Para empezar, tome hojas de álamo inoculadas con cancro guardadas en bolsas de plástico. Retire con cuidado las películas protectoras de plástico de las hojas y retire suavemente los inoculantes de micelio de las superficies de las hojas. Observe e identifique los patotipos de las hojas de cada clon de álamo examinando la forma y el color de las manchas necróticas.
Luego coloque las hojas en una regla sobre un fondo negro. Fotografía la superficie inferior de las hojas con una cámara o escanéalas con un escáner para obtener imágenes con una resolución de más de 300 puntos por pulgada. Abra las imágenes de las hojas enfermas en el software ImageJ, 1.54G.
Establezca la escala en ImageJ de acuerdo con la regla visible en las imágenes de hojas. A continuación, utilizando la herramienta Varita de la ImagenJ, identifique las lesiones en las hojas y mida el área de cada mancha necrótica. Después de medir todas las manchas necróticas, registre los valores del área y exporte estos valores como una hoja de cálculo para su posterior análisis.
Si las lesiones alrededor de los sitios pares cubiertos de micelio son significativamente más grandes que las que rodean los sitios cubiertos por CAP, clasifíquelos como sitios de enfermedad. Si los sitios pares cubiertos de micelio muestran cambios como el color de la lesión, las estructuras en forma de hifas, los picnidios y los conidios, defina estos como sitios de la enfermedad. Calcule el área promedio de manchas de lesiones efectivas de PDA para cada clon híbrido de álamo.
Divida las manchas inoculadas con micelio en dos categorías, de inicio y no de inicio. A continuación, calcule la tasa de incidencia de la enfermedad de los clones de álamos probados. Calcule el área promedio de las manchas enfermas en las hojas.
Con base en el promedio de áreas de manchas enfermas en todos los clones de álamo analizados, establezca un estándar de clasificación de enfermedades de cinco niveles. Calcule el índice de enfermedad de cada clon de álamo utilizando el estándar de clasificación de enfermedades de cinco niveles. A continuación, utilizando la prueba de Shapiro-Wilk, verifique la distribución normal del número de clones de álamo en diferentes niveles de resistencia.
Con base en el índice de la enfermedad, clasifique todos los clones de álamo analizados en cinco o siete grupos de resistencia. Muy alta resistencia, alta resistencia, resistencia, sin resistencia y sin susceptibilidad, susceptibilidad, alta susceptibilidad y muy alta susceptibilidad. La inoculación del patógeno del cancro del tallo indujo lesiones necróticas, e incluso estructuras similares a picnidios en las hojas de álamo.
Además, la posición de las hojas y las condiciones de luz de las hojas influyen en la gravedad de la enfermedad de las hojas.
