Este trabajo fue financiado en parte por el Premio de Ciencias de la Educación Asociación (SEPA) R25 RR025066 entre 2008-2012 de los Institutos Nacionales de Salud y el Centro Nacional de Recursos para investigación. Gracias a los colegas en el campo gusto por la discusión seria de la literatura, los resultados y la retroalimentación sobre el uso de DPP en varios escenarios de laboratorio: John Hayes, Sue Coldwell, Paul Breslin, Carla Schubert. Gracias también al liderazgo en el Museo de Denver de Naturaleza y Ciencia y el personal de apoyo a la ciencia ciudadana dentro de la Genética del Laboratorio Taste dentro de la Expedición de la Salud. Por último, gracias a todos nuestros ciudadanos científicos voluntarios por su tiempo y dedicación al desarrollo y el uso de este protocolo, incluyendo: Oso de Aragón, Mike Archer, Su Ataman, Michael Bagley, A&#39;nette Bertrand, Diana Boyles, Wendy Covert, Sasha Dooley , Patty Drever, Jessica Ern, Laura Harmacek, Sean Hibbard, Joyce Hutchens, Matt Joo, Leta Keane, Willem Leenhouts, Stephania Lukjan, Ashley Matthews, Mike Mauser, Stephanie Miller, Hallie Morgan-Rodríguez, Griffin Scherma, Alyssa Schickedanz, Terri Simon, Dylan Thomas, Rudy Torres, Tyler Wilson, Diane Woltkamp.

