Die Bewertung von L-DOPA-induzierten Dyskinesien im 6-Hydroxydopamin-Rattenmodell der Parkinson-Krankheit ist ein wichtiges präklinisches Instrument, um wirksame antidyskinetische Interventionen zu identifizieren. Dieses Modell ist relativ einfach, bietet niedrige Kosten und hat Ähnlichkeiten mit dem, was in der Klinik passiert. Das Verfahren demonstriert Danilo Leandro Ribeiro, Doktorand im Labor.
Beginnen Sie das Experiment mit männlichen Sprague-Dawley-Ratten, die 200 bis 250 Gramm wiegen. Unterbringung von zwei bis drei Tieren pro Käfig unter den Standardlaborbedingungen mit Futter und Wasser ad libitum. Vor der Operation den Noradrenalin-Transporter-Hemmer Imipramin intraperitoneal an die Ratte verabreichen.
Nachdem Sie die Anästhesie durch die fehlende Reaktion auf das Zehenklemmen bestätigt haben, positionieren Sie die Ratte in Bauchlage im stereotaktischen Gerät auf dem Heizkissen. Sobald die Ratte positioniert ist, verwenden Sie ein Skalpell, um einen einen Zentimeter langen Schnitt in der Region zu machen, in der die Mikroinjektion stattfinden wird. Reinigen Sie dann die Schädelregion mit Wattestäbchen und stellen Sie sicher, dass Bregma und Lambda freiliegen.
Nehmen Sie das mediale Vorderhirnbündel oder MFB, stereotaktische Koordinaten von Bregma 4,3 Millimeter vorne, 1,6 Millimeter seitlich zur rechten Seite und 8,3 Millimeter ventral vom Durometer. Wenn die Koordinaten festgelegt sind, verabreichen Sie das 6-Hydroxydopamin oder 6-OHDA einseitig mit einer Rate von 0,4 Mikrolitern pro Minute in der richtigen MFB mit einer 50-Mikroliter-Hamilton-Glasspritze. Am Ende der Operation vernähen Sie den Kopfhautschnitt und rehydrieren Sie das Tier mit warmer, steriler, 0,9% Kochsalzlösung subkutan in einer Dosis von 10 Milliliter pro Kilogramm.
Nehmen Sie das Tier aus dem stereotaktischen Rahmen und legen Sie es in einen warmen Erholungskäfig, während Sie es überwachen, bis das Bewusstsein wiedererlangt ist. Messen Sie vier Wochen nach der Läsion die Wirksamkeit der dopaminergen Läsion mit einem Schritttest, indem Sie die Akinesie der Vordergliedmaße kontralateral zur Läsion beurteilen. Ratten, die drei oder weniger Anpassungsschritte mit der kontralateralen Vorderbein aufweisen, sollten als mutmaßliche, schwer 6-OHDA-läsionierte Ratten in die Studie einbezogen werden.
Vier Wochen nach den 6-OHDA-Läsionen beginnen Sie die chronische Behandlung am Montag und zeichnen abnormale unwillkürliche Bewegungen am Mittwoch auf. Setzen Sie die Ratte dazu in einen transparenten Zylinder mit 20 Zentimetern Durchmesser und 40 Zentimetern Höhe und lassen Sie sie mindestens 15 Minuten akklimatisieren. Stellen Sie sicher, dass der Boden mit dem Einstreumaterial bedeckt ist und die Spiegel hinter dem Zylinder positioniert sind, um das Tier aus allen möglichen Winkeln zu beobachten.
Positionieren Sie eine hochauflösende Videokamera, um die Anzeige von axialen, gliedrigen und orolingualen abnormalen unwillkürlichen Bewegungen zu ermöglichen. Die Spiegel hinter dem Zylinder ermöglichen es, abnormale unwillkürliche Bewegungen in einem 360-Grad-Winkel zu verfolgen. Die Kamera kann in einem 15-Grad-Winkel von Tieren leicht unter dem Flugzeug positioniert werden, um orolinguale abnormale unwillkürliche Bewegungen zu beobachten.
Wenn die Position festgelegt ist, befestigen Sie die Kamera direkt an der Bank. Sobald das Tier für 15 Minuten akklimatisiert ist, nehmen Sie das Tier aus dem Zylinder und verabreichen Sie fünf Milligramm pro Kilogramm frisch zubereitetes L-Dopamin oder L-DOPA kombiniert mit 12,5 Milligramm pro Kilogramm Benserazid, subkutan. Setzen Sie das Tier zurück in den Zylinder und starten Sie einen Timer, um abnormale unwillkürliche Bewegungen zu verfolgen.
Verwenden Sie eine Videokamera, um die abnormalen unwillkürlichen Bewegungen 180 Minuten nach der Injektion in 30-Minuten-Intervallen aufzuzeichnen, um eine Offline-Bewertung durchzuführen. Nach den sechs Beobachtungsperioden müssen die Scores über ein bis zwei Minuten Epochen angegeben und als axial, gliederisch oder orolingual klassifiziert werden. Stellen Sie sicher, dass Sie keine normalen Verhaltensweisen einbeziehen.
Die Behandlung mit L-DOPA und Benzerazid sollte drei Wochen lang einmal täglich von Montag bis Freitag fortgesetzt werden. In der repräsentativen Zeitverlaufsanalyse werden die Werte für axiale, gliedmaßen- und orolinguale abnormale unwillkürliche Bewegungen über drei Wochen chronischer L-DOPA-Verabreichung gezeigt. Es wurde festgestellt, dass L-DOPA-induzierte, hochdosierte Dyskinesien zwischen 30 und 90 Minuten auftreten, mit einer allmählichen Abnahme nach 120 Minuten nach der Injektion.
Darüber hinaus wurde die Summe der axialen, gliedmaßenartigen und orolingualen abnormalen unwillkürlichen Bewegungen an Individuen präsentiert, die Tage und wöchentlich über drei Wochen chronischer L-DOPA-Verabreichung bewerteten. Das Protokoll für abnorme unwillkürliche Bewegungen dient in der Regel der Untersuchung neuer therapeutischer Instrumente mit antidyskinetischem translationalem Potenzial.
