Questo lavoro è stato in parte finanziato da Science Education Partnership Award (SEPA) R25 RR025066 tra 2008-2012 dal National Institutes of Health e il Centro Nazionale per la Ricerca Risorse. Grazie ai colleghi del settore gusto per la discussione da parte di letteratura, i nostri risultati e il feedback sull&#39;uso di DPP in vari scenari di laboratorio: John Hayes, Sue Coldwell, Paul Breslin, Carla Schubert. Grazie anche a una leadership al Denver Museum of Nature &amp; Science e il personale di supporto della scienza cittadino nei Genetica del gusto Lab all&#39;interno Expedition Salute. Infine, grazie a tutti i nostri cittadini scienziati volontari per il loro tempo e dedizione per lo sviluppo e l&#39;utilizzo di questo protocollo, tra cui: Orso Aragona, Mike Archer, Su Ataman, Michael Bagley, A&#39;nette Bertrand, Diana Boyles, Wendy Covert, Sasha Dooley , Patty Drever, Jessica Ern, Laura Harmacek, Sean Hibbard, Joyce Hutchens, Matt Joo, Leta Keane, Willem Leenhouts, Stephania Lukjan, Ashley Matthews, Mike Mauser, Stephanie Miller, Hallie Morgan-Rodriguez, Griffin Scherma, Alyssa Schickedanz, Terri Simon, Dylan Thomas, Rudy Torres, Tyler Wilson, Diane Woltkamp.

