Diese Arbeit wurde teilweise durch Science Education Partnership Award (SEPA) R25 RR025066 zwischen 2008 bis 2012 von den National Institutes of Health und der National Center for Research Resources finanziert. Wir danken Ihnen, den Kollegen in den Geschmacksfeld für nachdenkliche Erörterung der Literatur, unsere Ergebnisse und Rückmeldungen über die Verwendung der DPP in verschiedenen Laborszenarien: John Hayes, Sue Coldwell, Paul Breslin, Carla Schubert. Vielen Dank auch an Führung im Denver Museum of Nature &amp; Science und das Personal zur Unterstützung der Bürger der Wissenschaft innerhalb der Genetik der Taste Lab innerhalb Expedition Gesundheit. Schließlich, ich danke Ihnen für alle unsere ehrenamtliche Bürger Wissenschaftler für ihre Zeit und das Engagement für die Entwicklung und die dieses Protokoll verwenden, einschließlich: Bären Aragon, Mike Archer, Su Ataman, Michael Bagley, A&#39;nette Bertrand, Diana Boyles, Wendy Covert, Sasha Dooley , Patty Drever, Jessica Ern, Laura Harmacek, Sean Hibbard, Joyce Hutchens, Matt Joo, Leta Keane, Willem Leenhouts, Stephania Lukjan, Ashley Matthews, Mike Mauser, Stephanie Miller, Hallie Morgan-Rodriguez, Griffin Scherma, Alyssa Schickedanz, Terri Simon, Dylan Thomas, Rudy Torres, Tyler Wilson, Diane Woltkamp.

