Dieses Modell bietet ein Standardprotokoll für die Etablierung von Tiermodellen der koronaren Transplantaterkrankung. Das Verfahren des Tiermodells, das mit dieser Methode etabliert wurde, ist Standard und das Ergebnis ist stabil. Teilen Sie zunächst drei Monate alte, männliche Minischweine mit einem Gewicht von 30 bis 35 Kilogramm in die Schein- und Venentransplantatkrankheitsgruppen mit jeweils fünf Tieren ein.
Stellen Sie nach der Betäubung des Tieres den Ohrzugang her, indem Sie einen Venenkatheter in die Randohrvene einführen. Übertragen Sie nun das Schwein in Rückenlage auf den Operationstisch. Führen Sie eine Trachealintubation mit einem französischen Röhrchen von 7,0 bis 7,5 durch und schließen Sie es an den Anästhesie-Beatmungskreislauf an.
Immobilisieren Sie die Gliedmaßen mit Bandagen und heben Sie den Kopf mit einem sterilen Tuch an. Überwachen Sie nach intravenöser Injektion von Vecuroniumbromid zur Muskelentspannung die Herzfrequenz, den Blutsauerstoffgehalt und die Körpertemperatur mit einem Elektrokardiogramm. Legen Sie nach dem Rasieren und Sterilisieren des Operationsbereichs ein steriles OP-Tuch darum.
Nachdem Sie den Schnitt gemacht und die innere Brustvene wie im Text beschrieben freigelegt haben, lokalisieren Sie die innere Brustvene und die linke innere Brustarterie auf der linken Seite des Brustbeins und führen Sie eine stumpfe Dissektion der inneren Brustvene mit einer Gefäßzange durch. Führen Sie die Hämostase durch Elektrokoagulation der linken inneren Brustvenenäste mit einem elektrischen Messer durch. Wenn die Hämostase unvollständig ist, ligieren und markieren Sie die beiden Enden der Vene während der Ernte.
Sobald die Vene entfernt ist, injizieren Sie Heparin, normale Kochsalzlösung, zur Vorbehandlung in die Vene. Legen Sie dann die Vene in die normale Kochsalzlösung, bewahren Sie sie zur Sicherung auf und schneiden Sie in ähnlicher Weise die innere Brustvene der Scheingruppe ein. Öffnen Sie dann das Perikard, schließen Sie die Brustwand und verwenden Sie die innere Brustvene zur pathologischen Kontrolle ohne Koronararterien-Bypass-Transplantation.
Machen Sie mit einem elektrischen Messer einen etwa sieben Zentimeter langen Schnitt am Perikard, um den rechten Koronararterienstamm freizulegen. Hängen Sie das Perikard auf und nähen Sie die Haut auf der ipsilateralen Seite mit 1-0 chirurgischen Nähten. Trennen Sie nun den rechten Koronararterienstamm vom umgebenden Gewebe.
Umgehen Sie anschließend mit einem Drahthaken das Blockierungsband unter dem proximalen Ende der isolierten rechten Koronararterie in der Nähe der Aorta. Behandeln Sie dann das Myokard mit drei Zyklen von zwei Minuten Ischämie und fünf Minuten Reperfusion, indem Sie das Blockband straffen und entspannen. Überwachen Sie auch die elektrische Aktivität des Herzens mit dem Elektrokardiogramm während der Vorkonditionierung der Ischämie-Reperfusion.
Als nächstes schneiden Sie das Epikard, das die Blutgefäße bedeckt, nach dem Anziehen des Bandes, um den rechten koronaren Blutfluss zu blockieren. Freilegen Sie die Koronararterienwand und schneiden Sie sie in Längsrichtung mit der Spitze einer chirurgischen Klinge gegen die Mitte der Vorderwand der Blutgefäße. Nachdem Sie das Lumen geschnitten und den Einschnitt vergrößert und einen Koronarshunt platziert haben, führen Sie ein Ende des Shunts mit einer Spule durch den Riss in die distale Koronararterie ein.
Leiten Sie nun das Blut in den Koronararterien in den hohlen Koronarshunt, um ein klares Operationsfeld zu gewährleisten, und führen Sie mit der 6-0-Polypropylennaht eine durchgehende Naht zwischen der inneren Brustvene und der Aortenwand durch. Verschließen Sie in der Mitte der aufsteigenden Aorta die linke anterolaterale Wand der aufsteigenden Aorta mit einer Semi-Okklusionsklemme. Nachdem Sie mit der chirurgischen Klinge einen kleinen Schnitt in die Aortenwand gemacht haben, wo die Adventitia geschnitten wurde, führen Sie das Kopfende der Gleitwelle am Kopfende des Stempels durch diesen Einschnitt in die Aortenhöhle ein.