Le immagini segnati in questo studio sono stati raccolti come parte di un più ampio studio condotto in gusto Genetica del Gusto Lab presso il Museo di Denver della Natura e della Scienza (Museo) 10. I soggetti dello studio più ampio sono stati i visitatori del museo (n = 1195), di età compresa 18-93. Mentre i soggetti provenienti da sei dei sette continenti, i partecipanti erano principalmente di origine europea. I dati di ogni soggetto sono stati raccolti in una sessione di 30 minuti di laboratorio. The Western Institutional Review Board ha approvato il protocollo, il consenso informato scritto è stato dato, e soggetti volontariamente il loro tempo e non sono stati compensati per la loro partecipazione allo studio. 1. Raccolta dati <ol><li> Acquisizione Immagine <ol><li> Mostra sottopone una fotografia di come porre se stessi (Figura 1) e ciò che l&#39;immagine catturata sarà simile. <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/52860/52860fig1.jpg" /> Figura 1: Acquisizione Immagine Posa. </strong&gt; Questa è la fotografia dimostrato di soggetti in GoT laboratorio, al fine di porre correttamente per la loro lingua foto. </li><li> Soggetti diretti per asciugare loro lingua con un tovagliolo di carta a mano e lasciare la lingua sporgente dalle loro bocche. </li><li> Applicare circa 3 ml di blu colorante alimentare ad una concentrazione 01:36 all&#39;apice della lingua usando una sterile applicatore di rayon con una punta di 1 pollice. Avere soggetti ritornano lingua alla bocca e deglutire per rimuovere l&#39;eccesso di tintura. </li><li> Avere soggetti si pongono come mostrato in Figura 1, con il mento sulle mani e gomiti appoggiati su un tavolo per la stabilità. Soggetti diretti di estendere la propria lingua una distanza comoda e sicura delicatamente fra i denti. </li><li> Aderire un 2,5 centimetri pezzo di carta da filtro con un diametro ritaglio circolare 10 millimetri punzonati in essa alla punta anteriore del lato sinistro della lingua vicino alla linea mediana (vedi Figura 1). </li><li> Prendere almeno tre immagini ravvicinate della lingua, capturing l&#39;intero 10 mm Finestra circolare per garantire la visualizzazione di tutti FP all&#39;interno di tale zona. Utilizzare l&#39;impostazione macro di un punto e sparare fotocamera digitale di alta qualità collegato a un treppiede per la stabilità. <ol><li> Ingrandite nella misura in cui l&#39;intero ritaglio è fotografato mentre ancora nel range di zoom raccomandato della fotocamera. Assicurarsi che il piano della lente fotocamera è parallelo al piano della linguetta e che il ritaglio appare circolare nella foto anziché oblunga. Rivedere le foto per assicurare che siano di alta qualità e utili per il conteggio. </li></ol></li></ol></li><li> Seleziona immagine e preparazione <ol><li> Carica le foto sul computer. </li><li> Delle immagini scattate della lingua di stesso soggetto, selezionare solo uno per ulteriori analisi sulla base di una chiara definizione tra le strutture sulla lingua al di zoom più alto e l&#39;angolo minimo distorta in modo che la lingua è ampia e piatta verso la telecamera. </li><li> Apri l&#39;immagine raw selezionata nella open source in modoftware, ImageJ. Clicca su &quot;Plugins&quot; e nel menu a tendina di scorrimento per &quot;Analizza&quot; e fare clic su &quot;Counter Cell.&quot; Quando l&#39;cella si apre, fare clic su &quot;inizializzare&quot; per collegare l&#39;immagine al contatore delle cellule. Nota: Qui, utilizzare ImageJ 1.45 sec con la versione a 32 bit Java 1.6.0_10. <ol><li> Utilizzare un ingrandimento standard del 50% per la coerenza tra marcatori e per l&#39;uso in successive fasi di segnare FP. Spostare questa immagine sul lato sinistro dello schermo accanto al contaglobuli. Questa immagine verrà indicato come copia A (vedi figura 2, lato sinistro dello schermo). </li></ol></li></ol></li><li> Aprire una seconda copia dell&#39;immagine grezza (copia B) per misurare i diametri delle papille essere quantificato. Zoom avanti e indietro come necessario per la preferenza del capocannoniere individuale per tutto il processo di punteggio. Spostare il copia al lato destro dello schermo in modo le due copie non sono accidentalmente confuso. (Vedi figura 2, lato destroschermo) </li><li> Fare clic sullo strumento Linea. Utilizzando copia B, zoom in quanto necessario per disegnare con precisione un diametro attraverso il cerchio interno 10 mm di carta da filtro in qualsiasi angolazione e fare clic su &quot;Analizza&quot; e &quot;Set Scale.&quot; Compilare il &quot;Noto Distanza&quot; essere &quot;10 . &quot;Verificare che la scala sia corretta, misurando un angolo alternativo e assicurare la gamma di diametri è compreso tra 9,8-10,2 mm. Se non lo è, ripetere questo passaggio. </li></ol><img alt="Figura 2" src="/files/ftp_upload/52860/52860fig2.jpg" /> Figura 2: copia A e B. Copy Copy A (sinistra) è collegato alla finestra contaglobuli e rimane a 50% di ingrandimento di coerenza da marcatore per scorer mentre copia B (destra) può essere ingrandita alla preferenza dell&#39;individuo. 2. Segnare FP Utilizzando il Denver Papille protocollo dicotomica Key <ol><li> Per ogni candidato papilla, utilizzare la seguente chiave dicotomica (passo 2,2-2,5) in dettaglio i criteri per determinare se si tratta di un FP. Fare riferimento alla Figura 3 per una visuale di papille che sono classificati come FP e per quelli che sono respinti in ogni fase del processo. <img alt="Figura 3" src="/files/ftp_upload/52860/52860fig3.jpg" /> Figura 3: FP vs Rifiutato Papille. La figura 3a è una lingua con diverse qualifiche FP mentre 3b-3e hanno cerchiato aree che violano ogni regola. (3b) zona è amorfo; (3c) papille sono troppo piccoli; 3d) papilla è blu rispetto a quelli che lo circonda, (3e) papilla è incassata rispetto a quelli intorno. </li><li> Forma <ol><li> Determinare se la papilla candidato è amorfo (informe). Al 50% di zoom vedere se c&#39;è una forma geometrica comunemente riconosciuto (ovale, cubico, rotondo). </li><li> Se vi è una forma geometrica (vedi figura 3a), passare al punto 2.3. </li><li> Se there non è la forma geometrica (vedi figura 3b), andare alla finestra bancone cellulare e fare clic su &quot;Tipo 1&quot; On copia A (50% dello zoom), fare clic sulla papilla candidato per contrassegnare come amorfo e non un FP. Cliccando su tipi 1-4 in questo e in fasi successive consente marcatori di sapere che hanno affrontato tutte le papille candidato e categorizza quale regola violata quando respinge una struttura che sarà di aiuto nella discussione al punto 2.7.2. </li></ol></li><li> Colore <ol><li> Fare riferimento alla