Questo protocollo è significativo, in quanto fornisce un metodo diretto ed economico per misurare la temperatura del muscolo scheletrico. Inoltre, può essere utilizzato in vari contesti e sotto la stimolazione di agenti farmacologici. Il principale vantaggio di questa tecnica è il numero di animali che possono essere testati contemporaneamente.
Il minimo disturbo animale qui descritto, evita la necessità di metodi high-tech come la termografia a infrarossi. Gli individui possono avere difficoltà a misurare la temperatura degli animali all'interno della gabbia domestica o su tapis roulant mentre sono in movimento. Questo può essere mitigato praticando tecniche di misurazione durante le prove di assuefazione.
Inizia riscaldando i transponder chiusi tra le mani guantate e assicurati di mantenere la sterilità, mentre lavori con i transponder. Misurare la temperatura utilizzando uno scanner di temperatura e verificare se il transponder legge le variazioni di temperatura. Dopo aver anestetizzato il topo come descritto nel manoscritto, utilizzare le forbici chirurgiche per fare un taglio superficiale attraverso la pelle sull'arto posteriore destro.
Posizionare il bordo tagliente di un transponder sterile pre-programmato e non tappato nell'incisione, parallelo al gastrocnemio. Assicurati che lo stantuffo verde sia rivolto verso l'alto e sia visibile. Continuare a spingere l'applicatore del transponder nell'incisione fino a quando l'apertura dell'applicatore del transponder non è più visibile.
Ruotare l'applicatore di 180 gradi, in modo che lo stantuffo verde sia rivolto verso l'arto del topo e non sia più visibile allo sperimentatore. Una volta che l'applicatore del transponder è posizionato adiacente o parzialmente racchiuso nel gastrocnemio, spingere lo stantuffo verde, consentendo alla pressione dell'applicatore di allontanare la mano dello sperimentatore dal mouse. Usando una pinza, tieni insieme la pelle aperta.
Posizionare una clip per ferite con una clip automatica sterile, piegare se necessario. Utilizzare punti di sutura riassorbibili prima dell'autoclip sterile per chiudere lo strato di fascia. Utilizzando il lettore di transponder, controllare la temperatura del muscolo del topo.
Dopo aver rimosso il mouse dall'anestesia, posizionarlo in una gabbia domestica pulita sopra una piastra elettrica e assicurarsi che la gabbia domestica includa una pallina da tè con un asciugamano inodore per iniziare l'assuefazione. Assegnare una posizione al riser nella sala di prova e, per evitare variabili confondenti, separare i riser impostati per ricevere stimoli contestuali diversi di almeno due metri. Utilizzando strisce magnetiche, attaccare fogli chirurgici attraverso il montante e creare una barriera visiva per ridurre al minimo le fluttuazioni di temperatura dovute all'attività del mouse, in risposta al movimento dello sperimentatore.
Preparare palline da tè con asciugamani di controllo e odore predatore. Trasferire l'animale nella sala di prova preparata. Posizionare l'animale in una posizione preassegnata sul montante ed evitare di cambiare la posizione del montante tra le procedure di assuefazione e test.
Rimuovere la palla della gabbia domestica dalla gabbia domestica del mouse. Recuperare la gabbia con un panno o un foglio chirurgico e consentire al topo di acclimatarsi allo spazio di prova per una o due ore. Al termine dell'acclimatazione, utilizzare lo scanner per misurare e registrare la temperatura di base del soggetto.
Scopri la gabbia e posiziona la pallina da tè sul pavimento della gabbia di casa. Riposizionare il coperchio della gabbia e il rivestimento in tessuto. Avviare il cronometro e misurare le temperature dei soggetti del test nello stesso ordine di posizionamento della pallina da tè.
Registrare le temperature e il tempo di clock delle misurazioni, seguendo i punti temporali desiderati. Preparare i tapis roulant per il test, assicurandosi che gli ammortizzatori siano funzionali. Assicurarsi che gli animali utilizzino lo stesso tapis roulant per le procedure di assuefazione e test.
Sposta il mouse nella stanza di prova e consentigli di acclimatarsi per una o due ore nella sua gabbia domestica. Prima di spostare il mouse sul tapis roulant, misurare e registrare la temperatura di base. Per un facile posizionamento e rimozione, far aderire gli asciugamani di controllo o odore predatore al soffitto o sotto la parte anteriore del tapis roulant.
Guida il mouse nel tapis roulant assegnato. Accendi la cintura del tapis roulant e lo shocker, avvia il cronometro e prendi le misure dei soggetti del test nello stesso ordine in cui sono stati installati nei tapis roulant. Registrare le temperature e il tempo di clock delle misurazioni, seguendo i punti temporali desiderati.
Una volta completato il test, spegnere lo shocker e il tapis roulant e riportare il mouse nella sua gabbia di casa. Pulire il tapis roulant con detergente liquido e acqua e rimuovere qualsiasi odore residuo di predatore. Ripetuti studi di assuefazione hanno ridotto significativamente la temperatura muscolare dei topi, mostrando topi abituati all'ambiente e al protocollo di test.
L'analisi combinata del sesso del quarto studio non ha mostrato differenze significative tra le misurazioni della temperatura prima del movimento e quelle al basale, dimostrando l'efficacia dell'acclimatazione di un'ora al contesto del test. La stimolazione farmacologica con ossitocina nei topi ha mostrato una diminuzione della temperatura muscolare rispetto al basale con una diminuzione massima dopo 30 minuti. Le temperature muscolari sono state normalizzate 60 minuti dopo l'iniezione di ossitocina.
Un aumento sostenuto della temperatura muscolare è stato osservato nei ratti Sprague Dawley, dopo aver rimosso l'odore dei predatori come stimoli contestuali. I ratti Sprague Dawley hanno mostrato un robusto aumento della temperatura in risposta all'odore del furetto, rispetto all'odore di controllo. In presenza di altri odori avversivi, l'odore di furetto produce e mantiene un robusto cambiamento termogenico rispetto a tutte le altre condizioni.
Durante il tentativo di questa procedura, è fondamentale abituare gli animali al protocollo di test e programmare da una a due ore di acclimatazione ogni giorno di test.