Las imágenes anotados en este estudio fueron recolectados como parte de un estudio más grande realizado en el gusto la Genética del Laboratorio de Sabor en el Museo de Denver de Naturaleza y Ciencia (Museo) 10. Los sujetos del estudio fueron los visitantes del museo más grande (n = 1195) de edades comprendidas entre 18 a 93. Mientras los sujetos procedían de seis de los siete continentes, los participantes fueron principalmente de origen europeo. Los datos de cada sujeto se recogieron en una sesión de laboratorio 30 min. La Junta de Revisión Institucional Occidental aprobó el protocolo, se le dio el consentimiento informado por escrito, y los sujetos se ofreció voluntariamente su tiempo y no fueron compensados ​​por su participación en el estudio. 1. Recolección de Datos <ol><li> Captura de imagen <ol><li> Mostrar somete una fotografía de cómo posar sí mismos (Figura 1) y lo que la imagen capturada se verá así. <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/52860/52860fig1.jpg" /> Figura 1: Captura de imagen Pose. </strong&gt; Esta es la fotografía se muestra a los sujetos en el laboratorio se puso en orden para plantear correctamente para su foto de la lengua. </li><li> Sujetos directos se sequen su lengua con una toalla de papel a mano y dejar la lengua fuera de la boca. </li><li> Aplicar aproximadamente 3 ml de colorante alimenticio azul a una concentración 01:36 hasta el ápice de la lengua usando un aplicador estéril de rayón con una punta de 1 pulgada. Haga que los sujetos regresen lengua a la boca y tragar para eliminar el exceso de tinte. </li><li> Tener temas plantean a sí mismos como se muestra en la Figura 1, con la barbilla en las manos y los codos apoyados en la mesa para la estabilidad. Sujetos directos para extender su lengua una distancia cómoda y segura suavemente entre los dientes. </li><li> Adherir una pieza de 2,5 cm de papel de filtro con un diámetro recorte circular 10 mm perforado en ella a la punta de la parte anterior del lado izquierdo de la lengua al lado de la línea media (véase la Figura 1). </li><li> Tomar por lo menos tres imágenes en primer plano de la lengua, capturing todo el recorte circular de 10 mm para asegurar la visualización de toda la FP dentro de esa área. Utilice el ajuste macro de un punto y disparar la cámara digital de alta calidad montada en un trípode para la estabilidad. <ol><li> Acercar la medida en que todo el recorte es fotografiado mientras que aún dentro del rango de zoom recomendado de la cámara. Asegúrese de que el plano de la lente de la cámara es paralelo al plano de la lengua y de que el recorte circular aparece en la foto en lugar de oblonga. Revise las fotos para asegurarse de que son de alta calidad y útil para contar. </li></ol></li></ol></li><li> Selección de imagen y Preparación <ol><li> Sube las fotos al ordenador. </li><li> De las imágenes tomadas de la lengua del mismo tema, seleccionar sólo una para su posterior análisis en base a una definición clara entre las estructuras de la lengua en el más alto del zoom y el ángulo menos distorsionada por lo que la lengua es ancha y plana hacia la cámara. </li><li> Abre la imagen en bruto seleccionado en la fuente abierta paraftware, ImageJ. Haga clic en &quot;Plugins&quot; y en el desplazamiento de menú desplegable para &quot;Analizar&quot; y haga clic en &quot;Counter Cell.&quot; Cuando se abra el contador de células, haga clic en &quot;Iniciar&quot; para vincular la imagen para el contador celular. Nota: En este caso, utilizar ImageJ 1.45 segundos con 32 bits de Java 1.6.0_10 versión. <ol><li> Utilice un aumento estándar de 50% de coherencia entre goleadores y para uso en los pasos subsiguientes para marcar FP. Mueva esta imagen en el lado izquierdo de la pantalla junto a la contador de células. Esta imagen se denomina Copia A (Ver Figura 2, lado izquierdo de la pantalla). </li></ol></li></ol></li><li> Abra una segunda copia de la imagen en bruto (copia B) para la medición de los diámetros de las papilas se cuantifica. Acercar y alejar según sea necesario para la preferencia del goleador individuo a lo largo del proceso de puntuación. Mueva esta copia en el lado derecho de la pantalla para las dos copias no son accidentalmente confundido. (Vea la Figura 2, lado derecho depantalla) </li><li> Haga clic en la herramienta de línea. El uso de la copia B, acercar tanto como sea necesario para dibujar con precisión un diámetro a través del círculo íntimo del papel de filtro de 10 mm en cualquier ángulo y haga clic en &quot;Analizar&quot; y &quot;Ajuste de escala.&quot; Complete la &quot;distancia conocida&quot; ser &quot;10 . &quot;Verifique la escala es correcta midiendo un ángulo alternativo y asegurar el rango de diámetro está entre 9.8 a 10.2 mm. Si no es así, repita este paso. </li></ol><img alt="Figura 2" src="/files/ftp_upload/52860/52860fig2.jpg" /> Figura 2: Copia A y B. Copia Copia A (izquierda) está vinculada a la ventana contador de células y se mantiene en 50% de aumento para la consistencia de anotador anotador mientras copia B (derecha) puede ser ampliada a la preferencia de la persona. 2. Puntajes FP Utilizando el Protocolo dicotómicos Key Denver papilas <ol><li> Para cada papil candidatola, utilice la clave dicotómica siguiente (paso 2.2 a 2.5) que detalla los criterios para determinar si se trata de una FP. Consulte la Figura 3 para una representación visual de las papilas que se clasifican como FP y para los que son rechazados en cada paso del proceso. <img alt="Figura 3" src="/files/ftp_upload/52860/52860fig3.jpg" /> Figura 3: FP vs. Rechazado papilas. La figura 3a es una lengua con varios calificación FP mientras 3b-3e han circundado áreas que violan cada regla. (3b) área es amorfo; (3c) papilas son demasiado pequeños; 3d) papila es azul en comparación con aquellos que lo rodean, (3e) papila está rebajada en comparación con aquellos a su alrededor. </li><li> Forma <ol><li> Determinar si la papila candidato es amorfo (sin forma). Al 50% de zoom ver si hay una forma geométrica reconocido comúnmente (oval, cúbico, redondo). </li><li> Si hay una forma geométrica (véase la figura 3a), vaya al paso 2.3. </li><li> Si del there es sin forma geométrica (ver Figura 3b), vaya a la ventana del contador celular y haga clic en &quot;Tipo 1.&quot; En la copia A (50% de zoom), haga clic en la papila candidato para marcarlo como amorfo y no un FP. Al hacer clic en los tipos 1-4 en esto y los pasos posteriores permite goleadores sepan que han abordado todas las papilas candidato y categoriza qué regla fue violada al rechazar una estructura que ayudará en la discusión en el paso 2.7.2. </li></ol></li><li> Color <ol><li> Consulte copiar A en 50% de zoom y determinar si hay alguna diferenciación de color sobre la superficie de la lengua. Si es así, continúe con el siguiente 2.3.2. Si no es así, no use el color como un factor determinante; vaya al paso 2.4. </li><li> Determinar si la papila candidato es más ligero que el tejido o papilas que lo rodea (véase la figura 3a). Si alguna parte de la papila candidato ha mantenido rosa o manchado ligero, vaya al paso 2.4. </li><li> Si la papila candidato es azul y las papilas circundantes sonmás ligero (ver Figura 3c), vaya a la ventana del contador de células y haga clic en &quot;Tipo 2&quot; en el contador de células. En la copia A, haga clic en el candidato marcar como demasiado azul y no una FP. </li></ol></li><li> Tamaño <ol><li> El uso de la copia B, acercar a la distancia donde se puede ver cómodamente el contorno de la papila candidato. </li><li> Haga clic en la herramienta de línea y medir a través de la dimensión más larga de la papila candidato. Haga clic en &quot;Analizar&quot; y luego &quot;medida&quot;. Si la longitud medida es de 0,5 mm o más (véase la figura 3a), vaya al paso 2.5. </li><li> Si la longitud medida es 0,499 mm o menos, medir una vez más para asegurar la exactitud. Si todavía es 0.499 mm o menos (ver F igura 3d), haga clic en &quot;Tipo 3&quot; en la ventana contador de células y en el ejemplar A, haga clic en la papila candidato para marcarlo como demasiado pequeño y no un FP. </li></ol></li><li> Recesión <ol><li> El uso de la copia A, evaluar si la papila candidato es bien uniforme queight con el resto de la lengua o elevada. Si la papila es en una grieta, determinar su altura en comparación con las otras estructuras en la grieta, no la superficie de la lengua. Si la papila es más baja que las papilas que lo rodea (ver Figura 3e), utilice &quot;Tipo 4&quot; y en el ejemplar A, haga clic en la papila candidato para marcarlo como empotrado y no una FP. </li><li> Si la papila candidato es o bien de altura uniforme con el resto de la lengua o elevada (véase la figura 3a), utilice &quot;Tipo 5&quot; para hacer clic y marcar que esta es una FP. Este tipo 5 es la puntuación total de FP en bruto. No cierre las copias en este punto como ImageJ no guarda las puntuaciones en el contador de células ni las marcas de colores de los tipos 1-5 en el ejemplar A. </li></ol></li><li> Ahorro Copia A <ol><li> Anote en la puntuación de FP prima portátil. </li><li> En la ventana de contador de células, haga clic en &quot;Exportar imagen.&quot; Guarda con el sistema de denominación deseada del laboratorio. Esto permitirá la apertura de policíay A en el futuro para retener las marcas de colores de tipos 1-5. No va a salvar a la puntuación FP prima. </li></ol></li><li> Control De Calidad <ol><li> Puntuación cada foto por dos goleadores individuales y compara 7. </li><li> Si el mayor puntaje bruto FP está dentro del 10% de la puntuación bruta FP inferior, el promedio de los dos resultados juntos por una puntuación de consenso FP. Si los dos puntajes brutos FP difieren en más de un 10%, tire de ambas fotos anotados en la pantalla. <ol><li> Utilice tipos de contador 1-4 para ayudar en la discusión de las discrepancias y de conferir a una puntuación de consenso final. Si no se pueda alcanzar consenso durante el debate, tomar un descanso de puntuación. En un momento posterior, rescore la imagen y discutir. Si un consenso todavía no se puede alcanzar, tirar en un tercer goleador. Pídales que marcar la imagen y el diálogo con los otros dos. </li></ol></li></ol></li></ol> 3. Formación Goleadores de utilizar DPP <ol><li> Antecedentes de Formación <ol><li> Tener dos goleadores contar una variedad de imágenes,anotando de forma individual y que confiere regularmente para asegurarse de que estaban utilizando los mismos criterios. Sólo cuando los recuentos individuales fueron consistentemente dentro del 10% de cada uno para cada las imágenes cuando marcó fue el método (finalizado arriba) considera aceptable y calificó DPP. </li><li> Elija 15 imágenes oficiales y 15 imágenes de entrenamiento (Suplementario Figuras 2-17) en orden secuencial para anotar. Si una imagen se consideró incontable durante la selección, no tome la imagen y elija siguiente imagen secuencial. Nota: Estas imágenes varían en calidad y tamaño que fueron elegidos, mientras que el laboratorio seguía dominando la técnica de la fotografía correcta. Una de las imágenes seleccionadas se consideró incontable a través de este proceso de escrutinio primario, pero fue dejado en asegurar que goleadores fueron capaces de hacer esa llamada cuando sea necesario. Por lo tanto hay 16 imágenes dadas a los alumnos aunque sólo 15 obtuvieron imágenes. </li><li> El uso de DPP, se los goleadores mencionados contar las 15 imágenes de entrenamiento y crear un consensoanotar para cada uno. </li><li> Dé alumnos las 15 imágenes oficiales y pida calificar usando Miller &amp; Reedy para crear una línea de base. Anota récord. Llevar a cabo un entrenamiento en grupo que siguió el paso 3.2. Una vez completado el paso 3.2, tienen los goleadores puntúan las 15 imágenes oficiales de nuevo y registrar sus puntuaciones. </li></ol></li><li> Formación Goleadores posteriores sobre DPP <ol><li> Dé goleadores formación la primera imagen de formación y demostrar DPP para unos pocos papilas en esta imagen. Discuta el razonamiento para seleccionar o rechazar cada papila como FP. Permitir a los alumnos a que sigan practicando puntuable para el resto de la foto y consultan con el número de consenso (por número consenso del Gobierno de Taiwán y Laboratorios Tipo 1-5 marcadores, ver Figura 1). Por esta foto discutir cualquier discrepancia con independencia del 10% para asegurar la comprensión del DPP. </li><li> Dé goleadores posteriores la segunda imagen de formación y hacer que se puntúan usando DPP. </li><li> Si la puntuación FP prima aprendiz es dentro de los diezpor ciento del consenso establecido recuento de la sección 3.1.3., deje de aprendiz para mover a la siguiente imagen y repita los pasos. </li><li> Si la puntuación está fuera del rango del diez por ciento, utilice marcas coloreadas del aprendiz que representan tipos 1-5 para entender e identificar la inconsistencia y luego abordar la comprensión discrepante del DPP. </li><li> Dar al alumno la oportunidad de rescore la imagen y verificar la nueva puntuación una vez más. Si tiene éxito, aprendiz mueve a la siguiente imagen hasta que se completen todas las imágenes. </li></ol></li></ol>

