Purificación de cromatina del locus del gen de copia única en Saccharomyces cerevisiae

Un núcleo eucariota está muy poblado con muchos procesos biológicos que ocurren simultáneamente. El objetivo de nuestra investigación es comprender cómo se coordinan todos estos procesos en nuestros genomas sin accidentes importantes que, de otro modo, conducirían a la inestabilidad genómica y a enfermedades humanas. Este protocolo nos permite purificar un locus específico del genoma en su estado nativo, permitiendo tanto la caracterización composicional como funcional del material aislado, como las medidas de interacciones proteína-ADN.

Este protocolo permite un enorme nivel de enriquecimiento de un locus específico, lo que supera muchas de las limitaciones actuales del aislamiento de cromatina específico del locus. El material no ha sido reticulado. Esto también permite muchos análisis funcionales posteriores, como la transcripción in vitro o la replicación in vitro.

Este protocolo nos permitió extirpar y purificar distintos orígenes de replicación de los cromosomas de levadura, lo que nos permitió realizar un análisis proteómico e identificar nuevos factores de cromatina que interactúan con el origen y, por lo tanto, avanzar en el campo de investigación de la replicación del ADN. Este protocolo permite realizar estudios de replicación in vitro utilizando el material de origen purificado para examinar los estados de la cromatina, las modificaciones de las histonas y realizar análisis estructurales en las plantillas nucleosómicas nativas de los cromosomas endógenos, lo que permite avanzar en la investigación de la cromatina.