copiare A al 50% zoom e determinare se vi è una differenziazione del colore sulla superficie della lingua. Se è così, continuare con il prossimo 2.3.2. In caso contrario, non usare il colore come un fattore determinante; passare al punto 2.4. </li><li> Determinare se la papilla candidato è più leggero rispetto al tessuto o papille circonda (vedi Figura 3a). Se una parte della papilla candidato è rimasto rosa o macchiato più leggero, passare al punto 2.4. </li><li> Se la papilla candidato è blu e le papille circostanti sonopiù leggero (si veda la Figura 3c), andare alla finestra bancone cella e scegliere &quot;Tipo 2&quot; sul bancone cellulare. Su copia A, fare clic sul candidato da contrassegnare come troppo blu e non un FP. </li></ol></li><li> Taglia <ol><li> Utilizzando copia B, zoom alla distanza dove si può vedere comodamente la sagoma della papilla candidato. </li><li> Fare clic sullo strumento Linea e misurare attraverso la dimensione più lunga della papilla candidato. Fare clic su &quot;Analizza&quot; e poi &quot;misura&quot;. Se la lunghezza misurata è di 0,5 mm o maggiore (vedere Figura 3a), passare al punto 2.5. </li><li> Se la lunghezza misurata sia o meno 0,499 millimetri, misurare una volta per assicurare la precisione. Se è ancora 0,499 millimetri o meno (vedi F IGURA 3d), fare clic su &quot;Tipo 3&quot; nella finestra del contatore delle cellule e sulla copia A, fare clic sulla papilla candidato per contrassegnare come troppo piccola e non un FP. </li></ol></li><li> Recessione <ol><li> Utilizzando copia A, di valutare se la papilla candidato è o divisa cheight con il resto della lingua o elevata. Se la papilla è in una fessura, determinare la sua altezza rispetto alle altre strutture nella fessura, non la superficie della lingua. Se la papilla è inferiore al papille circonda (vedi Figura 3e), usare &quot;Tipo 4&quot; e sulla copia A, fare clic sulla papilla candidato per contrassegnare come incasso e non un FP. </li><li> Se la papilla candidato è o di altezza uniforme con il resto della lingua o elevata (vedi figura 3a), utilizzare &quot;Tipo 5&quot; per scegliere e contrassegnare che questo è un FP. Questo totale tipo 5 è il punteggio FP crudo. Non chiudere le copie a questo punto come ImageJ non salva i punteggi sul bancone cellulare, né i segni colorati da tipi 1-5 su copia A. </li></ol></li><li> Risparmio Copia A <ol><li> Annotare in taccuino grezzo punteggio FP. </li><li> Nella finestra contatore cellulare, fai clic su &quot;Esporta immagine.&quot; Salva con il sistema di denominazione desiderata del laboratorio. Ciò consentirà l&#39;apertura di copy A in futuro per mantenere i segni colorati da tipi 1-5. Non si salva il punteggio FP crudo. </li></ol></li><li> Controllo Qualità <ol><li> Punteggio ogni foto da due marcatori individuali e confrontare 7. </li><li> Se il più alto FP punteggio grezzo è entro il 10% delle PF punteggio grezzo più basso, la media dei due punteggi insieme per un punteggio di consenso FP. Se i due punteggi grezzi FP differiscono di oltre il 10%, tirare entrambe le foto segnate sullo schermo. <ol><li> Utilizzare tipi di contatori 1-4 per aiutare nella discussione delle discrepanze e conferisce un punteggio consenso finale. Qualora non si raggiunga l&#39;unanimità nel corso della discussione, prendersi una pausa dal punteggio. In un momento successivo, Rescore l&#39;immagine e discutere. Se un consenso ancora non può essere raggiunto, tirare in un terzo marcatore. Chiedi loro di segnare l&#39;immagine e il dialogo con gli altri due. </li></ol></li></ol></li></ol> 3. Formazione Marcatori per utilizzare DPP <ol><li> Sfondo per la formazione <ol><li> Avere due marcatori contare una serie di immagini,segnando individualmente e conferendo regolarmente per garantire che stavano usando gli stessi criteri. Solo quando i singoli conteggi erano sempre entro il 10% l&#39;uno dall&#39;altro per ciascuna delle immagini quando ha segnato è stato il metodo (finalizzato sopra) ritenuto accettabile e denominato DPP. </li><li> Scegli 15 immagini ufficiali e 15 immagini di addestramento (Supplemental Figure 2-17) in ordine sequenziale a segnare. Se un&#39;immagine è stata ritenuta non numerabile durante la selezione, ignorare l&#39;immagine e scegliere il prossimo immagine sequenziale. Nota: Queste immagini variano in qualità e dimensioni sono state scelte mentre il Lab è stato ancora padroneggiare la corretta tecnica di fotografia. Una delle immagini selezionate è stato ritenuto non numerabile attraverso questo processo di conteggio primaria, ma è stato lasciato a far sì che marcatori sono stati in grado di fare quella chiamata in caso di necessità. Quindi ci sono 16 immagini date a tirocinanti anche se solo il 15 ha ottenuto le immagini. </li><li> Utilizzando DPP, sono i marcatori suddetti contare le immagini di formazione 15 e creare un consensopunteggio per ciascuno. </li><li> Dare tirocinanti le 15 immagini ufficiali e chiedere di valutazione con Miller &amp; Reedy per creare una linea di base. Punteggi record. Condurre una formazione di gruppo che ha seguito passo 3.2. Una volta che passo 3.2 è stata completata, hanno i marcatori punteggio di nuovo le 15 immagini ufficiali e registrare i loro punteggi. </li></ol></li><li> Formazione Marcatori successive sul DPP <ol><li> Dare marcatori di formazione dell&#39;immagine primo allenamento e dimostrare DPP per pochi papille su questa immagine. Discutere il ragionamento per la selezione o rifiutare ogni papilla come FP. Consentire ai tirocinanti di continuare a praticare punteggio per il resto di quella foto e conferiscono con il numero di consensi (per numero di consensi del GoT Lab e Tipo 1-5 marcatori, vedi figura complementare 1). Per questa foto discutere eventuali discrepanze a prescindere dal 10% per garantire la comprensione di DPP. </li><li> Dare marcatori successivi la seconda immagine della formazione e li hanno valutazione con DPP. </li><li> Se il tirocinante prima punteggio FP è entro dieciper cento del consenso istituita contare dalla sezione 3.1.3., consentono tirocinante di passare all&#39;immagine successiva e ripetere i passaggi. </li><li> Se il punteggio è di fuori del campo il dieci per cento, utilizzare segni colorati del tirocinante che rappresentano i tipi di 1-5 per capire e identificare l&#39;inconsistenza e poi affrontare la comprensione discrepanti del DPP. </li><li> Dare al tirocinante la possibilità di Rescore l&#39;immagine e verificare il nuovo punteggio ancora una volta. In caso di successo, tirocinante sposta sulla prossima immagine fino al completamento di tutte le immagini. </li></ol></li></ol>