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Los autores declaran que no tienen intereses financieros en competencia.

El uso de DPP, la varianza dentro de la imagen a través de cuenta goleadores independientes y cuenta de dentro-goleador disminuyó significativamente. Si bien este método hace que el análisis de densidad FP visual sin videomicroscopia menos subjetiva, debe tenerse en cuenta que este método sólo puntuaciones de FP. DPP no puede garantizar que las estructuras clasificadas como FP tienen poros de sabor y son, por tanto, las papilas gustativas ni que los recuentos son un reflejo de la densidad brote verdadero sabor 20,23 .La naturaleza de este método es que establece la confiabilidad a través de la consistencia y precisión; sin embargo, puede ser sesgando los resultados en una dirección coherente. Para probar la precisión con respecto a otros métodos utilizando una verdadera medida de la densidad de yema del gusto (por ejemplo, videomicroscopía) se extendería más allá del alcance de esta study.However, mediante la caracterización de la morfología de FP más estricta y la creación de una clave dicotómica, este método se dirige a Miller &amp; cargo de Reedy al campo que más caracterización de FPque hay que hacer para tener un consenso sobre su morfología y cuantificación 2. Además, indicaron que esta caracterización puede &quot;aclarar algunas de las diferencias entre los sujetos y explicar algunos de los resultados dispares entre los investigadores 2.&quot; Al proporcionar un método uniforme de cuantificación, muchas de las discrepancias sobre el papel de la FP en sabor y nutricionalmente investigación relacionada puede ser rectificado. La clave dicotómica se puede ajustar para las diferentes técnicas de captura de imagen. La distancia conocida para la escala de medición se puede configurar fácilmente al diámetro utilizado en cada laboratorio y la recesión se puede descartar si envoltura o vidrio saran se colocaron sobre la lengua para la captura de imágenes. En el Laboratorio de GOT, se encontró que la lengua neutra proporciona la mejor definición de las papilas. Esto puede ser debido a la cantidad de luz en el laboratorio que causó envoltura o vidrio saran para reflejar la luz de nuevo en la cámara de la creación de una mirada que hizo asnoseva- difícil. Algunos laboratorios han dicho que encuentran el tinte más difícil de contar, pero el laboratorio GoT encontrado un colorante alimenticio azul diluido a una concentración de una y treinta y seis minutos siempre que el contraste ideal entre fungiformes papilas filiformes y en la mayoría de las lenguas. La creación de una clave dicotómica para la caracterización FP permitirá a los investigadores en diferentes laboratorios, utilizando una variedad de métodos de captura de imagen, para analizar sistemáticamente las estructuras en la lengua y tener confianza en la comunicación de sus resultados. Por último, el uso de una clave dicotómica puede tener efectos en otras áreas de la metodología científica en donde las cualidades de estructuras u objetos están proporcionando los números inconsistentes de estudio a estudio.

