Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.

В этой статье

  • Резюме
  • Аннотация
  • Введение
  • протокол
  • Результаты
  • Обсуждение
  • Раскрытие информации
  • Благодарности
  • Материалы
  • Ссылки
  • Перепечатки и разрешения

Резюме

В протоколе представлен неинвазивный метод экспресс-диагностики инфекций желудка Helicobacter pylori с помощью струнного теста и определения его антибиотикорезистентности к кларитромицину и левофлоксацину с помощью количественной полимеразной цепной реакции (кПЦР).

Аннотация

Helicobacter pylori является основным патогеном человека, который заражает примерно половину населения мира и становится серьезной угрозой для здоровья из-за растущей устойчивости к антибиотикам. Он является возбудителем хронического активного гастрита, язвенной болезни и рака желудка и был классифицирован Международным агентством по изучению рака как канцероген I группы. Поэтому быстрая и точная диагностика H. pylori и определение его устойчивости к антибиотикам важны для эффективной эрадикации этого бактериального патогена. В настоящее время методы диагностики H. pylori в основном включают дыхательный тест на мочевину (UBT), тест на антиген, тест на антитела в сыворотке, гастроскопию, экспресс-тест на уреазу (RUT) и бактериальный посев. Среди них первые три метода обнаружения являются неинвазивными, что означает, что их легко проводить. Однако бактерии не могут быть извлечены с помощью этих методов; Таким образом, тестирование на лекарственную устойчивость не может быть выполнено. Последние три являются инвазивными исследованиями, но они являются дорогостоящими, требуют высоких навыков и могут нанести вред пациентам. Таким образом, неинвазивный, быстрый и одновременный метод обнаружения H. pylori и тестирования лекарственной устойчивости очень важен для эффективной эрадикации H. pylori в клинической практике. Этот протокол направлен на то, чтобы представить конкретную процедуру, включающую струнный тест в сочетании с количественной полимеразной цепной реакцией (кПЦР) для быстрого выявления инфекции H. pylori и устойчивости к антибиотикам. В отличие от бактериальных культур, этот метод позволяет легко, быстро, неинвазивно диагностировать инфекционный статус H. pylori и лекарственную устойчивость. В частности, мы использовали кПЦР для обнаружения инфекции H. pylori и мутаций в генах 23S рРНК и gyrA, которые кодируют резистентность к кларитромицину и левофлоксацину соответственно. По сравнению с обычно используемыми методами культивирования, этот протокол обеспечивает неинвазивный, недорогой и экономящий время метод выявления инфекции H. pylori и определения ее устойчивости к антибиотикам с помощью кПЦР.

Введение

H. pylori представляет собой спиралевидную, высокоподвижную, грамотрицательную бактерию, которая в основном обитает в привратной области желудка1. Это распространенный патоген, который заражает почти 50% населения мира2. Большинство людей с инфекцией H. pylori не имеют клинических проявлений, и у большинства из них после нескольких лет инфекции развиваются различные заболевания, включая хронический гастрит, язвенную болезнь, язву желудка и рак желудка3. В нескольких исследованиях, основанных на различных популяциях, была продемонстрирована эффективность элиминации H. pylori

протокол

Настоящее исследование было проведено в соответствии с этическими соображениями, установленными этическим комитетом Народной больницы провинции Гуандун, Южный медицинский университет, Гуанчжоу, Китай (номер утверждения: KY-Q-2022-384-02). В исследование были включены пациенты в возрасте от 18 до 60 лет. Пациенты, принимающие антибиотики, антибактериальные китайские препараты, такие препараты, как ингибиторы протонной помпы (ИПП) или антагонистыН2-рецепторов и т. д., в течение 2 недель до тестирования, не были включены в это исследование. Те пациенты, которые получали лечение против H.pylori в течение последних 3 месяцев, также были исключены из это....

Результаты

Обнаружение инфекции H. pylori и устойчивости к антибиотикам в желудочной жидкости с помощью кПЦР
Мы провели кПЦР для выявления инфекции H. pylori путем амплификации гена ureA и определили его профиль устойчивости к антибиотикам путем нацеливания на точечные мутации в .......

Обсуждение

Обнаружение H. pylori может быть выполнено как инвазивными, так и неинвазивными методами13. Обычно используемые инвазивные методы, такие как гистопатология, экспресс-тест на уреазу, полимеразная цепная реакция (ПЦР) и культивирование бактерий, требуют эндоскопии и биопсии.......

Раскрытие информации

Никакой.

Благодарности

Эта работа была поддержана Проектом медицины Саньмин в Шэньчжэне (грант No SZSM201510050) и Гуандунский фонд фундаментальных и прикладных фундаментальных исследований (грант No 2022A1515220023). Научно-исследовательский фонд передовых талантов Народной больницы провинции Гуандун (No KJ012021097) и Национальный фонд естественных наук Китая (81871734, 82072380, 82272423). Спонсоры не играли никакой роли в дизайне исследования, сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи.

....

Материалы

NameCompanyCatalog NumberComments
23S rRNA and gyrA gene point mutations detection kit (PCR-Fluorescence Probing)Hongmed InfagenDetection of Helicobacter pylori resistance to clarithromycin and levofloxacin
ABI 7500 fluorescence quantitative PCR machineThermo Fisher ScientificSEDA 20163220767Fluorescent quantitative PCR amplification
ABI 7500 softwareThermo Fisher ScientificData Analysis
BSC-1500IIA2-XBIOBASESEDA 20143222263Biosafety cabinet
DNA extraction kitDaan Gene 
E-CentrifugeWEALTECCentrifuge the residual liquid off the wall of the tube.
H. Pylori DNA detection kit (PCR-Fluorescence Probing) Hongmed InfagenTesting for H. pylori infection
Stream SP96 automated nucleic acid extractorDaan GeneSEDA 20140104For DNA extraction 
String test kitHongmed InfagenIt contains a capsule attached to a string, scissors, cotton swab, and sample preservation tube 
Ultra-low temperature freezers (DW-YL450) MELINGSEDA 20172220091-20 °C for storing reagents 
Vortex-5Kylin-bellFor mixing reagent 

Ссылки

  1. Proença-Modena, J. L., Acrani, G. O., Brocchi, M. Helicobacter pylori: Phenotypes, genotypes and virulence genes. Future Microbiology. 4 (2), 223-240 (2009).
  2. Hussein, R. A., Al-Ouqaili, M. T. S., Majeed, Y. H.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи

Запросить разрешение

Смотреть дополнительные статьи

197Helicobacter pylori

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Исследования

Образование

О JoVE

Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены