Este protocolo é significativo, pois fornece um método direto e econômico para medir a temperatura do músculo esquelético. Além disso, pode ser usado em vários contextos e sob a estimulação de agentes farmacológicos. A principal vantagem desta técnica é o número de animais que podem ser testados simultaneamente.
A perturbação animal mínima descrita aqui evita a necessidade de métodos de alta tecnologia, como a termografia infravermelha. Os indivíduos podem ter dificuldade em medir a temperatura dos animais dentro da gaiola doméstica ou em esteiras enquanto em movimento. Isso pode ser mitigado pela prática de técnicas de medição durante os ensaios de habituação.
Comece aquecendo os transponders fechados entre as mãos enluvadas e certifique-se de manter a esterilidade, enquanto trabalha com transponders. Meça a temperatura usando um scanner de temperatura e verifique se o transponder lê as mudanças de temperatura. Depois de anestesiar o camundongo, conforme descrito no manuscrito, use uma tesoura cirúrgica para fazer um corte raso através da pele do membro posterior direito.
Coloque a borda afiada de um transponder estéril pré-programado e sem tampa na incisão, paralelamente ao gastrocnêmio. Certifique-se de que o êmbolo verde está virado para cima e visível. Continue empurrando o aplicador do transponder para a incisão até que a abertura do aplicador do transponder não seja mais visível.
Gire o aplicador a 180 graus, de modo que o êmbolo verde fique voltado para baixo em direção ao membro do rato e não seja mais visível para o experimentador. Uma vez que o aplicador do transponder é colocado adjacente ou parcialmente fechado no gastrocnêmio, empurre o êmbolo verde, permitindo que a pressão do aplicador guie a mão do investigador para longe do rato. Usando fórceps, mantenha a pele aberta unida.
Coloque um clipe de ferida com um autoclipe estéril, dobre, se necessário. Use suturas absorvíveis antes do autoclipe estéril para fechar a camada da fáscia. Usando o leitor de transponder, verifique a temperatura do músculo do rato.
Depois de remover o rato da anestesia, coloque-o em uma gaiola doméstica limpa em cima de uma almofada de aquecimento e certifique-se de que a gaiola doméstica inclua uma bola de chá com uma toalha inodora para iniciar a habituação. Atribua um local ao riser na sala de teste e, para evitar variáveis de confusão, separe os risers definidos para receber diferentes estímulos contextuais por um mínimo de dois metros. Usando tiras magnéticas, prenda folhas cirúrgicas através do riser e crie uma barreira visual para minimizar as flutuações de temperatura devido à atividade do rato, em resposta ao movimento do experimentador.
Prepare bolas de chá com toalhas de controle e odor predador. Transfira o animal para a sala de testes preparada. Coloque o animal em um local pré-designado no riser e evite alterar a localização do riser entre os procedimentos de habituação e teste.
Remova a bola da gaiola doméstica da gaiola doméstica do rato. Recupere a gaiola com um pano ou lençol cirúrgico e permita que o rato se acostume ao espaço de ensaio durante uma a duas horas. Após a conclusão da aclimatação, use o scanner para medir e registrar a temperatura de linha de base do sujeito.
Descubra a gaiola e coloque a bola de chá no chão da gaiola doméstica. Substitua a tampa da gaiola e a cobertura do pano. Inicie o cronômetro e meça as temperaturas dos sujeitos do teste na mesma ordem de colocação da bola de chá.
Registre as temperaturas e o tempo do relógio das medições, seguindo os pontos de tempo desejados. Prepare as esteiras para testes, garantindo que os amortecedores estejam funcionais. Certifique-se de que os animais usem a mesma esteira para procedimentos de habituação e teste.
Mova o mouse para a sala de testes e deixe-o se aclimatar por uma a duas horas em sua gaiola doméstica. Antes de mover o mouse para a esteira, meça e registre sua temperatura de linha de base. Para facilitar a colocação e remoção, cole as toalhas de controle ou odor predador no teto ou embaixo da frente da esteira.
Guie o mouse para a esteira atribuída. Ligue a correia da esteira e o amortecedor, ligue o cronômetro e faça medições dos sujeitos de teste na mesma ordem em que foram configurados nas esteiras. Registre as temperaturas e o tempo do relógio das medições, seguindo os pontos de tempo desejados.
Quando o teste estiver concluído, desligue o amortecedor e a esteira e devolva o mouse à gaiola doméstica. Limpe a esteira usando detergente líquido e água e remova qualquer odor residual de predador. Repetidos ensaios de habituação diminuíram significativamente a temperatura muscular dos camundongos, mostrando os ratos habituados ao ambiente e protocolo de teste.
A análise de sexo combinado do ensaio quatro não mostrou diferença significativa entre as medições de temperatura antes do movimento e a linha de base, demonstrando a eficácia da aclimatação de uma hora ao contexto de teste. A estimulação farmacológica usando ocitocina em camundongos mostrou diminuição da temperatura muscular em relação à linha de base, com uma diminuição máxima após 30 minutos. As temperaturas musculares foram normalizadas 60 minutos após a injeção de ocitocina.
Um aumento sustentado na temperatura muscular foi observado em ratos Sprague Dawley, após a remoção do odor do predador como estímulos contextuais. Os ratos Sprague Dawley apresentaram um aumento robusto na temperatura em resposta ao odor de furão, em comparação com o odor de controle. Na presença de outros odores aversivos, o odor de furão produz e mantém uma mudança termogênica robusta em comparação com todas as outras condições.
Ao tentar este procedimento, é fundamental habituar os animais ao protocolo de teste e agendar uma a duas horas de aclimatação a cada dia de teste.