Las papilas son los golpes visibles en la superficie de la lengua. Hay cuatro tipos de papilas fungiformes: (FP), foliadas, caliciformes y filiformes. Mientras papilas filiformes se extienden sobre la superficie de la lengua, circumvallate se localizan sólo en la parte posterior de la lengua, y foliadas se encuentran en los lados. En contraste, FP están situados hacia la parte delantera de la lengua. FP, foliadas, y papilas caliciformes se consideran gustativa porque tienen el potencial de contener papilas gustativas filiformes, mientras no lo hagan. Las papilas gustativas son grupos de células responsables de la detección de estimulantes del gusto químicos y la transducción de los estímulos en una señal gustativa en el cerebro. Saliva y alimentos moléculas entran en las papilas gustativas a través de aberturas llamadas poros papilas gustativas donde las moléculas y luego tienen el potencial de activar células gustativas. Curiosamente, hay grandes diferencias individuales en la densidad de la yema del gusto, como se observa por primera vez en un estudio histológico de las lenguasde 18 cadáveres (Miller, 1988) 1. Las papilas gustativas en sí no son visibles en la superficie de la lengua, sin embargo, los poros del gusto son visibles cuando se utilizan las técnicas adecuadas de ampliación, de iluminación y de tinción que llevaron Miller &amp; Reedy (1990) para desarrollar un método para identificar los poros del gusto y papilas fungiformes utilizando videomicroscopía en la vida los seres humanos 2. Varios laboratorios han modificado su técnica videomicroscopía original, utilizando la fotografía fija y poco o ningún aumento. Sin embargo, desde papilas fungiformes son mucho más fáciles de visualizar que son poros utilizando estas últimas técnicas, laboratorios se volvieron a contar papilas fungiformes en lugar de poros gustativas. Al hacerlo, se asume que la densidad de papila fungiformes es una medida de proxy razonable para la densidad de poro gusto, a pesar de que las papilas fungiformes muchos no contienen poros de sabor o paladar 3; no sólo son FP más visible y accesible que circunvaladas y papilas foliadas, pero su captura de imagen es inferior time consume que el análisis de los poros gusto por el método alternativo de videomicroscopía 2,4. En 1990, Miller &amp; Reedy utilizan esta técnica para encontrar ese sabor densidades de poro se correlacionan con densidades de PF 3 que fue corroborada en Bartoshuk et al. 5 Además de esta relación anatómica, Miller &amp; Reedy también encontraron que los 8 individuos en la parte superior medio de la distribución de la densidad de poros gusto también una clasificación de sacarosa, NaCl, y el propiltiouracilo (PROP) como significativamente más intensa que lo hicieron las otras 8 personas 3. Trabajos posteriores por Bartoshuk et al. (1994) observó una correlación entre la intensidad de sabor PROP supraumbral y densidad papila fungiformes, así como la densidad de poros gusto, en 42 sujetos 5. Este método conveniente llevó a los estudios influyentes de información que los sujetos cuyas lenguas tienen muchas papilas provocan una reacción más fuerte a muchos estimulantes del gusto, incluyendo el estimulantes del gusto amargo feniltiocarbamida (PCT) y PROP 6,7. PTC y PROP son estimulantes del gusto bien investigados frecuentemente utilizados debido a la clara relación entre fenotipo sensibilidad del gusto de una persona y su genotipo. Los estudios de población han demostrado que las personas que tienen la diplotype recesiva homocigota del gen, TAS2R38, tienen una sensibilidad significativamente menor para sostener que los portadores de la variante dominante o heterocigótico del gen 8-10. Este fenómeno hereditario se informó por primera vez en 1932, cuando Arthur L. Fox anunció su descubrimiento de la &quot;ceguera gusto&quot; a PTC 11. Entre las personas capaces de probar estos compuestos amargos, la intensidad del gusto informó pueden variar en cualquier lugar desde un poco desagradable para terriblemente amarga 6. Para tener en cuenta la varianza que no puede ser explicado por TAS2R38, la teoría fue propuesta que podría atribuirse a la densidad de FP en la lengua 4. Como la investigación gusto avanzaba, el field se dividió en dos escuelas de pensamiento en torno a esta teoría sobre el papel de FP y sensibilidad sabor amargo. Aunque muchos estudios corroboran la afirmación original de que la densidad de FP es un factor en el PROP sensibilidades 4,6,12,13, ha habido una contingencia pequeña, pero importante, que se ha encontrado evidencia para refutarlo, reportando una incapacidad para replicar la función 10, 14,15,16. Delwiche et al. (2001) advirtió que la tendencia es muy variable; Densidad FP hace cuenta no uniforme de las diferencias en la sensibilidad a la amargura a través de temas, y fue sólo demostrable para los sujetos con al menos una sensibilidad moderada a PROP 7. Además de la utilización de la Miller &amp; Reedy método definido con menos rigor en la forma de cuantificar FP, es importante señalar que con excepción de la Offspring Beaver Dam Study 15 realizado por Fischer et al., La mayoría de los estudios anteriores tenían pequeña muestra tamaños que también pueden contribuir a resultados inconsistentes enel papel de la FP en el sabor. En pocas palabras, en Miller &amp; Reedy del documento sobre la metodología seminal (1990), los autores manchadas lenguas azules de cuantificar porque FP FP siguen siendo de color rosa, mientras que las papilas filiformes absorben el colorante y se vuelven azules. Se clasifican FP como &quot;estructuras redondeadas de color rosa alrededor de 0,5 mm de diámetro&quot; 2. Si bien los autores informaron que antes de utilizar este método para su posterior labor de análisis, las características de FP deberían estar más estrictamente definidos y concluyeron que la variación ya se ha señalado en la literatura &quot;podría ser atribuible a diferentes poblaciones sometidas, diferentes métodos y diferentes investigadores&quot; 2, su la investigación ha dado lugar a las características comúnmente aceptadas que el FP sean redondos 17,18, amplio 2, rosa o manchado ligero 2, 4 y elevado. A primera vista, estas características parecen muy sencillo. En la Genética del Laboratorio Taste (GOT Lab o laboratorio), el uso del conocidohod se complicó por los intentos individuales de artilleros en la clasificación y priorización de la importancia de las características anteriores, cuando algunas, pero no todas, de las características estaban presentes. Estas complicaciones incluyen pequeñas papilas que apareció rosa en medio de mucho mayor papilas; toda la lengua que absorbe el colorante azul eliminando así clasificación basada en la variación de color; papilas oblonga en vez de todo el año; y las lenguas que no tienen variación en elevación, todo lo cual contribuyó a goleadores de informes ampliamente variados conteos de PF de la misma imagen. Estas variaciones en el análisis nos llevó a revisar la literatura con el fin de determinar la subjetividad, se determinarán las excepciones a las características de PF comúnmente aceptadas y finalmente elaborar un protocolo para definir y marcar con precisión y objetividad FP. En primer lugar, FP forma se describe en la literatura como un redondeado, en forma de hongo estructura 17,18. Sin embargo, notable excepciónTambién se mencionaron los iones. Miller hizo hincapié en que el término &quot;fungiformes&quot; es un término equivocado y que muchos FP no están en forma de seta, pero puede variar ampliamente en tamaño y morfología de 18. Melis et al. (2013) también describe varios papilas que se considera &quot;distorsionada&quot;, donde el diámetro FP en una dirección era por lo menos dos desviaciones estándar por más tiempo que en otra dirección 19. Por otra parte, Cheng &amp; Robinson encontraron que al indicar FP mediante tinción, que oscilaron entre plana rematada a alargada en aspecto 20. Tomando nota de las excepciones mencionadas, la caracterización de un FP de ser redonda y aparece en forma de hongo una definición demasiado estrecha. En segundo lugar, el color FP se describe como &quot;círculos de color rosa contra un fondo azul&quot; 7 después de la tinción de la lengua con colorante azul. Aunque las manchas más ligero era el criterio más coherente de FP en toda la literatura todavía no era un partido de clasificación uniforme. Cheng y<html> ; Robinson observó que el FP no siempre se tiñeron levemente, por lo que la identificación difícil e incierta 20. Parece entonces que las lenguas absorben tinte diferente y mientras que el contraste es evidente en muchas lenguas, algunas se vuelven completamente azul sin distinción, mientras que otros pierden inmediatamente cualquier rastro de colorante azul 21. La tercera característica, el tamaño de FP, era bastante consistentes entre los papeles, que van desde 0,5 mm a 0,97 mm 6,18. En la literatura Miller observó que había dos rangos de tamaño de papilas en la parte anterior dorsal de la lengua. Las papilas con diámetros más grandes eran principalmente fungiformes y papilas cónica, mientras que las papilas con un diámetro más pequeño eran en su mayoría filiforme 18. Sin embargo, con la excepción de la Offspring Beaver Dam Study 21, el tamaño no apareció para determinar si una estructura es un FP en la literatura, pero se proporcionan para papilas ya clasificada como &quot;fungiformes&quot;. _content &quot;&gt; Por último, la elevación aparece como el cuarto FP característica 4 aunque Miller señaló que la distinción entre filiformes y papilas fungiformes es difícil cuando se utiliza este criterio cerca del margen de la lengua. Dio dos ejemplos de FP que variaron en gran medida en la elevación, uno de ellos 0,8 mm de altura, mientras que otro fue de menos de 0,1 mm de altura, pero todavía tenía dos poros gustativas que se observaron con claridad 18. Esta observación también fue seguido y confirmado por Shahbake et al. 4 Estas definiciones y sus excepciones reportados muestran que el campo gusto ha reconocido desde hace tiempo la falta de coherencia en la caracterización de FP y las deficiencias del protocolo de uso común de Miller &amp; Reedy. De hecho, Miller &amp; Reedy exhortaron el campo para definir con más detalle las características de FP 2. La hipótesis de que goleadores estaban dando un peso diferente a las características y priorizar su importancia de manera diferente cuando papillae no cumplió con todos los criterios, por ejemplo, cuando una papila era grande y con forma de hongo, pero manchada azul. Se razonó que los investigadores de los estudios publicados anteriormente probablemente hicieron lo mismo que, cuando se combina con pequeños tamaños de muestra, puede dar cuenta de la variedad de resultados procedentes del uso de este método. El Gobierno de Taiwán Lab abordó este vacío en la metodología FP mediante el desarrollo de una guía que define cada característica utilizando mediciones objetivas y prioriza las características para indicar que tiene prioridad en el análisis. Este método es el Protocolo de Denver papilas (DPP), una clave dicotómica con características claras y distintas de FP para garantizar recuentos precisos y repetibles a partir de fotografías digitales de la lengua. DPP es un método propuesto para estandarizar el método de Miller &amp; Reedy utilizado previamente, eliminando así la interpretación individual y garantizar resultados más consistentes en el análisis de la densidad de FP. Al hacerlo, DPP se puede utilizar para más confianza determine el papel de la FP en el sabor. Las imágenes tomadas de la lengua de los temas fueron analizados por los científicos ciudadanos (goleadores) del laboratorio que son los verdaderos sujetos de este estudio. Núcleo del Laboratorio de ciudadanos científicos está compuesta por miembros de la comunidad con edades (años) de 16 a mediados de los años 80. Un informe de evaluación sumativa encargado por el Museo en 2012 describe ciudadanos científicos como tener un fuerte interés por la ciencia y con dos tercios de haber ganado un título universitario en una disciplina científica 22. Ciudadanos científicos Candidato son reclutados actualmente a través del boca a boca, debe completar con éxito un proceso de entrevistas con voluntarios veteranos en el Museo, y someterse a un período de prueba en la exposición permanente de salud del Museo, la Expedición de la Salud, antes de que tengan la oportunidad de aplicar para una posición en el laboratorio. Una vez aceptado en el laboratorio, los científicos ciudadanos se someten a un entrenamiento de 12 semanas para obtener la certificación para inscribirse sujeto humanos. A raíz de esta certificación, que son capaces de tomar los módulos de formación en diversas técnicas en el laboratorio (por ejemplo, recuento papilas, la extracción de ADN) y siguientes certificaciones adicionales y medidas regulares de control de calidad, estos científicos ciudadanos tienen la oportunidad de participar activamente en el análisis de datos. Ciudadanos científicos ofrecen voluntariamente su tiempo y no son compensados ​​por sus contribuciones al Museo.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Image J</td>
			<td>National Institutes of Health</td>
			<td><a href="http://rsb.info.nih.gov/ij">http://rsb.info.nih.gov/ij</a></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Food dye, Deep Blue Shade</td>
			<td>Esco</td>
			<td>http://escofoods.com/blue-food-coloring.html</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Rayon Tipped OB/GYN Applicators</td>
			<td>Puritan</td>
			<td>25-808 1PR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Grade 1 Filter Paper</td>
			<td>Whatman</td>
			<td>Whatman No.: 1001-325</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coolpix P100 (10.3 megapixels) and P500 (12.1 megapixels)</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>http://imaging.nikon.com/lineup/coolpix/</td>
			<td>neither model appears to be available on the website any longer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paper Hand Towels</td>
			<td>Kleenex</td>
			<td>https://www.kleenex.com/HandTowelsDetail.aspx</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