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Gli autori dichiarano di non avere interessi finanziari in competizione.

Utilizzando DPP, la varianza all&#39;interno dell&#39;immagine conta attraverso marcatori indipendenti e conta di entro-scorer è diminuita in modo significativo. Mentre questo metodo rende visiva analisi di densità FP senza videomicroscopia meno personale, va notato che questo metodo solo punteggi FP. DPP non può garantire che le strutture classificate come FP hanno pori gusto e sono quindi papille gustative, né che i conti sono riflettenti di vero gusto densità germoglio 20,23 .La natura di questo metodo è che stabilisce l&#39;affidabilità attraverso la coerenza e precisione; tuttavia, può essere polarizzazione risultati in una direzione costante. Per testare la precisione rispetto ad altri metodi utilizzando una vera misura di gusto densità bud (ad esempio, videomicroscopia) estenderebbe oltre lo scopo di questo study.However, caratterizzando la morfologia di FP più stringente e la creazione di una chiave dicotomica, questo metodo si rivolge Miller &amp; carica di reedy al campo che più caratterizzazione di FPdeve essere fatto in modo da avere il consenso alla loro morfologia e quantificazione 2. Inoltre, hanno indicato che questa descrizione potrebbe &quot;chiarire alcune delle differenze tra soggetti e spiegare alcuni dei risultati disparati tra gli investigatori 2.&quot; Fornendo un metodo uniforme di quantificazione, molte delle discrepanze sul ruolo di FP nel gusto e Nutrizione- ricerca relativa potrà essere rettificato. La chiave dicotomica può essere regolata per le diverse tecniche di cattura delle immagini. La distanza nota per la scala di misurazione può essere facilmente impostato al diametro utilizzato in ogni laboratorio e recessione può essere scontato se saran wrap o vetro sono stati collocati sulla lingua per la cattura dell&#39;immagine. Nel GoT Lab, si è constatato che la lingua neutra fornito la migliore definizione delle papille. Ciò può essere dovuto alla quantità di luce in laboratorio che ha causato saran wrap o vetro per riflettere la luce nella fotocamera creando un bagliore che ha reso culivalu- difficile. Alcuni laboratori hanno detto che trovano il colorante più difficile da contare, ma il GoT Lab ha trovato un colorante alimentare blu diluito ad una concentrazione di 1:36 a condizione che il contrasto ideale tra fungiformi e papille filiformi sulla maggior parte delle lingue. La creazione di una chiave dicotomica per la caratterizzazione FP consentirà per i ricercatori in differenti laboratori, utilizzando una varietà di metodi di acquisizione delle immagini, di analizzare costantemente le strutture sulla lingua e avere fiducia nella comunicazione dei loro risultati. Infine, l&#39;uso di una chiave dicotomica può avere scopi in altri settori della metodologia scientifica in cui le qualità di strutture o oggetti stanno fornendo numeri incoerenti da studio a studio.

