Bereiten Sie die Maus für eine Operation vor. Rasieren Sie die unteren Quadranten des Bauches mit einem Rasiermesser und desinfizieren Sie den Bereich mit Jod. Legen Sie die Maus auf eine saubere Arbeitsfläche auf dem Rücken, wobei der Kopf vom Bediener weg zeigt.
Machen Sie einen längsigen Hautschnitt etwa einen halben Zentimeter lang im linken Unterbauch. Achten Sie darauf, nicht in die Peritonealhöhle einzudringen. Verwenden Sie eine kleine Schere, um den Schnitt um etwa ein bis zwei Zentimeter zu verlängern.
Machen Sie einen intramuskulären Schnitt, um Zugang in die Peritonealhöhle zu erhalten. In den meisten Fällen befindet sich das Cecum auf der linken Seite des Bauches. Isolieren Sie das Cecum.
Mit stumpfen, anatomischen Zangen, sanft und sorgfältig aussetzen das Cecum durch den Schnitt. Schritt vier ist die Ligation. Die Position der Ligation auf dem Cecum bestimmt den Schweregrad der Sepsis.
Etwa 75 % des Cecums verursachen eine schwere Sepsis. Die Liganierung von 50% des Cecums induziert eine Sepsis auf mittlerer Ebene. Während die Liganzierung von 25 % oder weniger des Cecums zu einer geringfügigen Sepsis führen wird.
Ligate das Cecum an der angegebenen Position. Achten Sie darauf, das Ileocecal-Ventil nicht zu ligte. Schritt fünf ist, das Cecum zu durchstechen.
Mit einer Nadel, perforieren Sie das Cecum mit einem einzigen Durchgang und durch Punktion auf halbem Weg zwischen der Ligation und der Spitze des Cecums. Stellen Sie sicher, dass Sie keine Blutgefäße durchstechen. Um eine vollständige Punktion zu gewährleisten, extrudieren Sie ein kleines Tröpfchen Kot aus beiden Nadellöchern.
Ersetzen Sie das Cecum vorsichtig in die Bauchhöhle. Schließen Sie die Bauchmuskulatur, indem Sie einfache laufende Nähte anwenden und die Haut schließen. Reinigen Sie die Haut mit Jod.
Injizieren Sie die Maus mit einer vorgewärmten Herz-/Mittellösung, um zu reanimieren. Legen Sie die Maus zurück in den Käfig mit unbegrenztem Zugang zu Nahrung und Wasser. Nach etwa drei Tagen nach der Cecal Ligation und Punktion oder dem CLP-Verfahren unterziehen wir die Maus einem zweiten Schlag mit einer intranasalen Infektion, um eine Lungenentzündung zu stimulieren, die häufig bei Sepsis auftritt.
Nähern Sie sich dem Hals der Maus von hinten, sanft und sanft. Daumen und Zeigefinger der linken Hand bilden eine U-förmige Position. Halten Sie den Hals direkt hinter den Ohren, so dass der Mauskopf vollständig zurückhaltend ist.
Führen Sie die intranasale Infektion ein. Mit einer 100-Mikroliter-Pipette den Staphylococcus aureus-Stamm intranasal einflößen. Halten Sie die Maus in einer aufrechten Position, fallen sie langsam zwei bis drei Mikroliter der bakteriellen Lösung in beide Nasenlöcher der Maus.
Heben Sie die Maus nach oben und unten mit dem Kopf nach oben und Schwanz nach unten, um die bakterielle Lösung in die Luftröhre zu helfen. Heben Sie die Maus schnell nach oben, während Sie sie sanft und langsam senken. Wiederholen Sie die Instillation 15 Mal oder bis die gesamte bakterielle Lösung eingeflößt ist.
Der letzte Schritt besteht darin, den Vorgang abzuschließen. Legen Sie die Maus auf die abgewinkelte Bettwäsche in etwa einem 35-Grad-Winkel, um sich zu erholen. Stellen Sie sicher, dass die Maus auf dem Rücken mit dem Kopf aufgelegt ist.
Beobachten Sie die Maus, um sicherzustellen, dass es vollständig aus der Anästhesie und dem Verfahren wiederhergestellt ist. Nach dem Abflachen der Bettwäsche, legen Sie die Maus zurück in den Käfig mit unbegrenztem Zugang zu Nahrung und Wasser. Mäuse begannen etwa 12 Stunden nach der Induktion der Peritonitis zu sterben.
Die Sterblichkeit war bei Mäusen mit CLP vor einer Lungenentzündung viel höher. Drei Tage nach der Operation hatten CLP-Mäuse mehr Sterblichkeit mit einer intranasalen Verabreichung von Staphylococcus aureus. Die Konzentrationen von serum pro-inflammatorischen Zytokinen stiegen signifikant 24 Stunden nach der bakteriellen Instillation bei Sepsismäusen im Vergleich zu den Mäusen, die CLP allein hatten oder die Sham-Mäuse mit einem zweiten Treffer operierten.
Jedoch, Doppelschlag Mäuse zeigten signifikante Abnahme der BAL-Flüssigkeit Zytokin-Spiegel im Vergleich zu SA und Sham Chirurgie plus SA-Mäuse. Daher beeinträchtigt CLP die Wirtsabwehr und erhöht die Anfälligkeit für Infektionen. Dieses Dual-Hit-Modell ist ein wertvolles Werkzeug, um die molekularen Mechanismen für die Wirts-Pathogen-Interaktion zu verstehen, die den Weg zur Entwicklung neuer, wirksamer Medikamente und anderer Therapeutika für Superug-Infektionen eröffnen kann.