denver papillae protocol for objective analysis of fungiform papillae

El objetivo del Protocolo papilas Denver es utilizar una clave dicotómica para definir y priorizar las características de papilas fungiformes (FP) para asegurarse de puntuación consistente entre goleadores. Este protocolo se basa apagado de una necesidad que ha surgido de las últimas dos décadas de investigación gusto usando FP como sustituto de la densidad de poros gusto. Densidad FP históricamente ha sido analizado utilizando Miller y Reedy de 1990 caracterizaciones de su morfología: redondo, manchado ligero, grande y elevada. En este trabajo, los autores advertidos de que las definiciones más estrictas de FP morfología necesaria a perfilarse. A pesar de este llamado a la acción, el seguimiento de la literatura ha sido escasa, con la mayoría de los estudios continuos para citar Miller &amp; Reedy del trabajo original. En consecuencia, los informes de densidad FP han sido muy variables y, combinado con pequeños tamaños de muestra, puede contribuir a las conclusiones discrepantes sobre el papel de FP en el sentido del gusto. La Genética del Laboratorio Taste exploraron esta aparente inconconsistencia en el conteo y se encontró que goleadores fueron priorizando individualmente la importancia de estas características de forma diferente y no tenía ninguna orientación para cuando una papila tenía algunos, pero no todos, de las cualidades reportados de FP. El resultado de esta subjetividad es recuentos de PF altamente variables de la misma imagen lengua. El Protocolo papilas Denver ha sido desarrollado para remediar esta consecuencia mediante el uso de una clave dicotómica que más define y prioriza la importancia de las características presentadas por Miller &amp; Reedy. El método propuesto podría ayudar a crear una forma estándar para cuantificar la FP para los investigadores en el campo del gusto y estudios nutricionales.