Papille sono i dossi visibili sulla superficie della lingua. Ci sono quattro tipi di papille fungiformi: (FP), foliate, circumvallate e filiforme. Mentre papille filiformi sono distribuite sulla superficie della lingua, circumvallate sono localizzati solo sul retro della lingua, e foliate si trovano ai lati. Al contrario, FP si trova verso la parte anteriore della lingua. FP, foliate, e papille gustative circumvallate sono considerati perché hanno il potenziale per contenere palato mentre filiforme non lo fanno. Papille gustative sono gruppi di cellule responsabili per la rilevazione tastants chimici e trasduttori gli stimoli in un segnale gustativa nel cervello. Molecole saliva e cibo entrano nelle papille gustative attraverso aperture chiamate pori del gusto in cui le molecole del gusto quindi hanno il potenziale di attivare cellule gustative. È interessante notare che ci sono grandi differenze individuali nella densità papille gustative, come prima osservato in uno studio istologico delle lingueda 18 cadaveri (Miller, 1988) 1. Le papille gustative stesse non sono visibili sulla superficie della lingua, tuttavia, i pori gustative sono visibili quando si utilizza appropriate tecniche di ingrandimento, di illuminazione e di colorazione che hanno portato Miller &amp; Reedy (1990) di sviluppare un metodo per identificare i pori del gusto e papille fungiformi utilizzando videomicroscopia in vita gli esseri umani 2. Un certo numero di laboratori hanno modificato la loro tecnica videomicroscopia originale, utilizzando la fotografia ancora e poco o niente di ingrandimento. Tuttavia, dal momento che papille fungiformi sono molto più facili da visualizzare che sono i pori utilizzano questi ultimi tecniche, laboratori rivolti a contare papille fungiformi al posto di pori di gusto. In tal modo, si presume che la densità fungiformi papilla è una misura di proxy ragionevole per la densità dei pori gusto, anche se molti papille fungiformi non contengono pori gustative o papille 3; non solo sono FP più visibile e accessibile di circumvallate e foliate papille, ma la loro cattura dell&#39;immagine è meno timi consuma di analisi gusto pori attraverso il metodo alternativo di videomicroscopia 2,4. Nel 1990, Miller &amp; Cannavò usato questa tecnica per scoprire che gusto densità dei pori sono correlati con densità FP 3 che è stato ulteriormente corroborato in Bartoshuk et al. 5 Oltre a questo rapporto anatomico, Miller &amp; Cannavò hanno anche scoperto che le 8 persone nel superiore metà della distribuzione di densità dei pori gusto anche valutato di saccarosio, NaCl, e propiltiouracile (PROP) significativamente più intenso che hanno fatto gli altri 8 individui 3. Il lavoro successivo da Bartoshuk et al. (1994) ha osservato una correlazione tra suprathreshold intensità PROP gusto e la densità papille fungiformi, così come la densità dei pori gusto, in 42 soggetti 5. Questo metodo conveniente ha portato a studi autorevoli segnalazione che i soggetti cui lingue hanno molti papille suscitare una reazione più forte a molti tastants, tra cui il tastants amaro phenylthiocarbamide (PTC) e PROP 6,7. PTC e PROP sono tastants ben studiate oft utilizzati a causa del chiaro legame tra la sensibilità gusto fenotipo di una persona e il loro genotipo. Gli studi di popolazione hanno dimostrato che le persone che hanno la diplotype recessivo omozigote del gene, TAS2R38, hanno una sensibilità significativamente inferiore a PROP di portatori della variante dominante o eterozigoti del gene 8-10. Questo fenomeno ereditabile è stata riportata nel 1932, quando Arthur L. Fox ha annunciato la sua scoperta del &quot;gusto cecità&quot; per PTC 11. Tra le persone in grado di assaggiare questi composti amari, l&#39;intensità del gusto riportato può variare da nessuna parte da un po &#39;sgradevole terribilmente amaro 6. Per tenere conto di varianza che non può essere spiegato con TAS2R38, la teoria è stata avanzata che potrebbe essere attribuito alla densità di FP sulla lingua 4. Come la ricerca gusto progrediva, il field è stato diviso in due scuole di pensiero in tutto questa teoria riguardanti il ​​ruolo di FP e sensibilità gusto amaro. Anche se molti studi corroborate la domanda principale che la densità FP è un fattore di PROP sensibilità 4,6,12,13, c&#39;è stato un piccolo, ma importante contingenza che ha trovato prove per confutare esso, riportando l&#39;incapacità di replicare il ruolo di 10, 14,15,16. Delwiche et al. (2001) ha avvertito che la tendenza è molto variabile; Densità FP fa conto non in maniera uniforme le differenze nella sensibilità amarezza tra i soggetti, ed era dimostrabile solo per i soggetti con almeno una sensibilità moderata a PROP 7. Oltre all&#39;uso della Miller &amp; Reedy metodo meno rigorosamente definita su come quantificare FP, è importante notare che, ad eccezione della progenie Beaver Dam Study 15 condotta da Fischer et al., La maggior parte degli studi precedenti avevano piccolo campione misure che possono anche contribuire a risultati inconsistenti suil ruolo di FP nel gusto. In breve, in Miller &amp; Reedy di carta metodologia seminale (1990), gli autori macchiati lingua blu da quantificare perché FP FP rimane rosa mentre papille filiformi assorbire il colorante e diventano blu. Essi classificati FP come &quot;arrotondate strutture rosa di circa 0,5 mm di diametro&quot; 2. Mentre gli autori informati che prima di utilizzare questo metodo per un ulteriore lavoro di analisi, le caratteristiche FP dovrebbero essere più strettamente definite e hanno concluso che la variazione già nota in letteratura &quot;potrebbe essere attribuibile a diverse popolazioni soggette, metodi diversi, e diversi ricercatori&quot; 2, il loro ricerca ha portato le caratteristiche comunemente accettati che FP sono intorno 17,18, grande 2, rosa o macchiato accendino 2, ed elevato 4. Preso alla lettera, queste caratteristiche appaiono molto semplice. Nelle Genetica del gusto Lab (GOT Lab o Lab), l&#39;uso del riunitohod è stata complicata da singoli tentativi dei marcatori a qualificare e dare priorità l&#39;importanza delle caratteristiche di cui sopra, quando alcuni, ma non tutti, le caratteristiche erano presenti. Queste complicazioni inclusi piccolo papille apparso rosa in mezzo a molto più grande papille; l&#39;intera lingua assorbire il colorante blu eliminando così classificazione basata sulla variazione di colore; papille oblungo invece di turno; e alette avendo nessuna variazione in elevazione, ognuno dei quali ha contribuito a marcatori segnalazione ampiamente varie conteggi FP della stessa immagine. Queste variazioni di analisi ci ha portato a rivedere la documentazione, al fine di individuare la soggettività, di individuare eventuali eccezioni alle caratteristiche FP comunemente accettati e, infine, elaborare un protocollo in modo preciso