Extracción de cerebro murino y disección de la zona subventricular (SVZ) para el aislamiento de células madre neurales

Para comenzar la extracción del cerebro del ratón debidamente sacrificado, después de separar la cabeza del resto del cuerpo, exponga el cerebro cortando inicialmente el cráneo a lo largo de la sutura sagital. Con la ayuda de unas pinzas finas, retira los huesos. Tenga cuidado de no dañar el tejido cerebral debajo del cráneo durante este paso.

Con una espátula, extraiga con cuidado el cerebro del cráneo. Colóquelo en una placa de 12 pocillos que contenga solución salina tamponada con fosfato frío de Dulbecco, o DPBS. A continuación, transfiera todo el cerebro a la almohadilla de silicona, donde se llevará a cabo la disección.

Utilice un bisturí para extraer el bulbo olfatorio situado en el extremo rostral del cerebro y el cerebelo situado en la parte mimada, conservando la parte central del cerebro que contiene ambos ventrículos laterales. Luego divida el cerebro a lo largo de la fisura longitudinal en dos hemisferios antes de proceder con la disección de ambos hemisferios por separado. Trabajando con un hemisferio, reoriéntelo de modo que el área medial mire hacia arriba.

Abrir el cerebro a lo largo de la línea del cuerpo calloso, separando la corteza y el cuerpo estriado del hipocampo, el tabique y el diencéfalo, exponiendo así los ventrículos laterales. Extirpar el hipocampo, el tabique y el encéfalo, siguiendo el límite ventral de los ventrículos. A continuación, extirpar el tejido más allá de los extremos rostral y mimoso de la zona subventricular o SVZ, y la corteza, siguiendo el cuerpo calloso.

Incline el pañuelo de modo que la SVZ mire hacia los lados. Extirpe el tejido estriado debajo de la SVZ para obtener una pieza delgada de tejido que contiene las células madre neurales. Guarde ambos SVZ disecados del ratón en una placa de 12 pocillos que contenga DPBS fríos hasta el procesamiento del tejido.