Die in dieser Studie erzielte Bilder wurden als Teil einer größeren Studie Geschmack in der Genetik der Taste Lab im Denver Museum of Nature &amp; Science (das Museum) 10 durchgeführt gesammelt. Themen der größeren Studie waren Museumsbesucher (n = 1195) im Alter von 18 bis 93. Während Themen aus sechs der sieben Kontinente kamen, waren die Teilnehmer vor allem europäischer Abstammung. Daten jedes Thema wurde in einem 30 Minuten Labor-Sitzung gesammelt. The Western Institutional Review Board genehmigt das Protokoll, informiert schriftliche Einwilligung erteilt wurde und Untertanen freiwillig ihre Zeit und wurden nicht für ihre Teilnahme an der Studie kompensiert. 1. Data Collection <ol><li> Bilderfassung <ol><li> Themen anzeigen eine Fotografie, wie sie sich darstellen (Abbildung 1), und was das aufgenommene Bild aussehen wird. <img alt="Abbildung 1" src="/files/ftp_upload/52860/52860fig1.jpg" /> Abbildung 1: Bildaufnahme Pose. </strong&gt; Dies ist das Foto, um Themen in der Got Lab, um vollständig für ihre Zunge Foto Pose gezeigt. </li><li> Direkter Themen, ihre Zunge mit einem Papierhandtuch trocken und lassen Sie die Zunge aus dem Mund herausragt. </li><li> Ca. 3 ml blauer Lebensmittelfarbstoff in einer Konzentration 1.36 bis zum Scheitelpunkt der Zunge mit Hilfe einer sterilen, Rayon Applikator mit einem 1-Zoll-Spitze. Haben Themen zurückkehren Zunge, den Mund und schlucken, um überschüssigen Farbstoff zu entfernen. </li><li> Haben Themen stellen sich, wie in Abbildung 1 dargestellt ist, mit ihren Kinn auf ihre Hände und Ellbogen auf einen Tisch für Stabilität gestützt. Direkter Themen, ihre Zunge einen komfortablen Abstand zu verlängern und befestigen Sie sie vorsichtig zwischen den Zähnen. </li><li> Erfüllen, ist eine 2,5 cm großes Stück Filterpapier mit einem Durchmesser von 10 mm kreisförmigen Ausschnitt in tanzt bis zur Spitze der vorderen von der linken Seite der Zunge neben der Mittellinie (siehe Abbildung 1). </li><li> Nehmen Sie sich mindestens drei Nahaufnahmen der Zunge, capturing die gesamte 10 mm kreisförmigen Ausschnitt zu Visualisierung aller FP in diesem Gebiet zu gewährleisten. Verwenden Sie die Makro-Einstellung eines hochwertigen digitalen Punkt und schießen Kamera auf einem Stativ für Stabilität befestigt. <ol><li> Zoom hinein in dem Maße, dass die gesamte Aussparung, während noch in der Kamera empfohlen Zoombereich fotografiert. Sicherzustellen, daß die Ebene des Objektivs parallel zur Ebene der Zunge, und dass die Aussparung kreisförmig erscheint im Bild anstatt länglich. Bewertung Fotos, um sicherzustellen, sie sind von hoher Qualität und nützlich für die Zählung. </li></ol></li></ol></li><li> Bildauswahl und Vorbereitung <ol><li> Laden Sie die Fotos auf den Computer. </li><li> Der Bilder desselben Motivs der Zunge aufgenommen, wählen Sie nur eine für die weitere Analyse auf der Grundlage klarer Definition von Strukturen auf der Zunge an der höchsten Zoom und der mindestens verzerrte Winkel so die Zunge ist breit und flach in Richtung der Kamera. </li><li> Öffnen Sie den ausgewählten Rohbild in der Open-Source-software, ImageJ. Klicken Sie auf &quot;Plugins&quot; und im Dropdown-Menü zu blättern und &quot;Analysieren&quot; und klicken Sie auf &quot;Zellzähler.&quot; Wenn der Zellenzähler wird, klicken Sie &quot;Initialisieren&quot;, um das Bild an die Zellzähler verbinden. Hinweis: Hier verwenden ImageJ 1,45 sec mit Java 1.6.0_10 32-Bit-Version. <ol><li> Verwenden Sie eine Standardvergrößerung von 50% für die Kohärenz zwischen Torschützen und für den Einsatz in den nachfolgenden Schritten zu punkten FP. Verschieben Sie das Bild auf der linken Seite des Bildschirms neben dem Zellzähler. Dieses Bild wird als Kopie A (siehe Abbildung 2, linke Seite des Bildschirms) bezeichnet werden. </li></ol></li></ol></li><li> Öffnen Sie eine zweite Kopie des rohen Bild (Kopie B) zum Messen der Durchmesser der Papillen quantifiziert. Vergrößern und Verkleinern, um den Vorlieben des einzelnen Torschützenkönig in der gesamten Bewertungsprozess benötigt. Bewegen Sie diese Kopie auf der rechten Seite des Bildschirms, so die beiden Kopien sind nicht zufällig durcheinander. (Siehe Abbildung 2, rechte SeiteBildschirm) </li><li> Klicken Sie auf das Werkzeug Linie. Verwenden Kopie B, vergrößern so viel wie nötig, um genau zu zeichnen einen Durchmesser über der 10 mm Innenkreis des Filterpapiers in einem beliebigen Winkel und klicken Sie auf &quot;Analysieren&quot; und &quot;Set-Skala&quot;. Füllen Sie das &quot;bekannte Strecke&quot; sein &quot;10 . &quot;Stellen Sie sicher durch die Messung eine alternative Winkel korrekt die Waage und sorgen für die Durchmesserbereich zwischen 9,8 bis 10,2 mm. Wenn es nicht ist, wiederholen Sie diesen Schritt. </li></ol><img alt="Figur 2" src="/files/ftp_upload/52860/52860fig2.jpg" /> Abbildung 2: Kopieren Sie A und B. Copy Copy A (links) mit dem Zellzähler Fenster verknüpft und bleibt mit 50% Vergrößerung auf Konsistenz von Torschützenkönig, um Torschützenkönig, während Kopie B (rechts) kann auf die Vorlieben des Einzelnen vergrößert werden. 2. Scoring FP Mit der Denver Papillen Protocol Dichotome Key <ol><li> Für jeden Kandidaten Papilla, verwenden Sie die folgende dichotome Schlüssel (Schritt 2,2-2,5) detailliert die Kriterien zu bestimmen, ob es sich um eine FP. Beziehen sich auf eine visuelle Papillen, die als FP klassifiziert und für diejenigen, die bei jedem Schritt in dem Verfahren zurückgewiesen werden, Figur 3. <img alt="Figur 3" src="/files/ftp_upload/52860/52860fig3.jpg" /> Abbildung 3: FP vs. Abgelehnt Papillen. 3a ist eine Zunge mit mehreren Qualifikations FP während 3b-3e sind Bereiche, die jede Regel verstoßen eingekreist. (3b) Bereich amorph; (3c) Papillen sind zu klein; 3d) Papille ist blau im Vergleich zu den umgebenden, (3e) Papille ausgespart im Vergleich zu denen um ihn herum. </li><li> Form <ol><li> Bestimmen Sie, ob der Kandidat Papille amorph (formlos). Bei 50% Zoom sehen, ob es eine allgemein anerkannte geometrische Form (oval, quaderförmig, rund). </li><li> Wenn es eine geometrische Form (siehe Abbildung 3a), fahren Sie mit Schritt 2.3. </li><li> Wenn there keine geometrische Form (siehe Abbildung 3b), gehen Sie auf die Zellenzähler-Fenster und klicken Sie auf &quot;Typ 1&quot; auf Kopie A (50% Zoom), klicken Sie auf die Kandidaten Papille zu markieren Sie ihn als amorphe und nicht ein FP. Mit einem Klick auf Typen 1-4 in diesem und den folgenden Schritten können Torschützen zu wissen, dass sie alle Bewerber Papillen angesprochen und kategorisiert, welche Regel verletzt wurde, wenn die Zurückweisung einer Struktur, die in der Diskussion in Schritt 2.7.2 helfen werden. </li></ol></li><li> Farbe <ol><li> Beziehen sich auf eine auf 50% zoomen kopieren und zu bestimmen, ob es einen Farbunterscheidung über die Oberfläche der Zunge. Wenn ja, weiter zum nächsten 2.3.2. Wenn nicht, verwenden Sie nicht die Farbe als entscheidender Faktor; fahren Sie mit Schritt 2.4. </li><li> Bestimmen Sie, ob der Kandidat Papille ist leichter als das Gewebe oder Papillen umgibt (siehe Abbildung 3a). Wenn ein Teil des Kandidaten Papille hat rosa geblieben oder gebeizt leichter, fahren Sie mit Schritt 2.4. </li><li> Wenn der Kandidat Papille ist blau und die umgebenden PapillenFeuerzeug (siehe Abbildung 3c), gehen Sie auf die Zellenzähler-Fenster und klicken Sie auf &quot;Typ 2&quot; auf der Zellzähler. Am Kopie A, klicken Sie auf die Kandidaten Als zu blau und nicht eine FP. </li></ol></li><li> Größe <ol><li> Verwenden Kopie B, vergrößern, um den Abstand in dem man bequem die Umrisse des Kandidaten Papille. </li><li> Klicken Sie auf das Zeilenwerkzeug und messen in der längsten Abmessung des Kandidaten Papille. Klicken Sie auf &quot;Analysieren&quot; und dann &quot;Maßnahme&quot;. Wenn die gemessene Länge beträgt 0,5 mm oder mehr (siehe Abbildung 3a), fahren Sie mit Schritt 2.5. </li><li> Wenn die gemessene Länge 0.499 mm oder weniger, noch einmal zu messen, um die Genauigkeit zu gewährleisten. Wenn es noch 0,499 mm oder weniger (siehe B ild 3d), klicken Sie auf &quot;Typ 3&quot; auf der Zellzähler-Fenster und auf Kopie A, klicken Sie auf die Kandidaten Papille zu markieren Sie ihn als zu klein und kein FP. </li></ol></li><li> Rezession <ol><li> Verwenden Kopie A, zu beurteilen, ob der Kandidat Papille entweder Uniform, die eright mit dem Rest der Zunge oder erhöht. Wenn die Papille in einem Spalt bestimmen, verglichen mit den anderen Strukturen in den Spalt, nicht die Oberfläche der Zunge seiner Höhe. Wenn der Papille niedriger als die umgebenden Papillen ist (siehe Abbildung 3e), verwenden Sie &quot;Type 4&quot; und auf Kopie A, klicken Sie auf die Kandidaten Papille um sie zu markieren und als Einbau kein FP. </li><li> Wenn der Kandidat Papille entweder von gleichmäßiger Höhe mit dem Rest der Zunge oder erhöhten (siehe Abbildung 3a), verwenden Sie &quot;Typ 5&quot; es zu klicken, und markieren Sie, dass dies ein FP. Diese Art 5 Gesamt ist die rohe FP-Score. Die Kopien an dieser Stelle nicht schließen, wie ImageJ nicht auf Kopie A. speichern Sie die Werte auf der Zellzähler noch die farbigen Markierungen von Typen 1-5 </li></ol></li><li> Saving Copy A <ol><li> Notieren Sie sich in Notebook raw FP-Score. </li><li> Auf der Zellenzähler-Fenster auf &quot;Bild exportieren&quot;. Speichern Sie mit der gewünschten Namenssystem des Labors. Dadurch wird die Öffnung der Polizist ermöglicheny A in die Zukunft, um die farbigen Markierungen von Typen 1-5 zu halten. Es wird nicht speichern Sie die raw FP-Score. </li></ol></li><li> Qualitätskontrolle <ol><li> Ergebnis jedes Foto von zwei einzelnen Torschützen und vergleichen Sie 7. </li><li> Wenn die höhere FP Rohwert innerhalb von 10% der unteren FP Rohwert, der Mittelwert der beiden Noten zusammen für einen Konsens FP-Score. Wenn die beiden FP Rohwerte sich um mehr als 10%, ziehen beide erzielte Fotos auf den Bildschirm. <ol><li> Verwenden Zählertypen 1-4, um auf einem endgültigen Konsens Punktzahl in die Diskussion über Abweichungen unterstützen und beraten. Wird kein Konsens in der Diskussion zu erreichen, machen Sie eine Pause von Scoring. Zu einem späteren Zeitpunkt, rescore das Bild und diskutieren. Wenn ein Konsens noch nicht erreicht werden kann, ziehen Sie in einem Dritt traf. Bitten Sie sie, um das Bild und den Dialog mit den anderen beiden punkten. </li></ol></li></ol></li></ol> 3. Ausbildung Torschützenkönige zu DPP Verwenden <ol><li> Hintergrund für die Ausbildung <ol><li> Haben zwei Torschützen zählen eine Vielzahl von Bildern,individuell Scoring und verleihen regelmäßig, um sicherzustellen, dass sie mit den gleichen Kriterien wurden. Nur wenn einzelne zählt durchweg innerhalb von 10% voneinander für jeweils die Bilder, wenn erzielte war die Methode (oben abgeschlossen) als akzeptabel angesehen und bezeichnet DPP. </li><li> Wählen Sie 15 offizielle Bilder und 15 Trainingsbilder (Supplemental Figuren 2-17) in der angegebenen Reihenfolge zu punkten. Wenn ein Bild wurde während der Auswahl als unzählige, überspringen Sie das Bild und wählen nächstfolgende Bild. Hinweis: Diese Bilder unterscheiden sich in Qualität und Größe, wie sie gewählt wurden, während das Lab noch die Beherrschung der richtigen Technik Fotografie. Einer der ausgewählten Bilder wurde durch diese Primär Zählvorgang als unzählige, wurde aber in links, um sicherzustellen, dass Torschützen konnten zeigen, dass Anruf, wenn nötig. Daher gibt es 16 Bilder zu Auszubildende gegeben, obwohl nur 15 erzielte Bilder. </li><li> Verwendung DPP haben die oben genannten Torschützen zählen die 15 Trainingsbilder und ein KonsensGäste für jede. </li><li> Geben Sie die 15 Auszubildenden offizielle Bilder und bitten, auswerten Miller &amp; Reedy, um eine Basis zu schaffen. Rekordergebnisse. Führen Sie eine Gruppentraining, das Schritt 3.2 gefolgt. Sobald Schritt 3.2 abgeschlossen wurde, haben die Torschützenliste stand es 15 offizielle Bilder wieder und nehmen ihre Noten. </li></ol></li><li> Schulung Nachfolgende Torschützenkönige auf DPP <ol><li> Geben Ausbildung Torschützen des ersten Bildes Ausbildung und zeigen DPP für einige Papillen zu diesem Bild. Diskutieren Begründung für die Auswahl oder Ablehnung jeder Papille als FP. Ermöglichen Auszubildenden weiter praktizieren Scoring für den Rest des Foto und verleihen mit dem Konsens Nummer (der Got Lab Konsens Anzahl und Art 1-5 Marker, siehe Zusatz Abbildung 1). Dieses Foto diskutieren Abweichungen unabhängig von der 10%, um das Verständnis der DPP gewährleisten. </li><li> Geben nachfolgenden Torschützen des zweiten Bildausbildungs ​​und sie auswerten DPP. </li><li> Wenn der Auszubildende raw FP-Score ist innerhalb von zehnProzent der etablierten Konsens zählen von Abschnitt 3.1.3., ermöglichen Auszubildenden bis zum nächsten Bild zu bewegen und wiederholen Sie die Schritte. </li><li> Wenn die Gäste außerhalb der Zehn-Prozent-Bereich, verwenden des Auszubildenden farbigen Markierungen, die Typen 1-5, zu verstehen und zu identifizieren, die Inkonsistenz und dann adressieren abweichenden Verständnis der DPP. </li><li> Geben Sie dem Praktikanten die Möglichkeit, die Bild rescore und überprüfen Sie die neue Partitur noch einmal. Wenn dies gelingt, auf das nächste Bild bewegt Trainee bis alle Bilder fertig sind. </li></ol></li></ol>

