Diese Methode kann zur Reproduktion der entzündlichen Ereignisse verwendet werden, die bei akuter biliärer Pankreatitis auftreten. Es ist möglich, Veränderungen im Pankreasgewebe in seinen frühen Stadien zu untersuchen, was in der Klinik im Allgemeinen nicht möglich ist. Die Hauptvorteile dieser Technik sind, dass sie für einen ausgebildeten Forscher schnell und einfach zu reproduzieren ist und ähnliche Ergebnisse wie eine akute Pankreatitis beim Menschen bietet.
Die Methode kann verwendet werden, um pharmakologische Immunantworten von Wirkstoffmolekülen und andere therapeutische Interventionen zu untersuchen, da sie die Untersuchung von entzündungsvermittelenden Zellen in der Bauchspeicheldrüse und angrenzenden Organen ermöglicht. Beim Versuch dieses Protokolls ist es wichtig, die Organe zu lokalisieren und die Kanülregion zu etablieren. Merken Sie sich die Lage der Organe und üben Sie die Injektionsanwendung zuerst mit einer farbigen Lösung wie Methylenblau aus.
Nachdem Sie die Tiefe der Anästhesie mit einer Zehenklemme überprüft haben, reinigen Sie den Bauchbereich einer anästhesierten Maus mit einer 5% Povidon-Jodlösung. Entfernen Sie mit einem Trimmer die Haare zwischen Brust und Unterbauch und reinigen Sie einen etwa zwei Quadratzentimeter großen Operationsbereich mit 70% Alkohol. Immobilisieren Sie das Tier auf dem Operationsbrett und schneiden Sie mit einer Schere fünf Millimeter der Haut horizontal auf dem oberen Teil des Abdomens und einen Zentimeter unter dem Xiphoid-Prozess.
Wiederholen Sie den Schnitt am Peritoneum, um die Laparotomie mit minimaler Exposition der Höhle durchzuführen. Ziehen Sie die Leber mit einem Retraktor etwa einen Zentimeter vom Darm entfernt in Richtung Kopf und lokalisieren Sie die Region der Bauchspeicheldrüse und des Zwölffingerdarms. Heben Sie die Leber mit einer Pinzette in Richtung Tierkopf an.
Indem Sie den Teil des Dünndarms vorsichtig ziehen, fixieren Sie die beiden seitlichen Enden mit einer 6-0 Polypropylennaht, um auch den distalen Teil des gemeinsamen Gallengangs besser zu sehen. Mit einem Mikrogefäßclip verschließen Sie vorübergehend den proximalen gemeinsamen Gallengang. Legen Sie das Organ aus der Bauchhöhle frei.
Dann machen Sie einen vorübergehenden Verschluss des distalen gemeinsamen Gallengangs mit einem 8-0 Naht. Um Zugang zum gemeinsamen Gallengang zu erhalten, punktieren Sie die periampulläre Region, die als weißlicher Teil der Dünndarmwand erscheint. Starten Sie mit einer 0,4-Millimeter-Nadel, die mit einem 0,54-Millimeter-Polyethylenröhrchen verbunden ist, die Infusionspumpe für die Infusion von 2,5% Natriumtarocholatlösung mit einer konstanten Geschwindigkeit von 10 Mikrolitern pro 10 Gramm Körpergewicht für drei Minuten.
Entfernen Sie nach der Infusion den Mikrogefäßclip, den temporären 8-0 Naht und die Injektionsnadel aus dem Pankreasgallengang. Nähen Sie den Bauch mit einer 6-0 nichtabsorbierenden monofilen Polypropylennaht. Die Zeit zwischen der Laparotomie und der Endnaht sollte nicht mehr als 30 Minuten betragen.
Nach der Operation bringen Sie die Tiere in Polyethylenboxen unter, die mit Holzspänen und Wasser und Futter ad libitum ausgekleidet sind. Halten Sie das Tier vorsichtig mit zurückgezogener Haut, fördern Sie einen leichten Vorsprung des Augapfels und positionieren Sie das Tier mit dem Auge nach oben. Geben Sie dem Tier einen Tropfen Augensalbe mit Lokalanästhetikum ein.
Positionieren Sie das Ende eines Kapillarrohrs im medialen Augenwinkel und führen Sie es vorsichtig in einem Winkel von etwa 30 bis 45 Grad unter den Augapfel ein. Drehen Sie das Kapillarrohr, bis der Blutfluss beginnt. Sobald die Sammlung vorbei ist, stellen Sie die Homöostase sicher, indem Sie die Augenlider mit leichter Kompression geschlossen halten.
Später werden mit einer 27-Gauge-Nadel vier Milliliter eiskaltes PBS in die Peritonealhöhle der Maus injiziert. Nach der Injektion das Peritoneum 10 Sekunden lang sanft einmassieren, um die anhaftenden Zellen zu entfernen. Machen Sie mit einer Schere und einer Pinzette einen kleinen Schnitt von 0,5 Zentimetern auf der Innenhaut und der Muskulatur, um die Bauchhöhle freizulegen.
Führen Sie eine Zwiebelpipette in das Peritoneum ein und sammeln Sie so viel Flüssigkeit wie möglich, wobei darauf zu achten ist, dass fettes Gewebe nicht abgesaugt wird. Sammeln Sie einen Teil der Bauchspeicheldrüse aus der Kopfregion zur weiteren Verarbeitung. Deponieren Sie die gesammelte Flüssigkeit in Schläuchen, die auf Eis aufbewahrt werden.
Dann zentrifugieren Sie die Peritonealflüssigkeit bei 250 mal G für fünf Minuten und lagern Sie den Überstand für die Dosierung von Interleukin-6. Um Serum zu erhalten, zentrifugieren Sie die gesammelten Blutproben bei 700 mal G für 15 Minuten und lagern Sie den Überstand für Amylase und Interleukin-6 Dosierung. Die Analyse des Pankreasgewebes 12 Stunden nach Induktion einer akuten Pankreatitis zeigte im Vergleich zu Gewebeproben aus der Scheingruppe eine intensive Entzündung im betroffenen Organ.
Ähnliche Ergebnisse wurden durch histologische Untersuchungen nach Hämatoxylin-Eosin-Färbung von Gewebeproben aus Schein und APTA dargestellt. Die Analyse des Blutserums zeigte einen signifikanten Anstieg der Serum-Amylase- und Interleukin-6-Zytokinkonzentration in der AP-Gruppe im Vergleich zur Scheingruppe. Gleichzeitig war die Interleukin-6-Konzentration in der Peritonealhöhlenflüssigkeit in der AP-Gruppe signifikant höher.
Der Schweregrad der Pankreatitis in diesem Modell hängt proportional von der Konzentration, dem Volumen und dem Druck der Infusion und dem Zeitpunkt der akuten Pankreatitisinduktion ab. Mit Hilfe dieser Technik können die Auswirkungen einer kontinuierlichen Peritonealspülung auf eine schwere akute Pankreatitis untersucht werden.
