Daher ist es schwierig, die Rolle der hormonellen Einflüsse von Gebärmutter und Eierstöcken auf die Etablierung einer Schwangerschaft zu trennen, da beide eng miteinander verbunden sind. Dieses Protokoll ermöglicht es uns also, die Gebärmutterbeiträge direkt zu untersuchen. Während einige dieser Techniken wie die Ovariektomie recht invasiv sind, sind sie nach Übung und Training relativ einfach durchzuführen, was sie für Forscher geeignet macht, die neu in Mausmodellen sind.
Diese Methode kann also verwendet werden, um die breitere Regulation der HPG-Achse zu verstehen, da sowohl die Eierstöcke als auch die Gebärmutter eine wichtige Rolle bei der Regulierung dieser Achse spielen. Wenn Sie diese Techniken noch nie angewendet haben, wenden Sie sich an das Tierarztteam Ihres Instituts, um Schulungen und Unterstützung zu erhalten. Tragen Sie zunächst großzügig Augengleitmittel auf eine betäubte Maus auf, indem Sie es sanft auf das Auge tupfen, nachdem Sie einen kleinen Bereich an der Delle unterhalb der Wirbelsäulenbeuge rasiert haben.
Injizieren Sie 0,1 Milliliter Carprofen subkutan in den Genick. Testen Sie, ob das Tier betäubt ist, indem Sie den hinteren Zeh zusammenkneifen und nach einem Reflex suchen. Tragen Sie anschließend Betadine auf die Operationsstelle auf.
Decken Sie es dann mit einem chirurgischen Tuch ab. Ziehen Sie mit einer Rattenzange die Haut an der Wölbung nach oben ab und machen Sie einen fünf Millimeter langen Längsschnitt. Dann wird die Haut mit einer stumpfen Pinzette von der darunter liegenden Muskelschicht weg auf eine Seite in Richtung Niere präpariert.
Identifiziere die Niere, den Eierstock und das Fettpolster der Eierstöcke durch die Muskelwand. Greife und hebe die Muskelschicht mit der Pinzette an. Machen Sie dann mit einer Schere einen 0,5 bis einen Zentimeter langen Schnitt und ziehen Sie das Eierstockpolster mit einer stumpfen Pinzette durch den Einschnitt.
Als nächstes klemmen Sie mit einem gebogenen Nadelhalter unter den Eierstock und den Eileiter am distalen Ende des Gebärmutterhorns und entfernen Sie den Eierstock mit einer Schere. Entfernen Sie nach 30 Sekunden die Klemme und tupfen Sie sie mit steriler Gaze ab. Um den Muskelwandschnitt zu schließen, heben Sie die Spitze des Schnitts mit einer Pinzette an.
Binden Sie dann den Schnitt mit einem Chirurgenknoten unter Verwendung von Seidennähten. Tragen Sie ein paar Tropfen Bupivacain mit einer Ein-Milliliter-Spritze ohne Nadelaufsatz auf und tupfen Sie den Überschuss mit steriler Gaze ab. Nachdem Sie die Ovariektomie auf der anderen Seite in ähnlicher Weise durchgeführt haben, schließen Sie den Hautschnitt, indem Sie die beiden Hautseiten zusammendrücken und ein paar sieben Millimeter dicke chirurgische Clips anbringen, um Raum für Wundschwellungen zu lassen.
Legen Sie alle erforderlichen Geräte auf eine Folie in eine Laminar-Flow- oder Biosicherheitshaube der Klasse II und sterilisieren Sie sie 20 Minuten lang mit UV. Waschen Sie den Silastic-Schlauch in 100%Desinol und lassen Sie ihn in der Haube an der Luft trocknen. Schneiden Sie den Schlauch nach dem Trocknen mit einem Skalpell in ein Zentimeter lange Segmente.
Drücken Sie anschließend etwa 200 Mikroliter Dichtmittel in eine Spritze ohne Kolben. Setzen Sie den Kolben wieder ein und drücken Sie eine kleine Menge Dichtmittel heraus. Tragen Sie das Dichtmittel auf ein Ende des Schlauchs auf und glätten Sie es mit einem behandschuhten Finger.
Und lassen Sie die Versiegelung über Nacht oder unter UV-Licht 30 Minuten in der Haube trocknen. Als nächstes gießen Sie Progesteronpulver in eine sterilisierte Petrischale. Schöpfen Sie das Pulver mit Hilfe einer Pinzette in Pellets.
Klopfen Sie das versiegelte Ende des Pellets auf die Haubenoberfläche, um das Pulver zu kondensieren. Dann das offene Ende mit dem Dichtmittel verschließen. Wickeln Sie die Petrischale mit den Pellets in Folie ein, um sie vor Licht zu schützen.
Etwa 72 Stunden vor dem subkutanen Einsetzen aktivieren Sie die Pellets, indem Sie sie in holzkohleabgestreiftem FCS inkubieren. Dr. Fiona Cousins, eine Nachwuchswissenschaftlerin des Hudson Institute of Medical Research, demonstriert dieses Verfahren. Nach der hormonellen Vorbereitung der Tiere mit subkutanen Östradiolinjektionen werden die Tiere zwei Tage vor der künstlichen Dezidualisierung mit subkutanen Progesteronpellets vorbereitet.
Betäuben Sie die Maus vor der Operation und testen Sie die Narkosetiefe, indem Sie den Zehenquetschreflex überprüfen. Legen Sie die Maus dann in eine Bauchlage, heben Sie ihren Schwanz an und führen Sie langsam ein sechs Millimeter großes Spekulum in ihre Vagina ein. Platzieren Sie den Unterkörper der Maus zwischen den ersten beiden Fingern der nicht dominanten Hand.
Drücken Sie dann mit dem Zeigefinger den Schwanz sanft nach oben, um eine bessere vaginale Zugänglichkeit zu ermöglichen. Übertragen Sie 20 Mikroliter Sesamöl in eine nicht-chirurgische Embryotransferspitze und führen Sie die Spitze durch die Vagina und den Gebärmutterhals in das Gebärmutterhorn ein. Stoße das Öl langsam aus.
Wenn Sie fertig sind, entfernen Sie das Spekulum aus der Vagina. In dieser Studie wurden 80 % der Mäuse einer erfolgreichen Dezidualisierung unterzogen, während dies bei 20 % nicht der Fall war. Daher ist es wichtig, dass Sie alle Ihre chirurgischen Geräte und Arbeitsbereiche steril halten und Patienten haben, wenn Sie das NSAR-Gerät durch den Gebärmutterhals in das Gebärmutterhorn der Maus einführen.
Nach der Induktion einer künstlichen Dezidualisierung kann der Progesteron-Gaumen entfernt werden, um die Menstruation nachzuahmen und den Abbau des Endometriums zu untersuchen. Mit dieser Methode können wir die Biologie und Regulation der Gebärmutter unabhängig vom Einfluss der Eierstöcke untersuchen. Das ist wirklich spannend im Bereich der Fruchtbarkeit und der Frauengesundheit im Allgemeinen.