Aquí está una fotografía representativa anotó por dos goleadores individuales cuando se utiliza la metodología de Miller &amp; Reedy comúnmente utilizada para la identificación de FP basado en las normas de procedimiento de la redonda, grande, de color rosa o manchado ligero, y elevado, y luego la misma fotografía anotó por dos goleadores usando DPP. Los recuentos mostrados son representativos de la alta variación observada usando el método original en comparación con la menor varianza usando DPP. <img alt="Figura 4" src="/files/ftp_upload/52860/52860fig4.jpg" /> Figura 4:. Miller &amp; Reedy Cuantificación vs DPP Cuantificación La imagen de la izquierda es el representante de los recuentos de dos goleadores &#39;utilizando el método de Miller &amp; Reedy. La imagen de la derecha representa dos cargos goleadores &#39;utilizando DPP. Rojo es el máximo goleador 1, Amarillo es el máximo goleador 2, verde es goleadores 1 y 2. Fiabilidad estadística de DPP fue estudiado previamente usando un modelo lineal mixto para evaluar la variabilidad 10. En pocas palabras, para generar datos para evaluar el papel de la DPP juega en la consistencia de las puntuaciones, imágenes quince se anotó dos veces. En el primer lote de las puntuaciones, DPP goleadores ingenuos utilizan el método de Miller &amp; Reedy 2. Los goleadores fueron entrenados para usar DPP y las imágenes se vuelven a puntuar de forma individual sin la etapa de consenso final se describe en la sección 2.7 detalla Control de Calidad (Figura 5). El conjunto de datos puntuación FP luego se utilizó en el modelo mixto para evaluar las diferencias combinados debido al protocolo (Figura 6), la variabilidad dentro de goleador y la interacción entre los dos. Este modelo mostró una diferencia significativa en la puntuación cuando se utiliza el método de Miller &amp; Reedy en comparación con DPP (valor de p &lt;1 x 10 -6) con DPP que conduce a un aumento en el recuento por 6.99 (SE = 0,99); 5,2% de la variabilidad en la puntuación se debió a la formación, el 25,9%, debido al goleador, y el remanentea la variabilidad específica a la imagen 10. A continuación, para generar datos para determinar la variabilidad dentro de goleador, una serie de treinta imágenes en orden aleatorio fue evaluado por 11 individuos. Sin el conocimiento de goleadores, esta serie de imágenes incluidas tres imágenes que se repiten. Se observó una diferencia drástica en la variabilidad puntuación comparando imágenes distintas versusrepeated imágenes. <img alt="Figura 5" src="/files/ftp_upload/52860/52860fig5.jpg" /> Figura 5:. DPP-Naïve vs Publicar DPP Formación paneles proporcionan diagramas de caja de las puntuaciones de los viajeros para 15 imágenes pre y post entrenamiento Protocolo papilas Denver. Para cada diagrama de caja, un lleno en el círculo indica la media, mientras que un círculo abierto indica un valor atípico. <img alt="Figura 6" src="/files/ftp_upload/52860/52860fig6.jpg" /> Figura 6:. Cambio en Goleador Varianza El gris representa tque la varianza de goleadores individuales anteriores a la formación de la DPP. Negro es el entrenamiento mismo puesto goleador DPP.

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Denver Papillae Protocol for Objective Analysis of Fungiform Papillae

Aquí se presenta un protocolo para medir la densidad de la papila fungiformes de fotografias digitales. Este método se basa el establecimiento de prioridades y la métrica características objetivas en el trabajo descriptivo original en papilas fungiformes por Miller &amp; Reedy (1990).

Protocolo papilas Denver para el Análisis Objetivo de papilas fungiformes

The goal of the Denver Papillae Protocol is to use a dichotomous key to define and prioritize the characteristics of fungiform papillae (FP) to ensure ...

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Research

JoVE Journal

Neuroscience

14.2K vistas.  Denver Museum of Nature & Science.  Aquí se presenta un protocolo para medir la densidad de la papila fungiformes de fotografias digitales. Este método se basa el establecimiento de prioridades y la métrica características objetivas en el trabajo descriptivo original en papilas fungiformes por Miller & Reedy (1990). 

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Isolation and Culture of Human Fungiform Taste Papillae Cells

Taste cells are highly specialized, with unique histological, molecular and physiological characteristics that permit detection of a wide range of simple stimuli and complex chemical molecules contained in foods. In human, individual fungiform papillae contain from zero to as many as 20 taste buds. There is no established protocol for culturing human taste cells, although the ability to maintain taste papillae cells in culture for multiple cell cycles would be of considerable utility for characterizing the molecular, regenerative, and functional properties of these unique sensory cells. Earlier studies of taste cells have been done using freshly isolated cells in primary culture, explant cultures from rodents, or semi-intact taste buds in tissue slices1,2,3,4. Although each of these preparations has advantages, the development of long-term cultures would have provided significant benefits, particularly for studies of taste cell proliferation and differentiation. Several groups, including ours, have been interested in the development and establishment of taste cell culture models. Most attempts to culture taste cells have reported limited viability, with cells typically not lasting beyond 3-5 d5,6,7,8. We recently reported on a successful method for the extended culture of rodent taste cells9. We here report for the first time the establishment of an in vitro culture system for isolated human fungiform taste papillae cells. Cells from human fungiform papillae obtained by biopsy were successfully maintained in culture for more than eight passages (12 months) without loss of viability. Cells displayed many molecular and physiological features characteristic of mature taste cells. Gustducin and phospholipase C &beta;2, (PLC-&beta;2) mRNA were detected in many cells by reverse transcriptase-polymerase chain reaction and confirmed by sequencing. Immunocytochemistry analysis demonstrated the presence of gustducin and PLC-&beta;2 expression in cultured taste cells. Cultured human fungiform cells also exhibited increases in intracellular calcium in response to appropriate concentrations of several taste stimuli indicating that taste receptors and at least some of the signalling pathways were present. These results sufficient indicate that taste cells from adult humans can be generated and maintained for at least eight passages. Many of the cells retain physiological and biochemical characteristics of acutely isolated cells from the adult taste epithelium to support their use as a model taste system. This system will enable further studies of the processes involved in proliferation, differentiation and function of mammalian taste receptor cells in an in vitro preparation.
Human fungiform taste papillae used for establishing human fungiform cell culture were donated for research following proper informed consent under research protocols that were reviewed and approved by the IRB committee. The protocol (#0934) was approved by Schulman Associates Institutional Review Board Inc., Cincinnati, OH. Written protocol below is based on published parameters reported by Ozdener et al. 201110.

We aimed to develop a reproducible protocol for isolating and maintaining long-term cultures of human fungiform taste papillae cells. Cells from human fungiform papillae obtained by biopsy were successfully maintained in culture for more than eight passages (12 months) without loss of viability.

Aislamiento y cultivo de células humanas las papilas fungiformes gusto

Taste cells are highly specialized, with unique histological, molecular and physiological characteristics that permit detection of a wide range of simple ...

Investigación

Neurociencias

Visualization and Genetic Manipulation of Dendrites and Spines in the Mouse Cerebral Cortex and Hippocampus using In utero Electroporation

In utero electroporation (IUE) has become a powerful technique to study the development of different regions of the embryonic nervous system 1-5. To date this tool has been widely used to study the regulation of cellular proliferation, differentiation and neuronal migration especially in the developing cerebral cortex 6-8. Here we detail our protocol to electroporate in utero the cerebral cortex and the hippocampus and provide evidence that this approach can be used to study dendrites and spines in these two cerebral regions.
Visualization and manipulation of neurons in primary cultures have contributed to a better understanding of the processes involved in dendrite, spine and synapse development. However neurons growing in vitro are not exposed to all the physiological cues that can affect dendrite and/or spine formation and maintenance during normal development. Our knowledge of dendrite and spine structures in vivo in wild-type or mutant mice comes mostly from observations using the Golgi-Cox method 9. However, Golgi staining is considered to be unpredictable. Indeed, groups of nerve cells and fiber tracts are labeled randomly, with particular areas often appearing completely stained while adjacent areas are devoid of staining. Recent studies have shown that IUE of fluorescent constructs represents an attractive alternative method to study dendrites, spines as well as synapses in mutant / wild-type mice 10-11 (Figure 1A). Moreover in comparison to the generation of mouse knockouts, IUE represents a rapid approach to perform gain and loss of function studies in specific population of cells during a specific time window. In addition, IUE has been successfully used with inducible gene expression or inducible RNAi approaches to refine the temporal control over the expression of a gene or shRNA 12. These advantages of IUE have thus opened new dimensions to study the effect of gene expression/suppression on dendrites and spines not only in specific cerebral structures (Figure 1B) but also at a specific time point of development (Figure 1C).
Finally, IUE provides a useful tool to identify functional interactions between genes involved in dendrite, spine and/or synapse development. Indeed, in contrast to other gene transfer methods such as virus, it is straightforward to combine multiple RNAi or transgenes in the same population of cells. 
In summary, IUE is a powerful method that has already contributed to the characterization of molecular mechanisms underlying brain function and disease and it should also be useful in the study of dendrites and spines.