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Die Autoren erklären, dass sie keine konkurrierenden finanziellen Interessen.

Verwendung DPP, die Varianz innerhalb image zählt über unabhängige Torschützen und zählt innerhalb Torschützenkönig deutlich zurückgegangen. Während dieses Verfahren macht visuelle FP Dichteanalyse ohne Videomikroskopie weniger subjektiv ist anzumerken, dass dieses Verfahren nur Partituren FP werden. DPP kann nicht garantieren, dass Strukturen wie FP eingestuft haben Geschmack Poren und sind daher Geschmackspapillen, noch, dass die zählt, sind repräsentativ für echte Geschmacksknospe Dichte 20,23 .Die Natur dieser Methode ist, dass sie feststellt, Sicherheit durch Konsistenz und Präzision; jedoch kann es sein Vorspannen ergibt eine einheitliche Richtung. Um die Genauigkeit im Vergleich zu anderen Methoden zu testen mit einem wahre Maß Geschmacksknospe Dichte (zB Videomikroskopie), würde den Rahmen dieses study.However erstrecken, durch die Charakterisierung der Morphologie der FP strenger und die Schaffung einer dichotomen Schlüssel, diese Methode richtet Miller &amp; Reedy die Ladung auf dem Gebiet, dass weitere Charakterisierung von FPmuss, um einen Konsens über ihre Morphologie und Quantifizierung 2 müssen durchgeführt werden. Außerdem gaben sie an, dass diese Charakterisierung könnten &quot;einige der Unterschiede zwischen den Themen zu klären und einige der unterschiedlichen Ergebnisse erklären unter Ermittler 2.&quot; Durch die Bereitstellung einer einheitlichen Methode zur Quantifizierung, viele der Abweichungen über die Rolle der FP in Geschmack und ernährungs Forschung kann behoben werden. Die dichotomen Schlüssel kann für die unterschiedlichen Bildaufnahmetechniken angepasst werden. Die bekannten Abstand zur Messskala kann leicht an die in jedem Labor und Rezession verwendet werden, können ausgeschlossen werden, wenn Frischhaltefolie oder Glas wurden über die Zunge für die Bilderfassung platziert Durchmesser eingestellt werden. In der Got Lab wurde festgestellt, dass die neutrale Zunge die beste Definition der Papillen. Dies kann aufgrund der Menge an Licht in der Lab, die Frischhaltefolie oder Glas verursacht, um Licht in die Kamera zu reflektieren die Schaffung einer Blendung, die Esel gemacht werdensment schwierig. Einige Labors haben gesagt, sie der Farbstoff eine größere Herausforderung zu zählen, zu finden, aber der Got Lab fand eine verdünnte blauer Lebensmittelfarbstoff in einer Konzentration von 1.36 bot den idealen Kontrast zwischen pilzförmige und fadenförmigen Papillen auf der Mehrzahl von Zungen. Die Schaffung einer dichotomen Schlüssel für FP Charakterisierung wird für Forscher in verschiedenen Labors zu ermöglichen, mit einer Vielzahl von Bildaufnahmeverfahren, um konsequent zu analysieren Strukturen auf der Zunge und das Vertrauen in die Berichterstattung über die Ergebnisse. Schließlich kann die Verwendung eines dichotomen Schlüssel Zwecke in anderen Bereichen der wissenschaftlichen Methodologie, wo Eigenschaften von Strukturen oder Objekten bieten inkonsistente Zahlen von Studie zu Studie.

