Dieses Protokoll ist von Bedeutung, da es eine direkte und kostengünstige Methode zur Messung der Skelettmuskeltemperatur bietet. Darüber hinaus kann es in verschiedenen Kontexten und unter der Stimulation von pharmakologischen Wirkstoffen verwendet werden. Der Hauptvorteil dieser Technik ist die Anzahl der Tiere, die gleichzeitig getestet werden können.
Die hier beschriebene minimale Tierstörung vermeidet High-Tech-Methoden wie Infrarot-Thermographie. Einzelpersonen können Schwierigkeiten haben, die Temperatur der Tiere im Hauskäfig oder auf Laufbändern während der Bewegung zu messen. Dies kann durch das Üben von Messtechniken während der Gewöhnungsversuche gemildert werden.
Beginnen Sie mit dem Erwärmen der beiliegenden Transponder zwischen den behandschuhten Händen und achten Sie bei der Arbeit mit Transpondern auf Sterilität. Messen Sie die Temperatur mit einem Temperaturscanner und prüfen Sie, ob der Transponder die Temperaturänderungen liest. Nach der Betäubung der Maus, wie im Manuskript beschrieben, verwenden Sie eine chirurgische Schere, um einen flachen Schnitt durch die Haut an der rechten Hinterbein zu machen.
Legen Sie die scharfe Kante eines vorprogrammierten und ungedeckelten sterilen Transponders parallel zum Gastrocnemius in den Einschnitt. Stellen Sie sicher, dass der grüne Kolben nach oben zeigt und sichtbar ist. Schieben Sie den Transponderapplikator so lange in den Einschnitt, bis die Öffnung des Transponderapplikators nicht mehr sichtbar ist.
Drehen Sie den Applikator um 180 Grad, so dass der grüne Kolben nach unten zum Glied der Maus zeigt und für den Experimentator nicht mehr sichtbar ist. Sobald der Transponderapplikator neben dem Gastrocnemius platziert oder teilweise eingeschlossen ist, drücken Sie den grünen Kolben, so dass der Druck des Applikators die Hand des Prüfers von der Maus wegführen kann. Halten Sie die offene Haut mit einer Pinzette zusammen.
Legen Sie einen Wundclip mit einem sterilen Autoclip und biegen Sie ihn bei Bedarf. Verwenden Sie resorbierbare Nähte vor dem sterilen Autoclip, um die Faszienschicht zu schließen. Überprüfen Sie mit dem Transponderleser die Temperatur des Mausmuskels.
Nachdem Sie die Maus aus der Anästhesie entfernt haben, legen Sie sie in einen sauberen Hauskäfig auf einem Heizkissen und stellen Sie sicher, dass der Heimkäfig einen Teeball mit einem geruchlosen Handtuch enthält, um mit der Gewöhnung zu beginnen. Weisen Sie der Riserkarte im Testraum eine Position zu, und trennen Sie die Riser, die so eingestellt sind, dass sie unterschiedliche kontextuelle Stimuli empfangen, um mindestens zwei Meter, um störende Variablen. Befestigen Sie mit Magnetstreifen chirurgische Folien über dem Steigrohr und schaffen Sie eine visuelle Barriere, um Temperaturschwankungen aufgrund der Mausaktivität als Reaktion auf die Bewegung des Experimentators zu minimieren.
Bereiten Sie Teebällchen mit Kontroll- und Raubtiergeruchstüchern vor. Überführen Sie das Tier in den vorbereiteten Testraum. Platzieren Sie das Tier an einem vorher zugewiesenen Ort auf dem Steiggurt und vermeiden Sie es, den Standort des Steiggurts zwischen Gewöhnungs- und Testverfahren zu ändern.
Entfernen Sie den heimischen Käfigball aus dem Heimatkäfig der Maus. Stellen Sie den Käfig mit einem Tuch oder einer OP-Folie wieder her und lassen Sie die Maus ein bis zwei Stunden an den Testraum gewöhnen. Verwenden Sie nach Abschluss der Akklimatisierung den Scanner, um die Ausgangstemperatur des Motivs zu messen und aufzuzeichnen.
Decken Sie den Käfig auf und legen Sie den Teeball auf den Boden des heimischen Käfigs. Ersetzen Sie den Käfigdeckel und die Stoffabdeckung. Starten Sie die Stoppuhr und messen Sie die Temperaturen der Probanden in der gleichen Reihenfolge der Teeballplatzierung.
Notieren Sie die Temperaturen und die Uhrzeit der Messungen nach den gewünschten Zeitpunkten. Bereiten Sie die Laufbänder für die Tests vor und stellen Sie sicher, dass die Schocker funktionsfähig sind. Stellen Sie sicher, dass die Tiere dasselbe Laufband für Gewöhnungs- und Testverfahren verwenden.
Bewegen Sie die Maus in den Testraum und lassen Sie sie ein bis zwei Stunden in ihrem Heimkäfig akklimatisieren. Bevor Sie die Maus zum Laufband bewegen, messen und notieren Sie die Ausgangstemperatur. Für eine einfache Platzierung und Demontage kleben Sie die Kontroll- oder Raubtiergeruchstücher an der Decke oder unter der Vorderseite des Laufbandes.
Führen Sie die Maus in das zugewiesene Laufband. Schalten Sie den Laufbandgurt und den Schocker ein, starten Sie die Stoppuhr und messen Sie die Testpersonen in der gleichen Reihenfolge, in der sie in den Laufbändern aufgestellt wurden. Notieren Sie die Temperaturen und die Uhrzeit der Messungen nach den gewünschten Zeitpunkten.
Sobald der Test abgeschlossen ist, schalten Sie den Schocker und das Laufband aus und bringen Sie die Maus in ihren Heimatkäfig zurück. Reinigen Sie das Laufband mit flüssigem Reinigungsmittel und Wasser und entfernen Sie Restgeruch von Raubtieren. Wiederholte Gewöhnungsversuche senkten signifikant die Muskeltemperatur von Mäusen und zeigten, dass Mäuse an die Testumgebung und das Protokoll gewöhnt waren.
Die kombinierte Geschlechtsanalyse von Versuch vier zeigte keinen signifikanten Unterschied zwischen Temperaturmessungen vor dem Umzug und Ausgangstemperatur, was die Wirksamkeit einer einstündigen Akklimatisierung an den Testkontext zeigt. Die pharmakologische Stimulation mit Oxytocin bei Mäusen zeigte eine verringerte Muskeltemperatur im Vergleich zum Ausgangswert mit einer maximalen Abnahme nach 30 Minuten. Die Muskeltemperaturen wurden 60 Minuten nach der Oxytocin-Injektion normalisiert.
Ein anhaltender Anstieg der Muskeltemperatur wurde bei Sprague Dawley-Ratten beobachtet, nachdem Raubtiergeruch als kontextuelle Reize entfernt wurde. Sprague Dawley-Ratten zeigten einen robusten Temperaturanstieg als Reaktion auf Frettchengeruch im Vergleich zum Kontrollgeruch. In Gegenwart anderer aversiver Gerüche erzeugt und erhält Frettchengeruch eine robuste thermogene Veränderung im Vergleich zu allen anderen Bedingungen.
Während dieses Verfahrens ist es wichtig, die Tiere an das Testprotokoll zu gewöhnen und ein bis zwei Stunden Akklimatisierung pro Testtag einzuplanen.
