequate blood flow through the mesenteric vessels, resulting in intestinal damage. Reperfusion following ischemia can further exacerbate damage of the intestine. The mechanisms of IR injury are complex and poorly understood. Therefore, experimental small animal models are critical for understanding the pathophysiology of IR injury and the development of novel therapies.
Here we describe a mouse model of acute intestinal IR injury that provides reproducible injury of the small intestine without mortality. This is achieved by inducing ischemia in the region of the distal ileum by temporally occluding the peripheral and terminal collateral branches of the superior mesenteric artery for 60 min using microvascular clips. Reperfusion for 1 hr, or 2 hr after injury results in reproducible injury of the intestine examined by histological analysis. Proper position of the microvascular clips is critical for the procedure. Therefore the video clip provides a detailed visual step-by-step description of this technique. This model of intestinal IR injury can be utilized to study the cellular and molecular mechanisms of injury and regeneration.

Here we describe the detailed procedure of intestinal ischemia-reperfusion in mice which results in reproducible injury without mortality to encourage the standardization of this technique across the field. This model of intestinal ischemia-reperfusion injury can be utilized to study the cellular and molecular mechanisms of injury and regeneration.

Murine Modell der intestinalen Ischämie-Reperfusionsschaden

Intestinal ischemia is a life-threatening condition associated with a broad range of clinical conditions including atherosclerosis, thrombosis, ...

Functional Assessment of Intestinal Permeability and Neutrophil Transepithelial Migration in Mice using a Standardized Intestinal Loop Model

The intestinal mucosa is lined by a single layer of epithelial cells that forms a dynamic barrier allowing paracellular transport of nutrients and water while preventing passage of luminal bacteria and exogenous substances. A breach of this layer results in increased permeability to luminal contents and recruitment of immune cells, both of which are hallmarks of pathologic states in the gut including inflammatory bowel disease (IBD). 
Mechanisms regulating epithelial barrier function and transepithelial migration (TEpM) of polymorphonuclear neutrophils (PMN) are incompletely understood due to the lack of experimental in vivo methods allowing quantitative analyses. Here, we describe a robust murine experimental model that employs an exteriorized intestinal segment of either ileum or proximal colon. The exteriorized intestinal loop (iLoop) is fully vascularized and offers physiological advantages over ex vivo chamber-based approaches commonly used to study permeability and PMN migration across epithelial cell monolayers.
We demonstrate two applications of this model in detail: (1) quantitative measurement of intestinal permeability through detection of fluorescence-labeled dextrans in serum after intraluminal injection, (2) quantitative assessment of migrated PMN across the intestinal epithelium into the gut lumen after intraluminal introduction of chemoattractants. We demonstrate feasibility of this model and provide results utilizing the iLoop in mice lacking the epithelial tight junction-associated protein JAM-A compared to controls. JAM-A has been shown to regulate epithelial barrier function as well as PMN TEpM during inflammatory responses. Our results using the iLoop confirm previous studies and highlight the importance of JAM-A in regulation of intestinal permeability and PMN TEpM in vivo during homeostasis and disease. 
The iLoop model provides a highly standardized method for reproducible in vivo studies of intestinal homeostasis and inflammation and will significantly enhance understanding of intestinal barrier function and mucosal inflammation in diseases such as IBD.

Dysregulated intestinal epithelial barrier function and immune responses are hallmarks of inflammatory bowel disease that remain poorly investigated due to a lack of physiological models. Here, we describe a mouse intestinal loop model that employs a well-vascularized and exteriorized bowel segment to study mucosal permeability and leukocyte recruitment in vivo.

Funktionelle Beurteilung der Intestinalpermeabilität und der neutrophilen transepithelialen Migration bei Mäusen mit einem standardisierten Darmschleifenmodell

The intestinal mucosa is lined by a single layer of epithelial cells that forms a dynamic barrier allowing paracellular transport of nutrients and water ...

Immunologie und Infektion

<meta charset="utf8"></head><body>Mausmodell zur Untersuchung des postoperativen Ileus durch Darmmanipulation

Postoperative Ileus Murine Model

Most patients experience postoperative ileus (POI) after surgery, which is associated with increased morbidity, mortality, and hospitalization time. POI is a consequence of mechanical damage during surgery, resulting in disruption of motility in the gastrointestinal tract. The mechanisms of POI are related to aberrant neuronal sensitivity, impaired epithelial barrier function, and increased local inflammation. However, the details remain enigmatic. Therefore, experimental murine models are crucial for elucidating the pathophysiology and mechanism of POI injury and for the development of novel therapies.
Here, we introduce a murine model of POI generated via intestinal manipulation (IM) that is similar to clinical surgery; this is achieved by mechanical damage to the small intestine by massaging the abdomen 1-3 times with a cotton swab. IM delayed gastrointestinal transit 24 h after surgery, as assessed by FITC-dextran gavage and fluorescence detection of the segmental digestive tract. Moreover, tissue swelling of the submucosa and immune cell infiltration were investigated by hematoxylin and eosin staining and flow cytometry. Proper pressure of the IM and a hyperemic effect on the intestine are critical for the procedure. This murine model of POI can be utilized to study the mechanisms of intestinal damage and recovery after abdominal surgery.

<meta charset="utf8"></head><body>Postoperatives Ileus-Mausmodell

We describe a murine model of postoperative ileus generated via intestinal manipulation. Gastrointestinal transit function, pathologic changes, and immune cell activation were assessed 24 h after surgery.