Papillen sind die sichtbaren Unebenheiten auf der Zungenoberfläche. Es gibt vier Arten von Papillen: pilzförmigen (FP), foliate, circumvallate und fadenförmig. Während fadenförmigen Papillen sind über die Oberfläche der Zunge verteilt sind circumvallate nur auf der Rückseite der Zunge lokalisiert und Blatt sind an den Seiten gefunden. Im Gegensatz dazu sind FP in Richtung der Vorderseite der Zunge entfernt. FP, foliate und Wallpapillen werden als Geschmacks, weil sie das Potenzial, Geschmacksknospen enthalten, während filiform nicht haben. Gaumen sind Cluster von Zellen zum Nachweis chemischer tastants und Transduzieren der Reize in einen gustatorischen Signals im Gehirn verantwortlich. Speichel und Nahrungsmoleküle treten in den Gaumen durch Öffnungen genannt Geschmack Poren, wo Geschmack Moleküle haben dann die Möglichkeit der Aktivierung Geschmackszellen. Interessanterweise gibt es große individuelle Unterschiede in der Geschmacksknospe Dichte, als erste in einer histologischen Untersuchung der Zunge beobachtetab 18 Leichen (Miller, 1988) 1. Gaumen selbst nicht auf der Zungenoberfläche sichtbar sind jedoch sichtbar Geschmack Poren bei der Verwendung von richtigen Vergrößerung, Beleuchtung und Färbetechniken, die Miller &amp; Reedy (1990) führte zu einer Methode, um Geschmack Poren und die pilzförmigen Papillen mit Videomikroskopie in lebenden identifizieren zu entwickeln Menschen 2. Eine Reihe von Labors haben ihren ursprünglichen Videomikroskopie Technik modifiziert, mit immer noch Fotografie und wenig oder keine Vergrößerung. Da jedoch pilzförmigen Papillen sind viel einfacher zu visualisieren sind als Poren mit diesen letzteren Techniken, wandte Labors zu zählen pilzförmige Papillen Geschmack anstelle von Poren. Dabei wird angenommen, dass pilzförmigen Papillen Dichte ist eine angemessene Ersatzgröße für den Geschmack Porendichte, auch wenn viele pilzförmigen Papillen enthalten keine Geschmacks Poren oder Geschmacksknospen 3; nicht nur FP sichtbarer und zugänglicher als circumvallate und foliate Papillen, aber ihre Bilderfassung weniger timich in Anspruch als Geschmack Porenanalyse durch die alternative Methode der Videomikroskopie 2,4. Im Jahr 1990, Miller &amp; Reedy verwendet diese Technik, um den Geschmack Porendichten mit FP Dichten 3, die in Bartoshuk et al. 5 weiter bestätigt wurde Zusätzlich zu dieser anatomischen Beziehung korreliert finden, Miller &amp; Reedy auch festgestellt, dass die 8 Personen in der oberen Hälfte der Geschmack Porendichteverteilung auch bewertet Saccharose, NaCl, und Propylthiouracil (PROP) als deutlich intensiver als die anderen taten 8 Personen 3. Nachfolgende Arbeiten von Bartoshuk et al. (1994) beobachteten eine Korrelation zwischen überschwellige PROP Geschmack Intensität und pilzförmigen Papillen Dichte sowie Geschmack Porendichte, in 42 Themen 5. Diese bequeme Methode führte zu einflussreichen Studien berichten, dass Patienten, deren Zungen haben viele Papillen entlocken eine stärkere Reaktion auf viele Geschmacksstoffe, einschließlich der bitteren Geschmacksstoffe Phenylthiocarbamid (PTC) und PROP 6,7. PTC und PROP sind gut recherchierte Geschmacksstoffe durch die klare Verbindung zwischen einer Person Geschmack Empfindlichkeit Phänotyp und Genotyp ihrer oft verwendet. Bevölkerungsstudien haben gezeigt, dass Menschen, die homozygot rezessiv Diplotyp des Gens TAS2R38 haben, haben eine deutlich geringere Empfindlichkeit gegen PROP als Träger der dominant oder heterozygote Variante des Gens 8-10. Diese vererbbare Phänomen wurde zuerst im Jahr 1932 gemeldet, wenn Arthur L. Fox kündigte seine Entdeckung der &quot;Geschmack Blindheit&quot; zu PTC 11. Unter den Menschen in der Lage, diese Bitterstoffe schmecken, die Intensität des Geschmacks berichtet kann überall von ein wenig unangenehm, unerträglich bitter 6 variieren. Um die Varianz, die nicht durch TAS2R38 erklärt werden kann entfallen, wurde die Theorie vorgebracht, dass es mit der Dichte des FP auf der Zunge 4 zurückzuführen. Als Geschmacksforschung fortgeschritten ist, das field wurde in zwei Denkschulen, um diese Theorie über die Rolle der FP und bitteren Geschmack Empfindlichkeit unterteilt. Obwohl viele Studien bestätigt die ursprüngliche Behauptung, dass FP Dichte ist ein Faktor in PROP Empfindlichkeiten 4,6,12,13, gab es einen kleinen, aber wichtigen Kontingenz, die gefunden hat Beweise zu widerlegen, den Hinweis auf die Unfähigkeit, die Rolle 10 zu replizieren, 14,15,16. Delwiche et al. (2001) warnte davor, dass der Trend ist sehr variabel; FP Dichte nicht gleichmäßig Konto für Unterschiede in der Bitterkeit Empfindlichkeit über Themen, und war nur für Patienten mit mindestens einem moderaten Sensitivität PROP 7 nachweisbar. Zusätzlich zu der Verwendung der weniger streng definierten Miller &amp; Reedy Methode, wie man FP zu quantifizieren, ist es wichtig zu beachten, dass mit Ausnahme des Beaver Dam Nachkommen Study 15 durch Fischer geführt et al., Die meisten der oben genannten Studien hatten kleine Proben Größen, die auch zu inkonsistenten Befunde beitragen könnendie Rolle von FP im Geschmack. Kurz gesagt, in Miller &amp; Reedy brechenden Methodik Papier (1990), die Autoren gefärbten Zungen blau zu quantifizieren, weil FP FP bleiben rosa während fadenförmigen Papillen absorbieren den Farbstoff und blau. Sie klassifiziert FP als &quot;abgerundeten rosa Strukturen etwa 0,5 mm Durchmesser&quot; 2. Während die Autoren darauf hingewiesen, dass, bevor Sie dieses Verfahren für weitere Analysen, FP Merkmale sollten genauer definiert werden und festgestellt, dass die Variation in der Literatur bereits angemerkt, 2, &quot;könnte auf verschiedene Themengruppen, verschiedenen Methoden und verschiedenen Forschern als&quot; ihre Forschung hat auf die allgemein anerkannten Eigenschaften, die FP sind rund 17,18, große 2, rosa geführt oder gebeizt leichter 2 und 4 erhöhten. Bare Münze genommen scheinen diese Eigenschaften sehr geradlinig. In der Genetik der Taste Lab (GOT Lab oder Lab), die Verwendung der trafhod wurde von einzelnen Versuche der Torschützenkönige in der Qualifikation komplizierte und Priorisierung der Bedeutung der oben genannten Merkmale, wenn einige, aber nicht alle, der die Merkmale vorhanden waren. Diese Komplikationen waren kleine Papillen, die rosa in der Mitte viel größere Papillen erschienen; die gesamte Zunge zu absorbieren den blauen Farbstoff wodurch Klassifizierung nach Farbvariation; Lang Papillen statt rund; und Federn, die keine Veränderung in der Höhe, die alle dazu beigetragen, scorers Berichts weit variiert FP Zählungen des gleichen Bildes. Diese Variationen in der Analyse führte uns zu der Literatur, um die Subjektivität zu lokalisieren, identifizieren keine Ausnahmen von den allgemein anerkannten FP Eigenschaften und letztlich entwickeln ein Protokoll genau und objektiv zu definieren und zu punkten FP überprüfen. Zuerst wird FP Form in der Literatur als eine abgerundete, pilzartige Struktur 17,18 beschrieben. Allerdings bemerkenswerte AusnahmeIonen wurden ebenfalls genannt. Miller betont, daß der Ausdruck &quot;pilzförmige&quot; ist eine Fehlbezeichnung ist und dass viele FP nicht pilzförmig, sondern kann in der Größe und Morphologie 18 variieren. Melis et al. (2013) beschrieben mehrere Papillen, die berücksichtigt wurden &quot;verzerrt&quot;, wobei die FP-Durchmesser in einer Richtung mindestens zwei Standardabweichungen mehr als in einer anderen Richtung 19 war. Außerdem Cheng &amp; Robinson festgestellt, dass bei der Angabe von FP-Färbung, reichten sie aus, um längliche abgeflachte in Erscheinung 20. In Anbetracht der oben genannten Ausnahmen, die Charakterisierung eines FP ist rund und pilzförmigen erscheint eine zu enge Definition. Zweitens wird FP Farbe &quot;rosa Kreise vor einem blauen Hintergrund&quot; 7 nach Färbung der Zunge mit blauen Farbstoff beschrieben. Obwohl Färbung leichter war der konsequenteste Kriterium der FP in der gesamten Literatur war es noch kein einheitliches Qualifikationsspiel. Cheng &amp;<html> ; Robinson beobachtet, dass FP nicht immer leicht ver- schmutzt, so dass Identifizierung schwierig und unsicher 20. Es scheint also, dass Zungen absorbieren Farbstoff anders und während der Kontrast ist offensichtlich auf viele Sprachen, einige werden ohne Unterscheidung ganz blau, während andere sofort verlieren jede Spur von blauem Farbstoff 21. Die dritte Eigenschaft, FP Größe war ziemlich konsistent unter den Papieren, die von 0,5 mm bis 0,97 mm 6,18. In der Literatur Miller merkt, dass es zwei Größenbereichen von Papillen auf der dorsalen anterioren der Zunge. Die Papillen mit größeren Durchmessern sind in erster Linie fungiform und konisch Papillen, während die Papillen mit einem kleineren Durchmesser waren zumeist fadenförmig 18. Jedoch mit Ausnahme der Beaver Dam Nachkommen Study 21, Größe nicht erscheinen, um zu bestimmen, ob eine Struktur ein FP in der Literatur, aber war für Papillen bereits als &quot;pilzförmige&quot; klassifiziert ist. _content &quot;&gt; schließlich Erhebung wird hier nur als vierten charakteristischen FP 4 obwohl Miller wies darauf hin, dass die Unterscheidung zwischen fadenförmig und pilzförmigen Papillen ist schwierig, wenn Sie diese Kriterien in der Nähe des Randes der Zunge. Er gab zwei Beispiele von FP, die sich stark in der Höhe variiert, einer 0,8 mm in der Höhe, während eine andere betrug weniger als 0,1 mm in der Höhe, aber immer noch zwei Geschmacks Poren deutlich beobachtet wurden 18. Diese Beobachtung wurde auch verfolgt und durch Shahbake et al. 4 bestätigt Diese Definitionen und deren berichteten Ausnahmen zeigen, dass das Geschmacksfeld ist seit langem bei der Charakterisierung von FP und die Mängel der häufig verwendete Protokoll von Miller &amp; Reedy erkannte die Inkonsistenz. In der Tat, Miller &amp; Reedy ermahnte das Feld, um die Eigenschaften FP 2 weiter zu definieren. Wir vermuten, dass Torschützenkönige gaben unterschiedliche Gewicht auf die Eigenschaften und Priorisierung ihrer Bedeutung unterschiedlich, wenn papillae versäumt, jedes Kriterium, beispielsweise wenn ein Papille war groß und pilzförmigen treffen, aber blau gefärbt. Es wurde argumentiert, dass die Ermittler von den bisher veröffentlichten Studien wahrscheinlich tat das gleiche, die, wenn sie mit kleinen Stichproben kombiniert werden, können für die vielfältigen Ergebnisse aus Anwendung dieses Verfahrens Rechnung zu tragen. Die taiwanische Lab adressiert diese Lücke in der FP-Methodik durch die Entwicklung einer Leitlinie, die jedes Merkmal definiert mit objektiven Messungen und priorisiert die Eigenschaften anzugeben, welche Vorrang in Analyse dauert. Diese Methode ist die Denver Papillen Protocol (DPP), eine dichotome Schlüssel mit klaren und deutlichen Merkmale von FP, um genaue und wiederholbare zählt von den digitalen Fotografien der Zunge zu gewährleisten. DPP ist ein vorgeschlagenes Verfahren, um die zuvor verwendeten Miller &amp; Reedy Verfahren, wodurch das Entfernen individuelle Interpretation und sicherzustellen, konsistentere Ergebnisse bei der Analyse von FP Dichte standardisieren. Auf diese Weise kann DPP zu mehr Zuversicht d verwendet werdenetermine die Rolle von FP im Geschmack. Die Zunge Bilder der Probanden entnommen wurden durch die Bürger Wissenschaftler (Torschützen) des Lab, die die wahren Themen dieser Studie untersucht. Kern der Bürger Wissenschaftler des Labors wird der Mitglieder aus der Community, die im Alter (Jahre) von 16 bis Mitte der 80er Jahre zusammen. Eine summative Evaluation Bericht des Museums im Jahr 2012 in Auftrag beschreibt Bürger Wissenschaftler wie mit einem starken Interesse an der Wissenschaft und mit zwei Dritteln mit einem Hochschulabschluss in einem wissenschaftlichen Gebiet 22 verdient. Kandidat Bürger Wissenschaftler derzeit via Mundpropaganda rekrutiert, muss erfolgreich abgeschlossen werden ein Interview-Prozess mit Veteran Freiwilligen im Museum, und eine Probezeit in Dauergesundheitsausstellung des Museums, Expedition Gesundheit, unterziehen, bevor sie die Möglichkeit, für eine Position in beantragen Labor. Einmal in die Lab akzeptiert, Bürger Wissenschaftler einen 12-wöchigen Ausbildung absolvieren, um zertifiziert zu werden, um menschliche Subjekt einschreibens. Im Anschluss an diese Zertifizierung, in der Lage, Trainingsmodule auf verschiedenen Techniken im Labor (zB Papillen Zählung, DNA-Extraktion) und zusätzlich folgende Zertifizierungen und regelmäßige Qualitätskontrollmaßnahmen sind, haben diese Bürger Wissenschaftler die Möglichkeit, aktiv in die Datenanalyse zu beteiligen. Citizen Wissenschaftler ehrenamtlich und werden nicht für ihre Beiträge zum Museum kompensiert.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Image J</td>
			<td>National Institutes of Health</td>
			<td><a href="http://rsb.info.nih.gov/ij">http://rsb.info.nih.gov/ij</a></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Food dye, Deep Blue Shade</td>
			<td>Esco</td>
			<td>http://escofoods.com/blue-food-coloring.html</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Rayon Tipped OB/GYN Applicators</td>
			<td>Puritan</td>
			<td>25-808 1PR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Grade 1 Filter Paper</td>
			<td>Whatman</td>
			<td>Whatman No.: 1001-325</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coolpix P100 (10.3 megapixels) and P500 (12.1 megapixels)</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>http://imaging.nikon.com/lineup/coolpix/</td>
			<td>neither model appears to be available on the website any longer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paper Hand Towels</td>
			<td>Kleenex</td>
			<td>https://www.kleenex.com/HandTowelsDetail.aspx</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