e oggettivo definire e segnare FP. Innanzitutto, forma FP è descritto in letteratura come arrotondato, fungo come struttura 17,18. Tuttavia, notevole eccezioneGli ioni sono stati menzionati. Miller sottolineato che il termine &quot;fungiform&quot; è improprio e che molti FP non sono a forma di fungo, ma può variare ampiamente in dimensioni e morfologia 18. Melis et al. (2013) ha descritto anche diversi papille che sono stati considerati &quot;distorta&quot;, dove il diametro FP in una direzione era almeno due deviazioni standard più lungo in un&#39;altra direzione 19. Inoltre, Cheng e Robinson hanno scoperto che quando si indica FP dalla colorazione, che variavano da cima piatta di forma allungata in apparenza 20. Prendendo atto delle eccezioni di cui sopra, la caratterizzazione di un FP essere rotondo e appare a forma di fungo una nozione molto ristretta. In secondo luogo, il colore FP è descritto come &quot;circoli rosa contro uno sfondo blu&quot; 7 dopo colorazione della lingua con il colorante blu. Sebbene colorazione accendino era il criterio più coerente FP tutta la letteratura non era ancora un qualificatore uniforme. Cheng &amp;<html> ; Robinson ha osservato che la FP non erano sempre leggermente macchiato, rendendo difficile l&#39;identificazione ed incerto 20. Sembra quindi che le lingue assorbono tintura in modo diverso e, mentre il contrasto è evidente in molte lingue, alcuni diventano interamente blu senza distinzione, mentre altri perdono immediatamente ogni traccia di colorante blu 21. La terza caratteristica, la dimensione FP, è stato abbastanza coerente tra le carte, che vanno da 0,5 mm a 0,97 millimetri 6,18. Nella letteratura Miller osservato che vi erano due intervalli di grandezza di papille sulla dorsale anteriore della lingua. Le papille con diametri maggiori erano principalmente fungiformi papille e conica, mentre le papille con un diametro più piccolo erano per lo più filiforme 18. Tuttavia, con l&#39;eccezione della Offspring Beaver Dam Study 21, formato non appariva per determinare se una struttura è un FP in letteratura, ma era prevista papille già classificato come &quot;fungiformi&quot;. _content &quot;&gt; Infine, elevazione è elencato come il quarto PQ caratteristica 4 anche se Miller ha sottolineato che distinzione tra filiformi e papille fungiformi è difficile quando si usa questo criterio vicino al margine della lingua. Ha dato due esempi di FP che varia notevolmente in elevazione, uno è 0,8 millimetri di altezza, mentre un altro è stato inferiore a 0,1 mm di altezza, ma aveva ancora due pori gusto che erano chiaramente osservati 18. Questa osservazione è stata anche seguiti e confermato da Shahbake et al. 4 Queste definizioni e le loro eccezioni riportate mostrano che il campo gusto ha da tempo riconosciuto l&#39;inconsistenza nel caratterizzare FP e le carenze del protocollo comunemente usato da Miller &amp; Reedy. Infatti, Miller &amp; Reedy esortato il campo per definire ulteriormente le caratteristiche di FP 2. Abbiamo ipotizzato che marcatori davano peso diverso alle caratteristiche e priorità della loro importanza in modo diverso quando papillae non è riuscito a soddisfare ogni criterio, ad esempio quando una papilla era grande e forma di fungo, ma macchiato blu. E &#39;stato motivato che gli investigatori degli studi precedentemente pubblicati probabilmente fatto lo stesso che, se combinati con campioni di piccole dimensioni, può spiegare i risultati variegati provenienti dall&#39;uso di questo metodo. Il governo di Taiwan Lab affrontato questa lacuna metodologica FP attraverso lo sviluppo di una linea guida che definisce ogni caratteristica utilizzando misurazioni oggettive e priorità le caratteristiche per indicare che prevale in analisi. Questo metodo è il tasto a dicotomica con caratteristiche chiare e distinte di FP per assicurare conteggi precisi e ripetibili da fotografie digitali della lingua Denver Papille Protocol (DPP),. DPP è un metodo proposto per standardizzare la Miller &amp; Cannavò metodo utilizzato in precedenza, eliminando in tal modo l&#39;interpretazione individuale e garantendo risultati più coerenti quando si analizza la densità FP. In questo modo, DPP può essere utilizzato per più fiducia determine il ruolo di FP nel gusto. Le immagini scattate lingua dei soggetti sono stati analizzati dagli scienziati cittadini (Cannoniere) del laboratorio che sono i veri soggetti di questo studio. Il nucleo della Lab di scienziati cittadino è composto da membri della comunità che vanno in età (anni) da 16 a metà degli anni &#39;80. Una relazione di valutazione sommativa commissionata dal Museo nel 2012 descrive cittadini scienziati come avere un forte interesse per la scienza e con due terzi dopo aver guadagnato una laurea in una disciplina scientifica 22. Cittadini scienziati candidati sono attualmente reclutati attraverso il passaparola, deve compilare con successo un processo di intervista con i volontari veterani al Museo, e sottoposti a un periodo di prova in mostra la salute permanente del Museo, Expedition salute, prima che abbiano la possibilità di fare domanda per una posizione in Lab. Una volta accettato nel laboratorio, gli scienziati dei cittadini sottoposti a una formazione di 12 settimane per ottenere la certificazione per l&#39;iscrizione soggetto umanos. A seguito di tale certificazione, sono in grado di prendere i moduli di formazione su varie tecniche di laboratorio (ad esempio conteggio papille, estrazione del DNA) e le certificazioni aggiuntive e misure di controllo di qualità regolare, questi scienziati cittadini hanno la possibilità di partecipare attivamente alla analisi dei dati. Scienziati Citizen volontariamente il loro tempo e non sono compensati per il loro contributo al Museo.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Image J</td>
			<td>National Institutes of Health</td>
			<td><a href="http://rsb.info.nih.gov/ij">http://rsb.info.nih.gov/ij</a></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Food dye, Deep Blue Shade</td>
			<td>Esco</td>
			<td>http://escofoods.com/blue-food-coloring.html</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Rayon Tipped OB/GYN Applicators</td>
			<td>Puritan</td>
			<td>25-808 1PR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Grade 1 Filter Paper</td>
			<td>Whatman</td>
			<td>Whatman No.: 1001-325</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coolpix P100 (10.3 megapixels) and P500 (12.1 megapixels)</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>http://imaging.nikon.com/lineup/coolpix/</td>
			<td>neither model appears to be available on the website any longer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paper Hand Towels</td>
			<td>Kleenex</td>
			<td>https://www.kleenex.com/HandTowelsDetail.aspx</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

