Diagnóstico rápido basado en la reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa (qPCR) de la infección por Helicobacter pylori y la resistencia a los antibióticos

Resumen

El protocolo presenta un método no invasivo para el diagnóstico rápido de infecciones estomacales por Helicobacter pylori a través de la prueba de cadena y determina su resistencia a antibióticos a claritromicina y levofloxacino mediante reacción cuantitativa en cadena de la polimerasa (qPCR).

Resumen

Helicobacter pylori es un importante patógeno humano que infecta aproximadamente a la mitad de la población mundial y se está convirtiendo en una grave amenaza para la salud debido a su creciente resistencia a los antibióticos. Es el agente causal de la gastritis crónica activa, la enfermedad de úlcera péptica y el cáncer gástrico y ha sido clasificado como un carcinógeno del Grupo I por la Agencia Internacional para la Investigación del Cáncer. Por lo tanto, el diagnóstico rápido y preciso de H. pylori y la determinación de su resistencia a los antibióticos son importantes para la erradicación eficiente de este patógeno bacteriano. Actualmente, los métodos de diagnóstico de H. pylori incluyen principalmente la prueba de aliento con urea (UBT), la prueba de antígenos, la prueba de anticuerpos séricos, la gastroscopia, la prueba rápida de ureasa (RUT) y el cultivo bacteriano. Entre ellos, los tres primeros métodos de detección no son invasivos, lo que significa que son pruebas fáciles de realizar. Sin embargo, las bacterias no se pueden recuperar a través de estas técnicas; Por lo tanto, no se pueden realizar pruebas de resistencia a los medicamentos. Los últimos tres son exámenes invasivos, pero son costosos, requieren altas habilidades y tienen el potencial de causar daño a los pacientes. Por lo tanto, un método no invasivo, rápido y simultáneo para la detección de H. pylori y las pruebas de resistencia a los medicamentos es muy importante para erradicar eficientemente H. pylori en la práctica clínica . Este protocolo tiene como objetivo presentar un procedimiento específico que involucra la prueba de cuerdas en combinación con la reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa (qPCR) para la detección rápida de la infección por H. pylori y la resistencia a los antibióticos. A diferencia de los cultivos bacterianos, este método permite un diagnóstico fácil, rápido y no invasivo del estado de infección por H. pylori y la resistencia a los medicamentos. Específicamente, utilizamos qPCR para detectar rea para la infección por H. pylori y mutaciones en los genes 23S rRNA y gyrA , que codifican resistencia contra claritromicina y levofloxacino, respectivamente. En comparación con las técnicas de cultivo utilizadas de forma rutinaria, este protocolo proporciona una técnica no invasiva, de bajo costo y que ahorra tiempo para detectar la infección por H. pylori y determinar su resistencia a los antibióticos mediante qPCR.

Introducción

H. pylori es una bacteria gramnegativa, en forma de espiral, altamente móvil, que vive principalmente en la región del píloro del estómago¹. Es un patógeno común que infecta a casi el 50% de la población mundial². La mayoría de las personas con infección por H. pylori no tienen manifestaciones clínicas, y la mayoría desarrolla diferentes enfermedades después de varios años de infección, incluyendo gastritis crónica, úlceras pépticas, úlceras gástricas y cáncer gástrico³. En varios estudios basados en diferentes poblaciones, se ha demostrado la eficacia de la eliminación de H.....

Protocolo

El presente estudio se realizó de conformidad con las consideraciones éticas establecidas por el comité ético del Hospital Popular Provincial de Guangdong, Universidad Médica del Sur, Guangzhou, China (Número de aprobación: KY-Q-2022-384-02). Los pacientes en el rango de edad de 18-60 años fueron incluidos en este estudio. Los pacientes que tomaron antibióticos, medicamentos chinos antibacterianos, medicamentos como inhibidores de la bomba de protones (IBP) o antagonistas de los receptores_H2 , etc., dentro de las 2 semanas anteriores a la prueba no se incluyeron en este estudio. Aquellos pacientes que habían recibido tratamiento contra H. pylori en....

Discusión

La detección de H. pylori se puede realizar utilizando métodos invasivos y no invasivos¹³. Las técnicas invasivas comúnmente utilizadas, como la histopatología, la prueba rápida de ureasa, la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) y el cultivo bacteriano requieren endoscopia y biopsia. Entre los procedimientos no invasivos se recomiendan pruebas serológicas, pruebas de aliento con urea y ensayos inmunoabsorbentes ligados a enzimas (ELISA)¹⁴. Si bien los .......

Materiales

Name	Company	Catalog Number	Comments
23S rRNA and gyrA gene point mutations detection kit (PCR-Fluorescence Probing)	Hongmed Infagen		Detection of Helicobacter pylori resistance to clarithromycin and levofloxacin
ABI 7500 fluorescence quantitative PCR machine	Thermo Fisher Scientific	SEDA 20163220767	Fluorescent quantitative PCR amplification
ABI 7500 software	Thermo Fisher Scientific		Data Analysis
BSC-1500IIA2-X	BIOBASE	SEDA 20143222263	Biosafety cabinet
DNA extraction kit	Daan Gene
E-Centrifuge	WEALTEC		Centrifuge the residual liquid off the wall of the tube.
H. Pylori DNA detection kit (PCR-Fluorescence Probing)	Hongmed Infagen		Testing for H. pylori infection
Stream SP96 automated nucleic acid extractor	Daan Gene	SEDA 20140104	For DNA extraction
String test kit	Hongmed Infagen		It contains a capsule attached to a string, scissors, cotton swab, and sample preservation tube
Ultra-low temperature freezers (DW-YL450)	MELING	SEDA 20172220091	-20 °C for storing reagents
Vortex-5	Kylin-bell		For mixing reagent