denver papillae protocol for objective analysis of fungiform papillae

Das Ziel des Denver Papillen Protokoll ist es, eine dichotome Schlüssel verwenden, um zu definieren und zu priorisieren die Eigenschaften von pilzförmigen Papillen (FP), um konsistente Scoring zwischen Torschützen gewährleisten. Dieses Protokoll baut auf der Notwendigkeit, die von den letzten zwei Jahrzehnten des Geschmacks Forschung mit FP als Proxy für Geschmack Porendichte entstanden ist. FP Dichte war in der Vergangenheit mit Miller &amp; Reedy ist 1990 Charakterisierungen ihrer Morphologie analysiert: rund, gefärbt Feuerzeug, groß, und erhöhten. In dieser Arbeit vorgewarnt die Autoren, dass strengere Definitionen FP Morphologie notwendig skizziert. Trotz dieser Aufruf zum Handeln hat verfolgen Literatur war knapp, mit den meisten Studien weiter zu Miller &amp; Reedy ursprünglicher Arbeit zu zitieren. Folglich haben FP Dichte Berichte sehr unterschiedlich gewesen, und in Kombination mit kleinen Stichproben, können zu den abweichenden Schlussfolgerungen über die Rolle der FP in Geschmacksempfindlichkeit beizutragen. Die Genetik der Taste Lab erforscht diesen scheinbaren inconKonsistenz der Zählung und gefunden, daß scorers wurden einzeln Priorisieren der Bedeutung dieser Eigenschaften unterschiedlich und hatte keine Anleitung zur wenn eine Papille hatten einige, aber nicht alle, der berichtet Qualitäten FP. Das Ergebnis dieser Subjektivität ist sehr variabel FP Zählungen des gleichen Bildes Zunge. Die Denver Papillen Protokoll wurde entwickelt, um diese Folge durch die Verwendung eines dichotomen Schlüssel, dass weitere definiert und priorisiert die Bedeutung der Merkmale her von Miller &amp; Reedy setzen beheben. Das vorgeschlagene Verfahren kann dazu beitragen, eine standardisierte Möglichkeit, FP für Forscher im Bereich der Geschmacks- und Ernährungsstudien zu quantifizieren.