denver papillae protocol for objective analysis of fungiform papillae

L&#39;obiettivo del protocollo è di Denver Papille utilizzare una chiave dicotomica per definire e dare priorità alle caratteristiche delle papille fungiformi (FP) per garantire punteggio coerente tra marcatori. Questo protocollo costruisce fuori di un bisogno che è sorto dagli ultimi due decenni di ricerche gusto utilizzando FP come proxy per la densità dei pori gusto. Densità FP è stato storicamente analizzati utilizzando Miller &amp; Reedy 1990 caratterizzazioni di loro morfologia: tondo, macchiato più leggero, ampio ed elevato. In questo lavoro, gli autori avvertiti che le definizioni rigorose di FP morfologia doveva essere descritte. Nonostante questo invito all&#39;azione, seguire la letteratura è stata scarsa, con maggior parte degli studi che continuano a citare Miller &amp; Cannavò del lavoro originale. Di conseguenza, i rapporti densità FP sono stati altamente variabile e, in combinazione con campioni di piccole dimensioni, possono contribuire alle conclusioni discordanti sul ruolo di FP nella sensibilità gusto. La genetica del gusto Lab esplorato questo apparente INCONcoerenza nel conteggio e ha scoperto che marcatori sono stati individualmente dando priorità l&#39;importanza di queste caratteristiche in modo diverso e non ha avuto una guida per quando una papilla avuto alcuni, ma non tutti, le qualità riportati di FP. Il risultato di questa soggettività è conteggi FP altamente variabili della stessa linguetta. Il Denver Papille protocollo è stato sviluppato per rimediare a questa conseguenza attraverso l&#39;uso di una chiave dicotomica che ulteriori definisce e dà la priorità alla importanza delle caratteristiche messe avanti da Miller &amp; Reedy. Il metodo proposto potrebbe contribuire a creare un modo standard per quantificare FP per i ricercatori nel campo del gusto e studi nutrizionali.

Ecco una fotografia rappresentativa segnato da due marcatori singoli quando si utilizza la Miller &amp; Reedy metodologia utilizzata per l&#39;identificazione FP sulla base degli standard di campo di turno, grande, rosa o macchiato più leggero, ed elevato, e quindi la stessa fotografia segnato da due marcatori utilizzando DPP. I conteggi indicati sono rappresentativi della elevata varianza osservata utilizzando il metodo originale rispetto alla varianza inferiore usando DPP. <img alt="Figura 4" src="/files/ftp_upload/52860/52860fig4.jpg" /> Figura 4:. Miller &amp; Cannavò quantificazione vs DPP Quantificazione L&#39;immagine a sinistra è rappresentativo di conteggi due marcatori &quot;utilizzando la Miller &amp; Reedy Method. L&#39;immagine a destra rappresenta due conteggi marcatori utilizzando DPP. Il rosso è capocannoniere 1, giallo è capocannoniere 2, Green è marcatori 1 &amp; 2. Affidabilità statistica dei DPP è stato precedentemente studiata utilizzando un modello lineare misto di valutare la variabilità 10. In breve, per generare i dati per valutare il ruolo DPP gioca nella coerenza dei punteggi, immagini quindici sono stati segnati due volte. Nel primo lotto dei punteggi, DPP marcatori ingenui utilizzato il metodo di Miller &amp; Reedy 2. I marcatori sono stati poi addestrati ad usare DPP e le immagini sono state individualmente rescored senza il passaggio consenso finale descritto nella sezione 2.7 dettagli Quality Control (Figura 5). Il set di dati punteggio FP è stato poi utilizzato nel modello misto per valutare le differenze combinate causa protocollo (Figura 6), la variabilità intra-marcatore e l&#39;interazione tra i due. Questo modello ha mostrato una differenza significativa nel punteggio quando si utilizza il metodo Miller &amp; Reedy rispetto al DPP (p-value &lt;1 x 10 -6) con DPP portando ad un conteggio superiore di 6.99 (SE = 0,99); 5,2% della variabilità nel punteggio è dovuto alla formazione, 25,9% a causa di capocannoniere, e il rimanente dovutoalla variabilità specifica all&#39;immagine 10. Avanti, per generare dati per determinare in-scorer variabilità, una serie di trenta immagini in ordine casuale sono stati segnati da 11 individui. All&#39;insaputa di marcatori, questa serie di immagini incluso tre immagini che sono state ripetute. Abbiamo osservato una drastica differenza nella variabilità punteggio confrontando immagini distinte versusrepeated immagini. <img alt="Figura 5" src="/files/ftp_upload/52860/52860fig5.jpg" /> Figura 5:. DPP-Naïve vs post DPP Formazione pannelli forniscono grafici a scatole di punteggi degli utenti su 15 immagini pre e post allenamento Denver Papille protocollo. Per ogni boxplot, debitamente compilata in cerchio indica la media, mentre un cerchio aperto indicano un outlier. <img alt="Figura 6" src="/files/ftp_upload/52860/52860fig6.jpg" /> Figura 6:. Variazione Scorer Varianza Il grigio rappresenta tegli varianza per i singoli marcatori prima di formazione DPP. Il nero è il DPP formazione stesso marcatore palo.

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Denver Papillae Protocol for Objective Analysis of Fungiform Papillae

Qui vi presentiamo un protocollo per misurare la densità fungiformi papilla da fotografie digitali. Questo metodo si basa priorità e parametri caratteristici oggettive nel lavoro descrittivo originale sul papille fungiformi da Miller &amp; Cannavò (1990).

Denver Papille protocollo per l&#39;analisi Obiettivo papille fungiformi

The goal of the Denver Papillae Protocol is to use a dichotomous key to define and prioritize the characteristics of fungiform papillae (FP) to ensure ...

denver-papillae-protocol-for-objective-analysis-of-fungiform-papillae

Research

JoVE Journal

Neuroscience

14.2K Views.  Denver Museum of Nature & Science.  Qui vi presentiamo un protocollo per misurare la densità fungiformi papilla da fotografie digitali. Questo metodo si basa priorità e parametri caratteristici oggettive nel lavoro descrittivo originale sul papille fungiformi da Miller & Cannavò (1990). 

