Unser Protokoll bietet eine detaillierte Methode für eine zuverlässige Induktion und umfassende Bewertung der Levodopa-induzierten Dyskinesie in einem Rattenmodell der Parkinson-Krankheit. Der Hauptvorteil unserer Dyskinesie-Bewertungsskala besteht darin, dass sie eine Quantifizierung sowohl der Intensität einer bestimmten abnormalen unwillkürlichen Bewegung als auch der Zeit, die damit verbracht wird, dieses Verhalten zu zeigen, ermöglicht. Zuverlässige Tiermodelle der Levodopa-induzierten Dyskinesie sind entscheidend für die Verwirklichung des Endziels, wirksame Behandlungen zu finden, um die Nebenwirkungen bei Menschen mit Parkinson-Krankheit zu reduzieren oder zu beseitigen.
Beginnen Sie mit der Vorbereitung auf das Experiment, indem Sie die Ratten wöchentlich wiegen, um die geeignete Arzneimittelmenge basierend auf den Gewichtsänderungen zu berechnen. Versorgen Sie die Ratten mit ernährungsphysiologisch vollständigen und sehr schmackhaften Leckereien. Am ersten Tag der L-DOPA-Behandlung werden die Ratten in ein einzelnes Gehäuse gebracht, das mit einer institutionellen Anreicherung des Animal Care and Use Committee ausgestattet ist.
Und halten Sie Ratten während der gesamten Studie im Einzelgehäuse, um Peer-Interferenzen mit den Verhaltensbewertungen zu vermeiden. Entfernen Sie an den Dyskinesie-Bewertungstagen Wasserflaschen, Lebensmittelregale und die Anreicherung im Käfig, um Interferenzen mit den Verhaltensbewertungen zu vermeiden, und stellen Sie die Käfige in einem Winkel von etwa 45 Grad auf ein Stahldrahtgestell, dann drehen Sie die Identifikationsetiketten nach oben. Vor der L-DOPA-Injektion das entsprechende Volumen steriler Kochsalzlösung in die vorgewogene lyophilisierte L-DOPA- und Benserazidmischung in der bernsteinfarbenen Durchstechflasche geben und 10 Sekunden lang gut schütteln.
Füllen Sie unmittelbar nach der Zubereitung das erforderliche Volumen der L-DOPA-Benserazid-Mischung für jedes Tier in einzelne Spritzen, die mit einer 26-Gauge-Nadel montiert sind, und kennzeichnen Sie jede Spritze mit einer individuellen Tierkennzeichnung. Nachdem Sie den ersten Käfig auf die Injektionsbank gebracht haben, entfernen Sie die Ratte aus ihrem Käfig, um sie auf die Injektionsoberfläche zu legen. Verwenden Sie die nicht dominante Hand, um den Kopf und die Schultern der Ratte mit der Handfläche gegen die Oberfläche zu halten und die Haut auf dem Rücken, die über den Schulterblättern liegt, mit Daumen und Zeigefinger zu zerquetschen.
Verwenden Sie die dominante Hand, um L-DOPA-Volumen in den subkutanen Raum zwischen den Fingern zu injizieren, und halten Sie die Nadel parallel zum Körper, um eine intramuskuläre Injektion zu vermeiden. Bewegen Sie die Ratte nach der Injektion in den Käfig. Stellen Sie als Nächstes den Timer auf ein bis zwei Minuten ein und wiederholen Sie den Vorgang, indem Sie alle ein bis zwei Minuten eine Ratte injizieren, bis alle Ratten injiziert sind.
Positionieren Sie am Bewertungstag einen Timer neben dem Käfig, um Levodopa-induzierte Dyskinesie oder LID-Verhaltensintensität zu beobachten, während Sie die Häufigkeit eines bestimmten Verhaltens während des Bewertungszeitraums schätzen. Bewerten Sie die Intensität und Häufigkeit der dystonischen und hyperkinetischen Dyskinesiebewegungen, einschließlich des anfänglichen Beginns des LID-Verhaltens, des Spitzenverhaltens und der Phase des Rückgangs zu den gewünschten Zeitpunkten. Wenn Sie Ein-Minuten-Bewertungsintervalle verwenden, stellen Sie einen Timer für eine Minute ein, um die erste Ratte zu bewerten und die Bewertung durch alle Ratten in einem Minutentakt fortzusetzen.
Die LID-Bewertung für abnormale unwillkürliche Verhaltensweisen bei Parkinson-Ratten wurde kategorisiert, um Intensität und Häufigkeit der Verhaltensweisen einzubeziehen. Eine Reihe von abnormalen unwillkürlichen Bewegungen, einschließlich dystonischer, hyperkinetischer und stereotyper Verhaltensweisen, wurden bei Ratten beobachtet. Die repräsentative Analyse liefert ein Beispiel für die Daten, die als Spitzendosis-LID über den gesamten experimentellen Zeitplan und das Dosierungsschema präsentiert werden.
Der Spitzendosis-LID wurde als eine Zeit definiert, in der der durchschnittliche LID-Wert der Gruppe am höchsten war. Zusätzlich wurden die LID-Ratingdaten über jeden täglichen Bewertungszeitverlauf bei verschiedenen L-DPOA-Konzentrationen untersucht, wobei die Gruppen kombiniert und als einzelne Tiere dargestellt wurden. Postmortales Gewebe von verhaltensorientierten Probanden kann verwendet werden, um molekulare Mechanismen zu untersuchen, die mit Levodopa-induzierten Dyskinesies assoziiert sind, und die Auswirkungen therapeutischer Interventionen auf solche molekularen Mechanismen.
Tiermodelle der Levodopa-induzierten Dyskinesie waren nützlich, um mehrere Mechanismen aufzuklären, von denen angenommen wird, dass sie dieser Verhaltenskrankheit zugrunde liegen. Ein solches Verständnis hat zu einer präklinischen und klinischen Bewertung mehrerer Ziele geführt.