Hier ist eine repräsentative Fotografie durch zwei einzelne Torschützen bei der Verwendung der häufig verwendete Miller &amp; Reedy Methodik zur Identifizierung FP auf der Grundlage der Feldstandards rund, groß, rosa erzielt oder gebeizt leichter und erhöht, und dann das gleiche Foto von zwei Torjäger erzielte mit DPP. Die gezeigten zählt, sind repräsentativ für die Verwendung des ursprünglichen Verfahrens im Vergleich zum unteren Varianz mit DPP beobachtete hohe Varianz. <img alt="Figur 4" src="/files/ftp_upload/52860/52860fig4.jpg" /> Abb. 4: Miller &amp; Reedy Quantifizierung vs DPP Quantifizierung Das Bild auf der linken repräsentativen Zählungen zwei scorers &#39;mit dem Miller &amp; Reedy Verfahrens geeignet ist. Das Bild auf der rechten Seite stellt zwei Torschützenkönige zählt mit DPP. Red ist Torschützenkönig 1, ist Yellow Torschützen 2, Grün Torschützen 1 &amp; 2. Statistische Zuverlässigkeit der DPP wurde zuvor unter Verwendung einer gemischten linearen Modell, um die Variabilität zu bewerten 10 untersucht. Kurz gesagt, die Daten, die Rolle spielt DPP in Konsistenz von Partituren beurteilen zu erzeugen, wurden fünfzehn Bilder zweimal erzielt. In der ersten Partie von Partituren, verwendet DPP naiv Torschützen die Miller &amp; Reedy Methode 2. Die Torschützen wurden geschult, um DPP verwenden und die Bilder wurden einzeln ohne die in Abschnitt 2.7 detailliert Quality Control (Abbildung 5) beschrieben endgültigen Konsens Schritt rescored. Die FP-Score Datensatz wurde dann in der Mischmodell verwendet, um die kombinierten Unterschiede aufgrund Protokoll (Abbildung 6), in-Torschützenkönig Variabilität und die Wechselwirkung zwischen den beiden zu bewerten. Dieses Modell zeigte einen signifikanten Unterschied in Scoring bei Verwendung der Miller &amp; Reedy Verfahrens gegenüber DPP (p-Wert von &lt;1 x 10 -6) mit DPP und damit ein höherer Zählwert um 6,99 (SE = 0,99); 5,2% der Variabilität in der Partitur war auf Ausbildung, 25,9% aufgrund von Torschützenkönig, und die restlichen auf GrundUm die Variabilität der spezifisch auf die Bild 10. Als nächstes wird, um Daten zu erzeugen, die in-Torschützenkönig Variabilität zu bestimmen, wurden eine Reihe von dreißig Bilder in zufälliger Reihenfolge von 11 Personen erzielt. Unbemerkt von Torschützen, diese Serie von Bildern enthalten drei Bilder, die wiederholt wurden. Wir beobachteten eine drastische Unterschied in der Partitur Variabilität Vergleich deutliche Bilder versusrepeated Bilder. <img alt="Figur 5" src="/files/ftp_upload/52860/52860fig5.jpg" /> Abb. 5: DPP-Naive vs Beitrag DPP Ausbildung Panels bieten Boxplots der Rezensent Partituren für 15 Bilder vor und nach Denver Papillen Protocol Ausbildung. Für jede boxplot, ein im Kreis gefüllt gibt den Mittelwert der Erwägung, dass ein offener Kreis zeigen einen Ausreißer. <img alt="Figur 6" src="/files/ftp_upload/52860/52860fig6.jpg" /> Abb. 6: Veränderung der Scorer Variance Der graue stellt ter Varianz für einzelne Torschützen vor der DPP-Training. Schwarz ist die gleiche Torschütze Post DPP Ausbildung.

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Denver Papillae Protocol for Objective Analysis of Fungiform Papillae

Hier präsentieren wir ein Protokoll, um pilzförmige Papillen Dichte von digitalen Fotos zu messen. Diese Methode baut Priorisierung und objektives Merkmal Metriken in den ursprünglichen Beschreibungs Arbeit an pilzförmigen Papillen von Miller &amp; Reedy (1990).

Denver Papillen Protokoll für objektive Analyse der pilzförmige Papillen

The goal of the Denver Papillae Protocol is to use a dichotomous key to define and prioritize the characteristics of fungiform papillae (FP) to ensure ...

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Research

JoVE Journal

Neuroscience

14.2K Aufrufe.  Denver Museum of Nature & Science.  Hier präsentieren wir ein Protokoll, um pilzförmige Papillen Dichte von digitalen Fotos zu messen. Diese Methode baut Priorisierung und objektives Merkmal Metriken in den ursprünglichen Beschreibungs Arbeit an pilzförmigen Papillen von Miller & Reedy (1990). 

Serie: Denver Papillae Protocol for Objective Analysis of Fungiform Papillae

Isolation and Culture of Human Fungiform Taste Papillae Cells

Taste cells are highly specialized, with unique histological, molecular and physiological characteristics that permit detection of a wide range of simple stimuli and complex chemical molecules contained in foods. In human, individual fungiform papillae contain from zero to as many as 20 taste buds. There is no established protocol for culturing human taste cells, although the ability to maintain taste papillae cells in culture for multiple cell cycles would be of considerable utility for characterizing the molecular, regenerative, and functional properties of these unique sensory cells. Earlier studies of taste cells have been done using freshly isolated cells in primary culture, explant cultures from rodents, or semi-intact taste buds in tissue slices1,2,3,4. Although each of these preparations has advantages, the development of long-term cultures would have provided significant benefits, particularly for studies of taste cell proliferation and differentiation. Several groups, including ours, have been interested in the development and establishment of taste cell culture models. Most attempts to culture taste cells have reported limited viability, with cells typically not lasting beyond 3-5 d5,6,7,8. We recently reported on a successful method for the extended culture of rodent taste cells9. We here report for the first time the establishment of an in vitro culture system for isolated human fungiform taste papillae cells. Cells from human fungiform papillae obtained by biopsy were successfully maintained in culture for more than eight passages (12 months) without loss of viability. Cells displayed many molecular and physiological features characteristic of mature taste cells. Gustducin and phospholipase C &beta;2, (PLC-&beta;2) mRNA were detected in many cells by reverse transcriptase-polymerase chain reaction and confirmed by sequencing. Immunocytochemistry analysis demonstrated the presence of gustducin and PLC-&beta;2 expression in cultured taste cells. Cultured human fungiform cells also exhibited increases in intracellular calcium in response to appropriate concentrations of several taste stimuli indicating that taste receptors and at least some of the signalling pathways were present. These results sufficient indicate that taste cells from adult humans can be generated and maintained for at least eight passages. Many of the cells retain physiological and biochemical characteristics of acutely isolated cells from the adult taste epithelium to support their use as a model taste system. This system will enable further studies of the processes involved in proliferation, differentiation and function of mammalian taste receptor cells in an in vitro preparation.
Human fungiform taste papillae used for establishing human fungiform cell culture were donated for research following proper informed consent under research protocols that were reviewed and approved by the IRB committee. The protocol (#0934) was approved by Schulman Associates Institutional Review Board Inc., Cincinnati, OH. Written protocol below is based on published parameters reported by Ozdener et al. 201110.

We aimed to develop a reproducible protocol for isolating and maintaining long-term cultures of human fungiform taste papillae cells. Cells from human fungiform papillae obtained by biopsy were successfully maintained in culture for more than eight passages (12 months) without loss of viability.

