Dieses Protokoll ist das erste, das beschreibt, wie Therapeutika effektiv einem ganzen Herzallotransplantat im großen Tiermodell der Herztransplantation verabreicht werden können. Der Hauptvorteil dieses Protokolls besteht darin, dass es den Prüfärzten ermöglicht, die Auswirkungen eines Therapeutikums auf ein ganzes kardiales Allotransplantat über einen längeren Zeitraum nach der Transplantation zu testen. Diese Technik kann verwendet werden, um Interventionen zu untersuchen, die die Abstoßung des Herzallotransplantats, die primäre Transplantatdysfunktion verhindern, die Notwendigkeit einer postoperativen Immunsuppression minimieren oder die Lebensdauer eines kardialen Allotransplantats verlängern.
Die Optimierung der Exposition ist der schwierigste Teil des Transplantationsverfahrens und erfordert mehrere Teammitglieder. Ebenso werden erfahrene Perfusionisten benötigt, um die Ex-vivo-Perfusion zu koordinieren und zu überwachen. Um zu beginnen, machen Sie einen 20 bis 30 Zentimeter langen Schnitt mit der Nummer 10 Klinge vom Manubrium bis zum Xiphoid, abhängig von der Größe des Schweins.
Verwenden Sie Elektrokauterisation, um die Pectoralis major vom Brustbein bis zum Xiphoid zu teilen, wobei Sie darauf achten, sich entlang der Mittellinie des Brustbeins zu teilen. Sobald Sie zum Brustbein hinuntergegangen sind, ritzen Sie die Mittellinie ab und beginnen Sie die Sternotomie vom Xiphoid aus, indem Sie sie mit einer schweren Schere teilen. Dann verlängern Sie die Sternotomie-Cephalade nach jedem Schnitt.
Trennen Sie das Herz stumpf vom Brustbein mit Fingerstreichern und vervollständigen Sie die Sternotomie durch das Manubrium. Nachdem Sie die chirurgische Feldexposition mit einem Sternalretraktor optimiert haben, identifizieren und entfernen Sie den Thymus mit Elektrokauterisation, indem Sie das Perikard längs vom Zwerchfell zur Aorta eingeben und eine Perikardwiege mit Seidennähten erstellen. Teilen Sie das Gewebe vollständig zwischen der Aorta und der Lungenarterie auf und visualisieren Sie die Lage des Aortenbogens und des brachyzephalen Stammes, um die richtige Platzierung der Aortenkreuzklemme zu erleichtern.
Befreien Sie mit einer Schere und stumpfer Dissektion die obere Hohlvene und binden Sie zwei Seidennähte der Größe Null um die obere Hohlvene. Tragen Sie die Polypropylennaht der Größe 4-0 auf die aufsteigende Aorta in U-Stich-Manier und auf den rechten Atrium in einer Handtuch-String-Weise auf. Setzen Sie eine pädiatrische Aortenwurzelkanüle ein, die durch den zuvor platzierten U-Stich gesichert ist.
Und dann, nachdem Sie die Kanüle entlüftet haben, mit einem Rummel-Tourniquet an Ort und Stelle sichern. Verbinden Sie die Aortenwurzelkanüle mit dem Kardioplegieschlauch, nachdem der Schlauch mit del Nido-Kardioplegie gespült wurde. Erstellen Sie eine richtige Atriotomie innerhalb der zuvor platzierten Geldbörse.
Eine venöse Kanüle in den rechten Vorhof einführen und mit einem Rummel-Tourniquet sichern. Verbinden Sie die venöse Kanüle mit einer sterilen Saugleitung, die mit der Zellretter-Kardiotomie verbunden ist, und sammeln Sie etwa 1 bis 1,3 Liter Blut. Wenden Sie dann die Aortenkreuzklemme an und stellen Sie vorsichtig sicher, dass die Klemme die aufsteigende Aorta vollständig verdeckt.
Nachdem Sie sterilen Eismatsch auf das Herz gelegt haben, teilen Sie die untere und obere Hohlvene nur proximal zur Vene azygos. Die Aorta auf Höhe des Bogens ist gerade distal zur innominaten Arterie und der Hauptlungenarterie an der Bifurkation. Identifizieren und ligrieren Sie die Lungenvenen, entfernen Sie dann das Herz aus der Brust und legen Sie es in einen Behälter mit sterilem Eis.
Um die Aorta für die Platzierung des Aortenverbinders vorzubereiten, legen Sie vier verpfändete Polypropylennähte der Größe 4-0 in einer einfachen horizontalen Matratzenweise um die Innenseite der distalen Aorta in einer Tiefe von fünf Millimetern unterhalb der Schnittkante und binden Sie sie dann fest. Während Sie die verpfändeten Aortennähte hochhalten, führen Sie den Aortenverbinder in die Aorta ein und binden Sie ein Nabelband um die Aorta, um den Anschluss zu sichern. Legen Sie eine Polypropylen-Ringschnur der Größe 4-0 um die distale Schnittkante der Hauptlungenarterie.