Dann ziehen Sie die Schiebewelle nach außen zusammen und das Kreismesser schneidet ein Stück der Arterienwand ab. Sobald der Shunt herausgezogen ist, führen Sie eine durchgehende Naht zwischen der inneren Brustvene und der rechten Koronararterie mit der 6-0-Polypropylennaht durch. Zeichnen Sie nach dem Öffnen der Semi-Okklusionsklemme den Bypass-Fluss des rechten Koronararterienstamms proximal zur Anastomosenstelle mittels Ultraschall auf.
Bereiten Sie das Tier wie zuvor gezeigt auf die Operation vor. Machen Sie mit einem elektrischen Messer einen 10 Zentimeter langen mittleren Brustbeinschnitt, um das Brustbein zu spalten und die Vene 30 Tage nach der Operation zu ernten. Vermeiden Sie während der Trennung die Hauptblutgefäße, das Herz und trennen Sie die transplantierten Blutgefäße Schicht für Schicht.
Schneiden Sie schnell die großen Blutgefäße ab, die mit dem Herzen verbunden sind, und legen Sie das Herz und die aufsteigende Aorta auf Eissplitter. Sobald die Transplantat-Gefäßbrücke, die angeschlossene Aorta und die rechte Koronararterie entfernt sind, spülen Sie alle Proben mit normaler Kochsalzlösung bei vier Grad Celsius aus. Nachdem Sie das gesamte Transplantatgefäß von etwa drei bis vier Zentimetern entnommen und in vier bis fünf gleiche Teile geteilt haben, übertragen Sie es in CryoTubes, um es schnell in flüssigem Stickstoff einzufrieren.
Fixieren Sie das eiskalte, mit Kochsalzlösung gespülte Transplantat zur Analyse in 4%iger Paraformaldehydlösung. Nach 12 Stunden Gewebefixierung färben Sie die Schnitte drei Minuten lang in 50 Millilitern einer wässrigen Hämatoxylinlösung. Trennen Sie dann die Abschnitte, indem Sie sie jeweils 10 Sekunden lang mit 50 Millilitern 0,5% Salzsäure-Ethanol und 0,2% Ammoniakwasser waschen.
Nachdem die Abschnitte eine Stunde lang mit fließendem Wasser gespült wurden, reinigen Sie sie, indem Sie sie drei Minuten lang in destilliertem Wasser einweichen. Nachdem Sie die Schnitte 10 Minuten lang in 70% und 90% Ethanol dehydriert haben, legen Sie sie zwei bis drei Minuten lang in 50 Milliliter 0,5%ige Alkohol-Eosin-Färbelösung. Sobald die gefärbten Abschnitte in reinem Ethanol dehydriert sind, tränken Sie die Proben 10 Minuten lang in reinem Xylol, um sie transparent zu machen.
Zum Schluss träufeln Sie die transparenten Abschnitte mit neutralem Kleber ab, bevor Sie sie mit einem Deckglas abdecken. Beobachten Sie pathologische Schnitte unter einem Lichtmikroskop bei 40-facher Vergrößerung. Die Ultraschalluntersuchung zeigte, dass die gesamte Blutflussrichtung im proximalen Ende, in der Gefäßhöhle und am distalen Ende des Transplantatgefäßes normal war.
Die proximalen und distalen Enden des Transplantatgefäßes zeigten jedoch einen gewissen retrograden Blutfluss. Die histologische Analyse der inneren Brustvene ergab, dass in der Scheingruppe die Tunica intima, die Tunica media und die Venenwand des Venentransplantats normal erschienen. 30 Tage nach der Koronararterientransplantation war jedoch die Intima des Gefäßes verdickt und das Lumen verengt.
Unter den Schein- und Venentransplantat-Krankheitsgruppen zeigten vier biochemische Indizes, Aspartat-Aminotransferase, Serum-Bilirubin, Gesamtbilirubin und Kreatinin, statistisch signifikante Veränderungen. Der Chirurg sollte die innere Brustvene vollständig freilegen und sicherstellen, dass sie nicht mit dem umgebenden Gewebe verbunden ist. Die Technik bietet einen standardisierten Modellierungsprozess für die Untersuchung venöser Transplantaterkrankungen in Tiermodellen.
