El siguiente experimento introduce un método de inoculación eficaz y muestreo preciso para Phytophthora capsici en plantas de pimienta negra. La pimienta negra, que es una vid leñosa típica, es un cultivo de especias económicamente importante. La producción de pimienta negra se ve afectada principalmente por la enfermedad de la podredumbre de la raíz causada por Phytophthora capsici, y ha influido seriamente en el desarrollo industrial.
Una inoculación efectiva y un sistema de muestreo preciso para Phytophthora capsici en plantas de pimienta negra es importante para el estudio de la interacción planta-patógeno. El objetivo principal de este estudio es demostrar una metodología detallada en la que la cabeza basal de la pimienta negra fue inoculada con Phytophthora capsici, y también proporcionar una referencia para la inoculación de plantas de vid leñosa. Este método proporciona una mejor manera de resolver la inestabilidad provocada por el método de inoculación tradicional, como el empapamiento del suelo o la inmersión de la raíz.
Procedimientos experimentales. Los esquejes de pimientos negros se plantan en el ambiente controlado durante dos meses. Subcultiva la Phytophthora capsici, e incuba durante cinco días por debajo de los 25 grados centígrados.
El día de la infección, los bloques de agar se cubren en los tres orificios pegados por la aguja. Y finalmente, caracterizar los síntomas de la enfermedad. Preparación de plantas de corte de pimienta negra para la infección.
Cortar ramas ortotrópicas en longitudes de 40 centímetros, y 0,5 centímetros de diámetro, y eliminar ramas plagiotrópicas en los ganglios inferiores con cuchillo estéril y secateur. La rama cortada debe contener dos nudos y cinco hojas en la parte superior para reducir la pérdida de agua. Recorte la parte superior a un corte plano y la parte inferior a un corte oblicuo.
El sustrato de enraizamiento del corte de pimienta negra se preparó en una mezcla, que contiene tierra y estiércol animal, como estiércol de vaca, estiércol de oveja, etc., en una proporción de uno a uno. El suelo se autoclavó a unos 121 grados centígrados durante 20 minutos. Utilice las bolsas de cría de 30 centímetros de diámetro y 50 centímetros de altura para colocar los sustratos de enraizamiento.
Prepara una pendiente de 50 grados para rellenar los sustratos. Los esquejes se colocaron en un ángulo de 50 grados, con más de tres nodos por debajo del sustrato. Se cubrieron con el medio de enraizamiento y la parte auxiliar debe adherirse al medio.
Finalmente, los esquejes fueron completamente infiltrados. Se adoptó el corte recto para insertar el corte. Preparación de cultivos de Phytophthora capsici.
Elija papas libres de enfermedades. Limpie las papas y córtelas en cuadrados pequeños. Coloque 200 gramos de papas en 800 mililitros de agua destilada doble y hierva durante 20 minutos.
Luego filtre la mezcla. Añadir 20 gramos de dextrosa. Llene la mezcla a un litro con agua destilada doble.
Añadir 15 gramos de polvo de agar en el filtrado. Dispensar el medio en matraces y sellar con Parafilm. Autoclave el medio a 121 grados centígrados durante 20 minutos.
El medio calculado de agar de papa se dispensó en las placas de Petri y se enfrió en el banco estéril para su solidificación. La aguja de inoculación se desinfectó calentando con una lámpara de combustión de alcohol y enfriándola durante varios segundos. Tome pequeños trozos de muestras de hongos utilizando inoculación estéril y colóquelos en PDA.
El micelio cubre aproximadamente tres cuartas partes de la placa. Las culturas están listas para seguir experimentando. Infección de pimientos negros.
La ubicación de cinco centímetros de distancia de la superficie del sustrato se consideró como el punto de incubación. La ubicación de incubación no debe estar lejos de la raíz, con el objetivo de evitar prolongar el tiempo infeccioso. Los pasos detallados de pinchazo son los siguientes.
Se recogió una bolita de micelio de Phytophthora capsici utilizando un barrenador tapón. En particular, los gránulos de micelio recientemente desarrollados en el borde de la placa se seleccionaron preferentemente debido a sus mayores actividades infecciosas. Esterilizar un tallo con etanol al 75% y tomar tres poros triangulares en la posición esterilizada con la aguja de inoculación.
Tres poros triangulares en el lugar de la inoculación se clavaron con la aguja de inoculación, y se cubrieron gránulos de micelio en los tres poros. Después de ocho horas, los poros se volvieron negros en general. La dilatación se amplió con la prolongación de la incubación.
Después de siete a diez días, las hojas se volvieron amarillas y se cayeron, hasta que la pimienta negra murió. Los resultados presentativos son los siguientes. Después de la infección, los síntomas aparecen en las plantas de pimienta negra, incluyendo el amarilleo y marchitamiento de las hojas, el pardeamiento del xilema y el ennegrecimiento de los vasos.
La mayoría de los genes se expresaron de manera diferente después de la inoculación con Phytophthora capsici, en comparación con el grupo control. El análisis histopatológico de tejidos infectados ha demostrado phytophthora capsici colonizado en el xilema. Conclusión. En este estudio, se utilizó el pinchazo de la cabeza basal para dañarla para proporcionar una inoculación efectiva, y el sistema de duplicación en la pimienta negra.
Mientras tanto, este protocolo también representa una forma más eficiente de proporcionar una referencia para incubar con-Nuestro método puede dar más tiempo y operar más brevemente. Este protocolo proporciona un mejor resultado, lo que permite una fuerte interacción entre una planta y el patógeno transmitido por el suelo. Que es visible y conveniente para detectar el proceso dinámico entre las plantas y sus patógenos.
En nuestro método que empezamos a pinchar la cabeza basal de la planta de pimienta negra para que se dañe. Luego, el área dañada se cubre con Phytophthora capsici directamente y se mantiene la humedad. Para que el patógeno pudiera infectar la planta.
También proporcionamos una forma prometedora para el estudio del modo de acción entre las plantas y otros patógenos de plantas transmitidos por el suelo en el mejoramiento agrícola de precisión.