Isolierung und Kultivierung humaner Zellen pilzförmige Papillen Geschmack

Taste cells are highly specialized, with unique histological, molecular and physiological characteristics that permit detection of a wide range of simple ...

Forschung

Neurowissenschaften

Visualization and Genetic Manipulation of Dendrites and Spines in the Mouse Cerebral Cortex and Hippocampus using In utero Electroporation

In utero electroporation (IUE) has become a powerful technique to study the development of different regions of the embryonic nervous system 1-5. To date this tool has been widely used to study the regulation of cellular proliferation, differentiation and neuronal migration especially in the developing cerebral cortex 6-8. Here we detail our protocol to electroporate in utero the cerebral cortex and the hippocampus and provide evidence that this approach can be used to study dendrites and spines in these two cerebral regions.
Visualization and manipulation of neurons in primary cultures have contributed to a better understanding of the processes involved in dendrite, spine and synapse development. However neurons growing in vitro are not exposed to all the physiological cues that can affect dendrite and/or spine formation and maintenance during normal development. Our knowledge of dendrite and spine structures in vivo in wild-type or mutant mice comes mostly from observations using the Golgi-Cox method 9. However, Golgi staining is considered to be unpredictable. Indeed, groups of nerve cells and fiber tracts are labeled randomly, with particular areas often appearing completely stained while adjacent areas are devoid of staining. Recent studies have shown that IUE of fluorescent constructs represents an attractive alternative method to study dendrites, spines as well as synapses in mutant / wild-type mice 10-11 (Figure 1A). Moreover in comparison to the generation of mouse knockouts, IUE represents a rapid approach to perform gain and loss of function studies in specific population of cells during a specific time window. In addition, IUE has been successfully used with inducible gene expression or inducible RNAi approaches to refine the temporal control over the expression of a gene or shRNA 12. These advantages of IUE have thus opened new dimensions to study the effect of gene expression/suppression on dendrites and spines not only in specific cerebral structures (Figure 1B) but also at a specific time point of development (Figure 1C).
Finally, IUE provides a useful tool to identify functional interactions between genes involved in dendrite, spine and/or synapse development. Indeed, in contrast to other gene transfer methods such as virus, it is straightforward to combine multiple RNAi or transgenes in the same population of cells. 
In summary, IUE is a powerful method that has already contributed to the characterization of molecular mechanisms underlying brain function and disease and it should also be useful in the study of dendrites and spines.

Visualization and Genetic Manipulation of Dendrites and Spines in the Mouse Cerebral Cortex and Hippocampus using In utero Electroporation

This article describes in detail a protocol to electroporate in utero the cerebral cortex and the hippocampus at E14.5 in mice. We also show that this is a valuable method to study dendrites and spines in these two cerebral regions.

Visualisierung und genetische Manipulation von Dendriten und Dornen in der Maus Hirnrinde und im Hippocampus mit<em&gt; In utero</em&gt; Die Elektroporation

In utero electroporation (IUE) has become a powerful technique to study the development of different regions of the embryonic nervous system 1-5. To date ...

Laser Capture Microdissection of Neurons from Differentiated Human Neuroprogenitor Cells in Culture

Neuroprogenitor cells (NPCs) isolated from the human fetal brain were expanded under proliferative conditions in the presence of epidermal growth factor (EGF) and fibroblast growth factor (FGF) to provide an abundant supply of cells. NPCs were differentiated in the presence of a new combination of nerve growth factor (NGF), brain-derived neurotrophic factor (BDNF), dibutyryl cAMP (DBC) and retinoic acid on dishes coated with poly-L-lysine and mouse laminin to obtain neuron-rich cultures. NPCs were also differentiated in the absence of neurotrophins, DBC and retinoic acid and in the presence of ciliary neurotrophic factor (CNTF) to yield astrocyte-rich cultures. Differentiated NPCs were characterized by immunofluorescence staining for a panel of neuronal markers including NeuN, synapsin, acetylcholinesterase, synaptophysin and GAP43. Glial fibrillary acidic protein (GFAP) and STAT3, astrocyte markers, were detected in 10-15% of differentiated NPCs. To facilitate cell-type specific molecular characterization, laser capture microdissection was performed to isolate neurons cultured on polyethylene naphthalate (PEN) membrane slides. The methods described in this study provide valuable tools to advance our understanding of the molecular mechanism of neurodegeneration.

Human neuroprogenitor cells (NPCs) were expanded under proliferating conditions. NPCs were differentiated into neuron-rich cultures in the presence of a combination of neurotrophins. Neuronal markers were detected by immunofluorescence staining. To isolate a pure population of neurons, NPCs were differentiated on PEN membrane slides and laser capture microdissection was performed.

Laser Capture Mikrodissektion von Neuronen aus Differenzierte Menschen Neuroprogenitor Zellen in Kultur

Neuroprogenitor cells (NPCs) isolated from the human fetal brain were expanded under proliferative conditions in the presence of epidermal growth factor ...

Measuring Oral Fatty Acid Thresholds, Fat Perception, Fatty Food Liking, and Papillae Density in Humans

Emerging evidence from a number of laboratories indicates that humans have the ability to identify fatty acids in the oral cavity, presumably via fatty acid receptors housed on taste cells. Previous research has shown that an individual&#39;s oral sensitivity to fatty acid, specifically oleic acid (C18:1) is associated with body mass index (BMI), dietary fat consumption, and the ability to identify fat in foods. We have developed a reliable and reproducible method to assess oral chemoreception of fatty acids, using a milk and C18:1 emulsion, together with an ascending forced choice triangle procedure. In parallel, a food matrix has been developed to assess an individual&#39;s ability to perceive fat, in addition to a simple method to assess fatty food liking. As an added measure tongue photography is used to assess papillae density, with higher density often being associated with increased taste sensitivity.

Oral chemoreception of fatty acids and the association with diet and fatty food preferences may enable the identification of mechanisms involved with the development of obesity and why dietary changes may be difficult for many individuals.

Mess Oral-Fettsäure-Schwellenwerte, Fett Wahrnehmung, Fatty Essen gefallen, und Papillen Dichte in Humans

Emerging evidence from a number of laboratories indicates that humans have the ability to identify fatty acids in the oral cavity, presumably via fatty ...

Protocol for Three-dimensional Confocal Morphometric Analysis of Astrocytes

As glial cells in the brain, astrocytes have diverse functional roles in the central nervous system. In the presence of harmful stimuli, astrocytes modify their functional and structural properties, a condition called reactive astrogliosis. Here, a protocol for assessment of the morphological properties of astrocytes is presented. This protocol includes quantification of 12 different parameters i.e. the surface area and volume of the tissue covered by an astrocyte (astrocyte territory), the entire astrocyte including branches, cell body, and nucleus, as well as total length and number of branches, the intensity of fluorescence immunoreactivity of antibodies used for astrocyte detection, and astrocyte density (number/1,000 &#181;m2). For this purpose three-dimensional (3D) confocal microscopic images were created, and 3D image analysis software such as Volocity 6.3 was used for measurements. Rat brain tissue exposed to amyloid beta1-40 (A&#946;1-40) with or without a therapeutic&#160;intervention was used to present the method. This protocol can also be used for 3D morphometric analysis of other cells from either in vivo or in vitro conditions.

Astrocytes in the CNS change their functional and structural properties in response to harmful stimuli. This report presents a protocol for assessment of three-dimensional astrocyte morphology in diseased conditions or after therapeutic interventions.

Protokoll zur dreidimensionalen konfokalen morphometrische Analyse der Astrozyten

As glial cells in the brain, astrocytes have diverse functional roles in the central nervous system. In the presence of harmful stimuli, astrocytes modify ...