Führen Sie die Kanüle der Lungenarterie ein und binden Sie die Enden der Ringschnur fest, um die Kanüle zu sichern. Verbinden Sie dann die Kanüle der Lungenarterie mit dem Lungenarterienverbinder am Gerät und sichern Sie sie mit der Krawatte. Nehmen Sie das vorbereitete Transplantat vom hinteren Tisch zum Ex-vivo-Perfusionsgerät und verbinden Sie den Aortenverbinder mit der Gerätestelle.
Die linke Ventrikelentlüftung fließt durch die ungebundene Lungenvene in den linken Vorhof und über die Mitralklappe in den linken Ventrikel. Machen Sie mit der Klinge Nummer 10 einen 20 bis 30 Zentimeter langen Hautschnitt und setzen Sie dann die Dissektion bis zur Faszie mit Elektrokauterisation fort. Nachdem Sie Faszie und Peritoneum mit zwei Kocher-Klemmen angehoben haben, machen Sie vorsichtig einen kleinen Schnitt in die Peritonealhöhle mit der Metzenbaum-Schere.
Verlängern Sie die Peritonealöffnung für die gesamte Länge des Einschnitts mit Elektrokauterisation. Legen Sie einen Finger darunter, um die darunter liegenden Eingeweide zu schützen. Platzieren Sie einen Balfour-Retraktor, um die Exposition zu optimieren, und ziehen Sie sich mit einem nassen Handtuch schädelfest in den Dünndarm zurück.
Tragen Sie die Dissektion bis zur Bauchaorta in der unteren Vena cava und ligrieren Sie dann die Lymphgefäße mit mittleren und großen Clips. Auf dem hinteren Tisch, wenn die Lungenvene linke Atriotomie, wo die linke Ventrikelöffnung eingeführt worden war, übernäht ist, trimmen Sie den distalen Aspekt der Aorta und der Lungenarterie, wo die Befestigung an den Kanülen das Gewebe zerquetscht haben könnte. Legen Sie eine Satinsky-Klemme auf die untere Hohlvene und erstellen Sie mit der Klinge Nummer 11 und der Pottschen eine etwa 1,5 Zentimeter große Längsvenotomie.
Anastomose der Lungenarterientransplantation zur infrarenalen unteren Hohlvene des Empfängers in einer End-to-Side-Art und Weise mit einer laufenden 4-0 Polypropylennaht. Dann anastomosieren Sie das Aortentransplantat mit einer Polypropylennaht in Laufgröße 4-0 zur infrarenalen Aorta des Empfängers in End-to-Side-Manier. Platzieren Sie das Herz vorsichtig in den rechten retroperitonealen Raum, um eine Spannung der Anastomose und ein Knicken der Gefäße zu vermeiden.
Ersetzen Sie dann den Dünndarm. Schließen Sie die Faszie mit der Maxon-Naht der Schleifengröße Null in einer laufenden Art und Weise, beginnend an beiden Enden des Einschnitts und der Bindung in der Mitte, um eine Verletzung des Darms zu vermeiden. Schließen Sie die tiefe Hautschicht mit Vicryl der Größe 2-0 laufend und die Haut mit der Größe 4-0 Monocryl laufend ab.
Es wurden mehrere verschiedene Perfusionsparameter erfasst. Zirkulationsflussraten wurden von der Lungenarterie, der Aorta und den Koronararterien gemessen. Der Aortendruck einschließlich des mittleren Drucks, des systolischen Drucks, des diastolischen Drucks wurde ebenfalls gemessen.
Während der Ex-vivo-Perfusion wurden auch die Herzfrequenz und die Temperatur des Herzallotransplantats gemessen. Während der Perfusionsperiode wurden aus dem Perfusat die gemischte venöse Sauerstoffsättigung und die Hämatokritwerte gemessen. Die Lebensfähigkeit des intrabdominalen heterotopen Herzens in situ 35 Tage deuten auf eine erfolgreiche Transplantation mit diesem Protokoll hin.
Das Wichtigste, woran Sie sich erinnern sollten, ist, einen Standort für das Allotransplantat auszuwählen, der das Potenzial für Spannung und Knicken der Anastomosen minimiert. Durch die Befolgung dieses Verfahrens wird der Prüfarzt in der Lage sein, verschiedene Arten von Therapeutika zu testen, um ihre Auswirkungen auf immunologische Reaktionen gegen das Allotransplantat sowie die Langlebigkeit einer therapeutischen Wirkung auf das Allotransplantat zu bestimmen. Nach der Entwicklung dieses Protokolls war unsere Gruppe in der Lage, verschiedene virale Vektorvehikel für die Genlieferung sowie ein Modell für die akute Allographenabstoßung zu testen, um ein Verständnis der Pathophysiologie der Abstoßung und Wirksamkeit der Genabgabe unter Verwendung viraler Vektoren zu erlangen.
