Comience inoculando las cepas de levadura competentes de control y recombinación de las placas de YPD en cinco mililitros de medio YPR, y cultive el cultivo durante la noche a 30 grados Celsius y 200 RPM. A continuación, amplíe el cultivo inoculando dos mililitros en 100 mililitros de medio YPR fresco y cultivándolo durante la noche a 30 grados Celsius y 200 RPM. Para cada cepa, dispensar 1.800 mililitros de medio de peptona de levadura de autoclave y 200 mililitros de solución de rafinosa al 20% de autoclave en dos matraces Erlenmeyer de 5 litros.
Inocular cada cepa de levadura con una densidad óptica de 0,2 a 600 nanómetros en el medio respectivo e incubar durante unas seis horas a 200 RPM, o hasta que las células alcancen la densidad óptica deseada de 1,0. Añadir 200 mililitros de galactosa al 2% y 110 microlitros de factor de apareamiento de levadura alfa o YMFA simultáneamente para detener las células en la fase G1 e incubar durante dos horas. Transfiera la suspensión celular a cubos de centrífuga de un litro y centrifugue el cubo a 6.000 G y cuatro grados centígrados durante 10 minutos.
Deseche el sobrenadante y vuelva a suspender los gránulos celulares en 10 a 15 mililitros de agua destilada. A continuación, selle una jeringa de 25 mililitros con un tapón señuelo y colóquela dentro de un tubo cónico de 50 mililitros lleno de agua. Transfiera la suspensión de la celda al conjunto de la jeringa.
Lave los cubos de la centrífuga con cinco mililitros de agua destilada para recoger las células restantes. A continuación, centrifugar el conjunto a 2.397 G durante 10 minutos a temperatura ambiente y desechar el sobrenadante. A continuación, retire el tapón señuelo de la jeringa y extruya las células en nitrógeno líquido para formar espaguetis celulares.
Por último, transfiera los espaguetis congelados a un tubo cónico de 50 mililitros y guárdelo a menos 80 grados centígrados hasta su uso posterior.