Visualization and Genetic Manipulation of Dendrites and Spines in the Mouse Cerebral Cortex and Hippocampus using In utero Electroporation

This article describes in detail a protocol to electroporate in utero the cerebral cortex and the hippocampus at E14.5 in mice. We also show that this is a valuable method to study dendrites and spines in these two cerebral regions.

La visualización y la manipulación genética de las dendritas y espinas en la corteza cerebral y el hipocampo del ratón usando<em&gt; En el útero</em&gt; La electroporación

In utero electroporation (IUE) has become a powerful technique to study the development of different regions of the embryonic nervous system 1-5. To date ...

Laser Capture Microdissection of Neurons from Differentiated Human Neuroprogenitor Cells in Culture

Neuroprogenitor cells (NPCs) isolated from the human fetal brain were expanded under proliferative conditions in the presence of epidermal growth factor (EGF) and fibroblast growth factor (FGF) to provide an abundant supply of cells. NPCs were differentiated in the presence of a new combination of nerve growth factor (NGF), brain-derived neurotrophic factor (BDNF), dibutyryl cAMP (DBC) and retinoic acid on dishes coated with poly-L-lysine and mouse laminin to obtain neuron-rich cultures. NPCs were also differentiated in the absence of neurotrophins, DBC and retinoic acid and in the presence of ciliary neurotrophic factor (CNTF) to yield astrocyte-rich cultures. Differentiated NPCs were characterized by immunofluorescence staining for a panel of neuronal markers including NeuN, synapsin, acetylcholinesterase, synaptophysin and GAP43. Glial fibrillary acidic protein (GFAP) and STAT3, astrocyte markers, were detected in 10-15% of differentiated NPCs. To facilitate cell-type specific molecular characterization, laser capture microdissection was performed to isolate neurons cultured on polyethylene naphthalate (PEN) membrane slides. The methods described in this study provide valuable tools to advance our understanding of the molecular mechanism of neurodegeneration.

Human neuroprogenitor cells (NPCs) were expanded under proliferating conditions. NPCs were differentiated into neuron-rich cultures in the presence of a combination of neurotrophins. Neuronal markers were detected by immunofluorescence staining. To isolate a pure population of neurons, NPCs were differentiated on PEN membrane slides and laser capture microdissection was performed.

Microdisección de captura por láser de neuronas a partir de células diferenciadas neuroprogenitoras humanas en cultivo

Neuroprogenitor cells (NPCs) isolated from the human fetal brain were expanded under proliferative conditions in the presence of epidermal growth factor ...

Measuring Oral Fatty Acid Thresholds, Fat Perception, Fatty Food Liking, and Papillae Density in Humans

Emerging evidence from a number of laboratories indicates that humans have the ability to identify fatty acids in the oral cavity, presumably via fatty acid receptors housed on taste cells. Previous research has shown that an individual&#39;s oral sensitivity to fatty acid, specifically oleic acid (C18:1) is associated with body mass index (BMI), dietary fat consumption, and the ability to identify fat in foods. We have developed a reliable and reproducible method to assess oral chemoreception of fatty acids, using a milk and C18:1 emulsion, together with an ascending forced choice triangle procedure. In parallel, a food matrix has been developed to assess an individual&#39;s ability to perceive fat, in addition to a simple method to assess fatty food liking. As an added measure tongue photography is used to assess papillae density, with higher density often being associated with increased taste sensitivity.

Oral chemoreception of fatty acids and the association with diet and fatty food preferences may enable the identification of mechanisms involved with the development of obesity and why dietary changes may be difficult for many individuals.

Medición oral de ácidos grasos Umbrales, Percepción de grasa, alimentos grasos gusto, y papilas Densidad en Humanos

Emerging evidence from a number of laboratories indicates that humans have the ability to identify fatty acids in the oral cavity, presumably via fatty ...

Protocol for Three-dimensional Confocal Morphometric Analysis of Astrocytes

As glial cells in the brain, astrocytes have diverse functional roles in the central nervous system. In the presence of harmful stimuli, astrocytes modify their functional and structural properties, a condition called reactive astrogliosis. Here, a protocol for assessment of the morphological properties of astrocytes is presented. This protocol includes quantification of 12 different parameters i.e. the surface area and volume of the tissue covered by an astrocyte (astrocyte territory), the entire astrocyte including branches, cell body, and nucleus, as well as total length and number of branches, the intensity of fluorescence immunoreactivity of antibodies used for astrocyte detection, and astrocyte density (number/1,000 &#181;m2). For this purpose three-dimensional (3D) confocal microscopic images were created, and 3D image analysis software such as Volocity 6.3 was used for measurements. Rat brain tissue exposed to amyloid beta1-40 (A&#946;1-40) with or without a therapeutic&#160;intervention was used to present the method. This protocol can also be used for 3D morphometric analysis of other cells from either in vivo or in vitro conditions.

Astrocytes in the CNS change their functional and structural properties in response to harmful stimuli. This report presents a protocol for assessment of three-dimensional astrocyte morphology in diseased conditions or after therapeutic interventions.

Protocolo para tridimensional confocal morfométrico Análisis de astrocitos

As glial cells in the brain, astrocytes have diverse functional roles in the central nervous system. In the presence of harmful stimuli, astrocytes modify ...

Peering at Brain Polysomes with Atomic Force Microscopy

The translational machinery, i.e., the polysome or polyribosome, is one of the biggest and most complex cytoplasmic machineries in cells. Polysomes, formed by ribosomes, mRNAs, several proteins and non-coding RNAs, represent integrated platforms where translational controls take place. However, while the ribosome has been widely studied, the organization of polysomes is still lacking comprehensive understanding. Thus much effort is required in order to elucidate polysome organization and any novel mechanism of translational control that may be embedded. Atomic force microscopy (AFM) is a type of scanning probe microscopy that allows the acquisition of 3D images at nanoscale resolution. Compared to electron microscopy (EM) techniques, one of the main advantages of AFM is that it can acquire thousands of images both in air and in solution, enabling the sample to be maintained under near physiological conditions without any need for staining and fixing procedures. Here, a detailed protocol for the accurate purification of polysomes from mouse brain and their deposition on mica substrates is described. This protocol enables polysome imaging in air and liquid with AFM and their reconstruction as three-dimensional objects. Complementary to cryo-electron microscopy (cryo-EM), the proposed method can be conveniently used for systematically analyzing polysomes and studying their organization.

