このプロトコルは、骨格筋の温度を測定するための直接的かつ費用効果の高い方法を提供するため、重要です。さらに、それは様々な状況においてそして薬理学的物質の刺激下で使用することができる。この技術の主な利点は、同時にテストできる動物の数です。
ここで説明する最小限の動物障害により、赤外線サーモグラフィなどのハイテク手法の必要性を回避できます。個人は、移動中にホームケージ内またはトレッドミルで動物の温度を測定するのが難しい場合があります。これは、慣れ試験中に測定技術を練習することで軽減できます。
手袋をはめた手の間で密閉されたトランスポンダーを温めることから始め、トランスポンダーを使用している間、無菌性を維持するようにしてください。温度スキャナーを使用して温度を測定し、トランスポンダが温度変化を読み取るかどうかを確認します。原稿に記載されているようにマウスに麻酔をかけた後、外科用ハサミを使用して右後肢の皮膚を浅く切り込みます。
事前にプログラムされ、キャップされていない滅菌トランスポンダーの鋭いエッジを、腓腹筋と平行に切開部に配置します。緑色のプランジャーが上を向いていて見えることを確認してください。トランスポンダーアプリケーターの開口部が見えなくなるまで、トランスポンダーアプリケーターを切開部に押し込み続けます。
アプリケーターを180度回転させて、緑色のプランジャーがマウスの手足に向かって下を向いており、実験者からは見えなくなります。トランスポンダーアプリケーターが腓腹筋に隣接して配置されるか、部分的に囲まれたら、緑色のプランジャーを押して、アプリケーターの圧力が研究者の手をマウスから遠ざけるようにします。鉗子を使用して、開いた皮膚を一緒に保持します。
滅菌オートクリップで傷ついたクリップを置き、必要に応じて曲げます。筋膜層を閉じるために滅菌オートクリップの前に吸収性縫合糸を使用してください。トランスポンダリーダーを使用して、マウスの筋肉の温度を確認します。
マウスを麻酔から外した後、加熱パッドの上にある清潔なホームケージに入れ、ホームケージに無臭のタオルが付いたティーボールが含まれていることを確認して慣れ始めます。テストルームのライザーに場所を割り当て、交絡変数を避けるために、異なるコンテキスト刺激を受信するように設定されたライザーを最低2メートル離します。磁気ストリップを使用して、ライザー全体にサージカルシートを取り付け、実験者の動きに応じてマウスの活動による温度変動を最小限に抑えるための視覚的なバリアを作成します。
コントロールと捕食者の臭いタオルでティーボールを準備します。動物を準備した試験室に移します。動物をライザーの事前に割り当てられた場所に置き、慣れとテストの手順の間でライザーの位置を変更しないでください。
マウスのホームケージからホームケージボールを取り外します。布またはサージカルシートでケージを回収し、マウスを1〜2時間テストスペースに順応させます。順応が完了したら、スキャナーを使用して被験者のベースライン温度を測定して記録します。
ケージのカバーを外し、ティーボールをホームケージの床に置きます。ケージの蓋と布カバーを元に戻します。ストップウォッチを起動し、ティーボールの配置と同じ順序で被験者の温度を測定します。
目的の時点に従って、測定の温度とクロック時間を記録します。テストのためにトレッドミルを準備し、ショッカーが機能していることを確認します。動物が慣れとテストの手順に同じトレッドミルを使用していることを確認してください。
マウスをテストルームに移動し、ホームケージで1〜2時間順応させます。マウスをトレッドミルに移動する前に、ベースライン温度を測定して記録します。簡単に配置および取り外しできるように、コントロールまたは捕食者臭のタオルを天井またはトレッドミルの前面の下に取り付けます。
割り当てられたトレッドミルにマウスを誘導します。トレッドミルベルトとショッカーの電源を入れ、ストップウォッチを起動し、トレッドミルに設置されたのと同じ順序で被験者を測定します。目的の時点に従って、測定値の温度とクロック時間を記録します。
テストが完了したら、ショッカーとトレッドミルの電源を切り、マウスをホームケージに戻します。液体洗剤と水を使用してトレッドミルを清掃し、残留捕食者の臭いを取り除きます。繰り返しの慣れ試験は、マウスの筋肉温度を有意に低下させ、マウスが試験環境とプロトコルに慣れていることを示しました。
試験4の複合性分析では、移動前とベースラインの温度測定値の間に有意差は示されず、テストコンテキストへの1時間の順応の有効性が実証されました。マウスのオキシトシンを使用した薬理学的刺激は、ベースラインと比較して筋肉温度の低下を示し、30分後に最大の減少を示しました。.筋肉温度はオキシトシン注射の60分後に正常化した。
Sprague Dawleyラットでは、文脈刺激として捕食者の臭いを除去した後、筋肉温度の持続的な上昇が観察されました。.Sprague Dawleyラットは、対照臭と比較して、フェレット臭に応答して温度の強い上昇を示した。他の嫌悪臭の存在下では、フェレット臭は他のすべての条件と比較して堅牢な熱発生変化を生成し、維持します。
この手順を試みる間、動物をテストプロトコルに慣れさせ、テストの毎日1〜2時間の順応をスケジュールすることが重要です。