Peering at Brain Polysomes with Atomic Force Microscopy

The translational machinery, i.e., the polysome or polyribosome, is one of the biggest and most complex cytoplasmic machineries in cells. Polysomes, formed by ribosomes, mRNAs, several proteins and non-coding RNAs, represent integrated platforms where translational controls take place. However, while the ribosome has been widely studied, the organization of polysomes is still lacking comprehensive understanding. Thus much effort is required in order to elucidate polysome organization and any novel mechanism of translational control that may be embedded. Atomic force microscopy (AFM) is a type of scanning probe microscopy that allows the acquisition of 3D images at nanoscale resolution. Compared to electron microscopy (EM) techniques, one of the main advantages of AFM is that it can acquire thousands of images both in air and in solution, enabling the sample to be maintained under near physiological conditions without any need for staining and fixing procedures. Here, a detailed protocol for the accurate purification of polysomes from mouse brain and their deposition on mica substrates is described. This protocol enables polysome imaging in air and liquid with AFM and their reconstruction as three-dimensional objects. Complementary to cryo-electron microscopy (cryo-EM), the proposed method can be conveniently used for systematically analyzing polysomes and studying their organization.

While ribosome structure has been extensively characterized, the organization of polysomes is still understudied. To overcome this lack of knowledge, we present here a detailed preparation protocol for accurate imaging of mammalian polysomes by atomic force microscopy (AFM) in air and liquid.

Peering am Gehirn Polysomen mit Rasterkraftmikroskopie

The translational machinery, i.e., the polysome or polyribosome, is one of the biggest and most complex cytoplasmic machineries in cells. Polysomes, ...

Protocol for Isolating the Mouse Circle of Willis

The cerebral arterial circle (circulus arteriosus cerebri) or circle of Willis (CoW) is a circulatory anastomosis surrounding the optic chiasma and hypothalamus that supplies blood to the brain and surrounding structures. It has been implicated in several cerebrovascular disorders, including cerebral amyloid angiopathy (CAA)-associated vasculopathies, intracranial atherosclerosis and intracranial aneurysms. Studies of the molecular mechanisms underlying these diseases for the identification of novel drug targets for their prevention require animal models. Some of these models may be transgenic, whereas others will involve isolation of the cerebro-vasculature, including the CoW.The method described here is suitable for CoW isolation in any mouse lineage and has considerable potential for screening (expression of genes, protein production, posttranslational protein modifications, secretome analysis, etc.) studies on the large vessels of the mouse cerebro-vasculature. It can also be used for ex vivo studies, by adapting the organ bath system developed for isolated mouse olfactory arteries.

We describe here a reproducible protocol for isolating the mouse circle of Willis.

Protokoll für die Maus Kreis von Willis Trenn

The cerebral arterial circle (circulus arteriosus cerebri) or circle of Willis (CoW) is a circulatory anastomosis surrounding the optic chiasma and ...

An Objective and Reproducible Test of Olfactory Learning and Discrimination in Mice

Olfaction is the predominant sensory modality in mice and influences many important behaviors, including foraging, predator detection, mating, and parenting. Importantly, mice can be trained to associate novel odors with specific behavioral responses to provide insight into olfactory circuit function. This protocol details the procedure for training mice on a Go/No-Go operant learning task. In this approach, mice are trained on hundreds of automated trials daily for 2&#8211;4 weeks and can then be tested on novel Go/No-Go odor pairs to assess olfactory discrimination, or be used for studies on how odor learning alters the structure or function of the olfactory circuit. Additionally, the mouse olfactory bulb (OB) features ongoing integration of adult-born neurons. Interestingly, olfactory learning increases both the survival and synaptic connections of these adult-born neurons. Therefore, this protocol can be combined with other biochemical, electrophysiological, and imaging techniques to study learning and activity-dependent factors that mediate neuronal survival and plasticity.

Here, we train mice on an associative learning task to test odor discrimination. This protocol also allows for studies on learning-induced structural changes in the brain.

Eine objektive und reproduzierbare Test der olfaktorischen Lern- und Diskriminierung bei Mäusen

Olfaction is the predominant sensory modality in mice and influences many important behaviors, including foraging, predator detection, mating, and ...

Where You Cut Matters: A Dissection and Analysis Guide for the Spatial Orientation of the Mouse Retina from Ocular Landmarks

Accurately and reliably identifying spatial orientation of the isolated mouse retina is important for many studies in visual neuroscience, including the analysis of density and size gradients of retinal cell types, the direction tuning of direction-selective ganglion cells, and the examination of topographic degeneration patterns in some retinal diseases. However, there are many different ocular dissection methods reported in the literature that are used to identify and label retinal orientation in the mouse retina. While the method of orientation used in such studies is often overlooked, not reporting how retinal orientation is determined can cause discrepancies in the literature and confusion when attempting to compare data between studies. Superficial ocular landmarks such as corneal burns are commonly used but have recently been shown to be less reliable than deeper landmarks such as the rectus muscles, the choroid fissure, or the s-opsin gradient. Here, we provide a comprehensive guide for the use of deep ocular landmarks to accurately dissect and document the spatial orientation of an isolated mouse retina. We have also compared the effectiveness of two s-opsin antibodies and included a protocol for s-opsin immunohistochemistry. Because orientation of the retina according to the s-opsin gradient requires retinal reconstruction with Retistruct software and rotation with custom code, we have presented the important steps required to use both of these programs. Overall, the goal of this protocol is to deliver a reliable and repeatable set of methods for accurate retinal orientation that is adaptable to most experimental protocols. An overarching goal of this work is to standardize retinal orientation methods for future studies.

This protocol provides a comprehensive dissection and analysis guide for the use of deep ocular landmarks, s-opsin immunohistochemistry, Retistruct, and custom code to accurately and reliably orient the isolated mouse retina in anatomical space.

Wo schneiden Sie Angelegenheiten: Eine Dissektion und Analyse-Leitfaden für die räumliche Orientierung der Netzhaut Maus von okulären Sehenswürdigkeiten

Accurately and reliably identifying spatial orientation of the isolated mouse retina is important for many studies in visual neuroscience, including the ...

Chronic Implantation of Whole-cortical Electrocorticographic Array in the Common Marmoset

Electrocorticography (ECoG) allows the monitoring of electrical field potentials from the cerebral cortex with high spatiotemporal resolution. Recent development of thin, flexible ECoG electrodes has enabled conduction of stable recordings of large-scale cortical activity. We have developed a whole-cortical ECoG array for the common marmoset. The array continuously covers almost the entire lateral surface of cortical hemisphere, from the occipital pole to the temporal and frontal poles, and it captures whole-cortical neural activity in one shot. This protocol describes a chronic implantation procedure of the array in the epidural space of the marmoset brain. Marmosets have two advantages regarding ECoG recordings, one being the homologous organization of anatomical structures in humans and macaques, including frontal, parietal, and temporal complexes. The other advantage is that the marmoset brain is lissencephalic and contains a large number of complexes, which are more difficult to access in macaques with ECoG, that are exposed to the brain surface.These features allow direct access to most cortical areas beneath the surface of the brain. This system provides an opportunity to investigate global cortical information processing with high resolutions at a sub-millisecond order in time and millimeter order in space.

We have developed a whole-cortical electrocorticographic array for the common marmoset that continuously covers almost the entire lateral surface of cortex, from the occipital pole to the temporal and frontal poles. This protocol describes a chronic implantation procedure of the array in the epidural space of the marmoset brain.

Chronische Implantation des gesamten kortikalen Electrocorticographic Arrays in der Weißbüschelaffe

Electrocorticography (ECoG) allows the monitoring of electrical field potentials from the cerebral cortex with high spatiotemporal resolution. Recent ...