While ribosome structure has been extensively characterized, the organization of polysomes is still understudied. To overcome this lack of knowledge, we present here a detailed preparation protocol for accurate imaging of mammalian polysomes by atomic force microscopy (AFM) in air and liquid.

Asomándose al cerebro Polisomas con microscopía de fuerza atómica

The translational machinery, i.e., the polysome or polyribosome, is one of the biggest and most complex cytoplasmic machineries in cells. Polysomes, ...

Protocol for Isolating the Mouse Circle of Willis

The cerebral arterial circle (circulus arteriosus cerebri) or circle of Willis (CoW) is a circulatory anastomosis surrounding the optic chiasma and hypothalamus that supplies blood to the brain and surrounding structures. It has been implicated in several cerebrovascular disorders, including cerebral amyloid angiopathy (CAA)-associated vasculopathies, intracranial atherosclerosis and intracranial aneurysms. Studies of the molecular mechanisms underlying these diseases for the identification of novel drug targets for their prevention require animal models. Some of these models may be transgenic, whereas others will involve isolation of the cerebro-vasculature, including the CoW.The method described here is suitable for CoW isolation in any mouse lineage and has considerable potential for screening (expression of genes, protein production, posttranslational protein modifications, secretome analysis, etc.) studies on the large vessels of the mouse cerebro-vasculature. It can also be used for ex vivo studies, by adapting the organ bath system developed for isolated mouse olfactory arteries.

We describe here a reproducible protocol for isolating the mouse circle of Willis.

Protocolo para el aislamiento del Círculo de Willis Ratón

The cerebral arterial circle (circulus arteriosus cerebri) or circle of Willis (CoW) is a circulatory anastomosis surrounding the optic chiasma and ...

An Objective and Reproducible Test of Olfactory Learning and Discrimination in Mice

Olfaction is the predominant sensory modality in mice and influences many important behaviors, including foraging, predator detection, mating, and parenting. Importantly, mice can be trained to associate novel odors with specific behavioral responses to provide insight into olfactory circuit function. This protocol details the procedure for training mice on a Go/No-Go operant learning task. In this approach, mice are trained on hundreds of automated trials daily for 2&#8211;4 weeks and can then be tested on novel Go/No-Go odor pairs to assess olfactory discrimination, or be used for studies on how odor learning alters the structure or function of the olfactory circuit. Additionally, the mouse olfactory bulb (OB) features ongoing integration of adult-born neurons. Interestingly, olfactory learning increases both the survival and synaptic connections of these adult-born neurons. Therefore, this protocol can be combined with other biochemical, electrophysiological, and imaging techniques to study learning and activity-dependent factors that mediate neuronal survival and plasticity.

Here, we train mice on an associative learning task to test odor discrimination. This protocol also allows for studies on learning-induced structural changes in the brain.

Una prueba objetiva y Reproducible de aprendizaje olfativo y discriminación en ratones

Olfaction is the predominant sensory modality in mice and influences many important behaviors, including foraging, predator detection, mating, and ...

Where You Cut Matters: A Dissection and Analysis Guide for the Spatial Orientation of the Mouse Retina from Ocular Landmarks

Accurately and reliably identifying spatial orientation of the isolated mouse retina is important for many studies in visual neuroscience, including the analysis of density and size gradients of retinal cell types, the direction tuning of direction-selective ganglion cells, and the examination of topographic degeneration patterns in some retinal diseases. However, there are many different ocular dissection methods reported in the literature that are used to identify and label retinal orientation in the mouse retina. While the method of orientation used in such studies is often overlooked, not reporting how retinal orientation is determined can cause discrepancies in the literature and confusion when attempting to compare data between studies. Superficial ocular landmarks such as corneal burns are commonly used but have recently been shown to be less reliable than deeper landmarks such as the rectus muscles, the choroid fissure, or the s-opsin gradient. Here, we provide a comprehensive guide for the use of deep ocular landmarks to accurately dissect and document the spatial orientation of an isolated mouse retina. We have also compared the effectiveness of two s-opsin antibodies and included a protocol for s-opsin immunohistochemistry. Because orientation of the retina according to the s-opsin gradient requires retinal reconstruction with Retistruct software and rotation with custom code, we have presented the important steps required to use both of these programs. Overall, the goal of this protocol is to deliver a reliable and repeatable set of methods for accurate retinal orientation that is adaptable to most experimental protocols. An overarching goal of this work is to standardize retinal orientation methods for future studies.

This protocol provides a comprehensive dissection and analysis guide for the use of deep ocular landmarks, s-opsin immunohistochemistry, Retistruct, and custom code to accurately and reliably orient the isolated mouse retina in anatomical space.

Donde usted cortar materias: Una disección y guía de análisis para la orientación espacial de la Retina de ratón de hitos Ocular

Accurately and reliably identifying spatial orientation of the isolated mouse retina is important for many studies in visual neuroscience, including the ...

Chronic Implantation of Whole-cortical Electrocorticographic Array in the Common Marmoset

Electrocorticography (ECoG) allows the monitoring of electrical field potentials from the cerebral cortex with high spatiotemporal resolution. Recent development of thin, flexible ECoG electrodes has enabled conduction of stable recordings of large-scale cortical activity. We have developed a whole-cortical ECoG array for the common marmoset. The array continuously covers almost the entire lateral surface of cortical hemisphere, from the occipital pole to the temporal and frontal poles, and it captures whole-cortical neural activity in one shot. This protocol describes a chronic implantation procedure of the array in the epidural space of the marmoset brain. Marmosets have two advantages regarding ECoG recordings, one being the homologous organization of anatomical structures in humans and macaques, including frontal, parietal, and temporal complexes. The other advantage is that the marmoset brain is lissencephalic and contains a large number of complexes, which are more difficult to access in macaques with ECoG, that are exposed to the brain surface.These features allow direct access to most cortical areas beneath the surface of the brain. This system provides an opportunity to investigate global cortical information processing with high resolutions at a sub-millisecond order in time and millimeter order in space.

We have developed a whole-cortical electrocorticographic array for the common marmoset that continuously covers almost the entire lateral surface of cortex, from the occipital pole to the temporal and frontal poles. This protocol describes a chronic implantation procedure of the array in the epidural space of the marmoset brain.

Implantación crónica de todo cortical matriz electrocorticográfica en el tití común

Electrocorticography (ECoG) allows the monitoring of electrical field potentials from the cerebral cortex with high spatiotemporal resolution. Recent ...