Postoperatives Ileus-Mausmodell

Most patients experience postoperative ileus (POI) after surgery, which is associated with increased morbidity, mortality, and hospitalization time. POI ...

Single-Anastomosis Duodeno-Ileal Bypass with Sleeve Gastrectomy Model in Mice

Obesity is a major health issue worldwide. As a response, bariatric surgeries have emerged to treat obesity and its related comorbidities (e.g., diabetes mellitus, dyslipidemia, non-alcoholic steatohepatitis, cardiovascular events, and cancers) through restrictive and malabsorptive mechanisms. Understanding the mechanisms by which these procedures allow such improvements often require their transposition into animals, especially in mice, because of the ease of generating genetically modified animals. Recently, the single-anastomosis duodeno-ileal bypass with sleeve gastrectomy (SADI-S) has emerged as a procedure that uses both restrictive and malabsorptive effects, which is being used as an alternative to gastric bypass in case of major obesity. Thus far, this procedure has been associated with strong metabolic improvements, which has led to a marked increase in its use in daily clinical practice. However, the mechanisms underlying these metabolic effects have been poorly studied as a result of a lack of animal models. In this article, we present a reliable and reproducible model of SADI-S in mice, with a special focus on perioperative management. The description and use of this new rodent model will be helpful for the scientific community to better understand the molecular, metabolic, and structural changes induced by the SADI-S and to better define the surgical indications for clinical practice.

Single-anastomosis duodeno-ileal bypass (SADI-S) is an emerging bariatric procedure with important metabolic effects. In this article, we present a reliable and reproducible model of SADI-S in mice.

Duodeno-ilealer Bypass mit Sleeve-Gastrektomie-Modell bei Mäusen

Obesity is a major health issue worldwide. As a response, bariatric surgeries have emerged to treat obesity and its related comorbidities (e.g., diabetes ...

Rodent Model of Intestinal Ischemia-Reperfusion Injury via Occlusion of the Superior Mesenteric Artery

Intestinal ischemia-reperfusion injury (IRI) is associated with a myriad of conditions in both veterinary and human medicine. Intestinal IRI conditions, such as gastric dilatation volvulus (GDV), mesenteric torsion, and colic, are observed in animals such as dogs and horses. An initial interruption of blood flow causes tissues to become ischemic. Although necessary to salvage viable tissue, subsequent reperfusion can induce further injury. The main mechanism responsible for IRI is free radical formation upon reperfusion and reintroduction of oxygen into damaged tissue, but there are many other components involved. The resulting local and systemic effects often impart a poor prognosis. 
Intestinal IRI has been the subject of extensive research over the past 50 years. An in vivo rodent model in which the base of the superior mesenteric artery (SMA) is temporarily ligated is currently the most common method used to study intestinal IRI. Here, we describe a model of intestinal IRI utilizing isoflurane anesthesia in 21% O2 medical air that yields reproducible injury, as demonstrated by consistent histopathology of the small intestines. Tissue injury was also assessed in the colon, liver, and kidneys.

We describe how to generate a widely used surgical model of intestinal ischemia-reperfusion injury (IRI) in rodents. The procedure involves occlusion of the superior mesenteric artery followed by the restoration of blood flow. This model is useful for studies investigating occlusive causes of intestinal IRI in both veterinary and human medicine.

Nagetiermodell der intestinalen Ischämie-Reperfusionsverletzung durch Verschluss der Arteria mesenterica superior

Intestinal ischemia-reperfusion injury (IRI) is associated with a myriad of conditions in both veterinary and human medicine. Intestinal IRI conditions, ...

Murine Ileal Resection Model: Studying Ileectomy-Induced Bile Metabolism in Murine Model

Source: Zhang, R., et al. <a href="https://www.jove.com/v/55728"> Ileectomy-induced Bile Overaccumulation in Mouse Intestine.</a> J. Vis. Exp. (2017)
This video describes the detailed protocol for intestinal resection in a murine model. This technique provides insights into ileectomy-induced bile malabsorption, overaccumulation, and toxicity in the mouse intestine.

Maus-Ileumresektionsmodell: Untersuchung des Ileektomie-induzierten Gallenstoffwechsels im Mausmodell

Source: Zhang, R., et al.  Ileectomy-induced Bile Overaccumulation in Mouse Intestine. J. Vis. Exp. (2017)
This video describes the detailed protocol for ...

Ein Maus-Modell der teilweisen Darmverschluss

Zusammenfassung

Weitere Videos entdecken

Functional Assessment of Darmmotilität und Darmwand Entzündung in Nagetiere: Analysen in einem standardisierten Modell der intestinalen Manipulation

Modeling Colitis-assoziierten Krebs mit Azoxymethan (AOM) und Dextransulfat Natrium (DSS)

Murine Modell der intestinalen Ischämie-Reperfusionsschaden

Funktionelle Beurteilung der Intestinalpermeabilität und der neutrophilen transepithelialen Migration bei Mäusen mit einem standardisierten Darmschleifenmodell

Postoperatives Ileus-Mausmodell

Postoperatives Ileus-Mausmodell

Postoperatives Ileus-Mausmodell

Duodeno-ilealer Bypass mit Sleeve-Gastrektomie-Modell bei Mäusen

Nagetiermodell der intestinalen Ischämie-Reperfusionsverletzung durch Verschluss der Arteria mesenterica superior

Maus-Ileumresektionsmodell: Untersuchung des Ileektomie-induzierten Gallenstoffwechsels im Mausmodell