Die chronische Verabreichung von Isoproterenol über eine osmotische Pumpe wurde weit verbreitet verwendet, um Veränderungen der fortgeschrittenen Herzinsuffizienz bei Mäusen zu rekapitulieren. Diese Methode ist einfach und erfordert weniger chirurgisches Know-how als andere Modelle, wie LAD und TAC. Demonstriert wird das Verfahren von Dr.Vincent Ren, einem Forscher aus dem Labor von Dr.Yibin Wang.
Nach dem Wiegen und Aufzeichnen des Körpergewichts jeder Maus, berechnen Sie die entsprechende Menge und Konzentration von Isoproterenol für jedes Tier, und lösen Sie das Isoproterenol in 120 Mikroliter steril0,9% Natriumchlorid. Mischen Sie gründlich für eine Minute, um das Isoproterenol vollständig zu slubilisieren, und wiegen und erfassen Sie das Gewicht einer leeren osmotischen Pumpe, zusammen mit und ohne ihren Strömungsmoderator, pro Maus. Befestigen Sie ein 27-Spur-, stumpfes Füllrohr, das mit den osmotischen Pumpen geliefert wird, und laden Sie eine Ein-Milliliter-Spritze mit 120 Mikroliter der Isoproterenol-Lösung pro Maus.
Halten Sie eine Pumpe in aufrechter Position, legen Sie das Füllrohr durch die Pumpenöffnung an der Spitze, bis die Spitze des Füllrohrs in der Nähe des Bodens des Pumpenbehälters sitzt, und drücken Sie den Spritzenkolben langsam, bis die Isoproterenol-Lösung bis zur Pumpenöffnung gefüllt ist. Wenn die Pumpe geladen wurde, entfernen Sie vorsichtig das Füllrohr, und wischen Sie die überschüssige Lösung ab. Legen Sie den Durchflussmoderator zurück, um die Pumpe zu schließen, und wischen Sie jede überschüssige Lösung ab.
Dann die Pumpe neu wiegen, um zu bestätigen, dass über 90% des Reservoirvolumens gefüllt wurde. Legen Sie die Maus in die Supine-Position auf einem beheizten Pad, und entfernen Sie die Luft aus dem Unterbauch. Für chirurgische osmotische Pumpimplantation, bestätigen Sie einen Mangel an Reaktion auf Zehenkneifung in einer anästhesierten Maus, und tragen Salbe auf die Augen des Tieres.
Reinigen Sie die exponierte Haut mit einem geeigneten Desinfektionsmittel und machen Sie einen ein Zentimeter mittleren Hautschnitt. Verwenden Sie eine stumpfe Schere, um die Haut sorgfältig von den darunter liegenden Peritonealwänden zu sezieren, und verwenden Sie Zangen, um die Peritonealwände vom darunter liegenden Darm wegzuziehen. Verwenden Sie eine feine Schere, um ein 0,8-Zentimeter-Loch in der Peritonealwand zu schneiden, und setzen Sie das osmotische Pumpenstrom-Moderatorenende zuerst in die Peritonealhöhle ein.
Wenn die Pumpe an Ort und Stelle ist, verwenden Sie 5-0 resorbierbare Nähte in einer unterbrochenen Weise, um das Loch in der Peritonealwand zu schließen, und verwenden Sie 6-0 nicht resorbierbare Nähte, um die Haut zu schließen. Legen Sie die Maus dann in einen speziellen Inkubator mit Überwachung bis zur vollen Reumbency, bevor Sie das Tier in seinen Heimischenkäfig zurückbringen. Hier wird eine Zusammenfassung der wöchentlichen Änderungen auf der Grundlage der ausgewählten echokardiographischen Parameter und der erwarteten Zeit für die Modellentwicklung vorgestellt.
Obwohl Unterschiede zwischen den Mausstämmen beobachtet werden, nehmen die interventrikuläre septale Wanddicke am Ende der Diastole und die fraktionale Verkürzung in der ersten Woche zu, nehmen aber um spätere Zeitpunkte ab. Der linksventrikuläre Innendurchmesser am Ende der Diastole und die linksventrikuläre Masse nehmen über einen Zeitraum von drei Wochen zu. Darüber hinaus zeigen Mausherzen sichtbar größere linksventrikuläre Kammerabmessungen unter Isoproterenol sowie größere Mengen an Fibrose im Vergleich zu mit Einer Linie behandelten Kontrollen.
Es ist wichtig, während der Überlebensoperation eine sterile chirurgische Umgebung aufrechtzuerhalten, um postoperative Infektionen und Morbidität zu minimieren. Die erfolgreiche Modellerstellung kann in vivo durch serielle Echokardiographie auf Hypertrophie, Dilatation und Dysfunktion sowie ex vivo mittels histologischer und molekularer Bewertung von geerntetem Herzgewebe beurteilt werden. Wir haben diese Methode auf über 100 Stämme von inzuchtbasierten Mäusen angewendet, um kardiale Remodeling-Eigenschaften aufgrund chronischer beta-adrenerergen Stimulation zu bewerten.
Die Ergebnisse werden veröffentlicht und sind leicht verfügbar.