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Isolation and Culture of Human Fungiform Taste Papillae Cells

Taste cells are highly specialized, with unique histological, molecular and physiological characteristics that permit detection of a wide range of simple stimuli and complex chemical molecules contained in foods. In human, individual fungiform papillae contain from zero to as many as 20 taste buds. There is no established protocol for culturing human taste cells, although the ability to maintain taste papillae cells in culture for multiple cell cycles would be of considerable utility for characterizing the molecular, regenerative, and functional properties of these unique sensory cells. Earlier studies of taste cells have been done using freshly isolated cells in primary culture, explant cultures from rodents, or semi-intact taste buds in tissue slices1,2,3,4. Although each of these preparations has advantages, the development of long-term cultures would have provided significant benefits, particularly for studies of taste cell proliferation and differentiation. Several groups, including ours, have been interested in the development and establishment of taste cell culture models. Most attempts to culture taste cells have reported limited viability, with cells typically not lasting beyond 3-5 d5,6,7,8. We recently reported on a successful method for the extended culture of rodent taste cells9. We here report for the first time the establishment of an in vitro culture system for isolated human fungiform taste papillae cells. Cells from human fungiform papillae obtained by biopsy were successfully maintained in culture for more than eight passages (12 months) without loss of viability. Cells displayed many molecular and physiological features characteristic of mature taste cells. Gustducin and phospholipase C &beta;2, (PLC-&beta;2) mRNA were detected in many cells by reverse transcriptase-polymerase chain reaction and confirmed by sequencing. Immunocytochemistry analysis demonstrated the presence of gustducin and PLC-&beta;2 expression in cultured taste cells. Cultured human fungiform cells also exhibited increases in intracellular calcium in response to appropriate concentrations of several taste stimuli indicating that taste receptors and at least some of the signalling pathways were present. These results sufficient indicate that taste cells from adult humans can be generated and maintained for at least eight passages. Many of the cells retain physiological and biochemical characteristics of acutely isolated cells from the adult taste epithelium to support their use as a model taste system. This system will enable further studies of the processes involved in proliferation, differentiation and function of mammalian taste receptor cells in an in vitro preparation.
Human fungiform taste papillae used for establishing human fungiform cell culture were donated for research following proper informed consent under research protocols that were reviewed and approved by the IRB committee. The protocol (#0934) was approved by Schulman Associates Institutional Review Board Inc., Cincinnati, OH. Written protocol below is based on published parameters reported by Ozdener et al. 201110.

We aimed to develop a reproducible protocol for isolating and maintaining long-term cultures of human fungiform taste papillae cells. Cells from human fungiform papillae obtained by biopsy were successfully maintained in culture for more than eight passages (12 months) without loss of viability.

Isolamento e la coltura di cellule umane Gusto papille fungiformi

Taste cells are highly specialized, with unique histological, molecular and physiological characteristics that permit detection of a wide range of simple ...

Ricerca

Neuroscienze

Visualization and Genetic Manipulation of Dendrites and Spines in the Mouse Cerebral Cortex and Hippocampus using In utero Electroporation

In utero electroporation (IUE) has become a powerful technique to study the development of different regions of the embryonic nervous system 1-5. To date this tool has been widely used to study the regulation of cellular proliferation, differentiation and neuronal migration especially in the developing cerebral cortex 6-8. Here we detail our protocol to electroporate in utero the cerebral cortex and the hippocampus and provide evidence that this approach can be used to study dendrites and spines in these two cerebral regions.
Visualization and manipulation of neurons in primary cultures have contributed to a better understanding of the processes involved in dendrite, spine and synapse development. However neurons growing in vitro are not exposed to all the physiological cues that can affect dendrite and/or spine formation and maintenance during normal development. Our knowledge of dendrite and spine structures in vivo in wild-type or mutant mice comes mostly from observations using the Golgi-Cox method 9. However, Golgi staining is considered to be unpredictable. Indeed, groups of nerve cells and fiber tracts are labeled randomly, with particular areas often appearing completely stained while adjacent areas are devoid of staining. Recent studies have shown that IUE of fluorescent constructs represents an attractive alternative method to study dendrites, spines as well as synapses in mutant / wild-type mice 10-11 (Figure 1A). Moreover in comparison to the generation of mouse knockouts, IUE represents a rapid approach to perform gain and loss of function studies in specific population of cells during a specific time window. In addition, IUE has been successfully used with inducible gene expression or inducible RNAi approaches to refine the temporal control over the expression of a gene or shRNA 12. These advantages of IUE have thus opened new dimensions to study the effect of gene expression/suppression on dendrites and spines not only in specific cerebral structures (Figure 1B) but also at a specific time point of development (Figure 1C).
Finally, IUE provides a useful tool to identify functional interactions between genes involved in dendrite, spine and/or synapse development. Indeed, in contrast to other gene transfer methods such as virus, it is straightforward to combine multiple RNAi or transgenes in the same population of cells. 
In summary, IUE is a powerful method that has already contributed to the characterization of molecular mechanisms underlying brain function and disease and it should also be useful in the study of dendrites and spines.

Visualization and Genetic Manipulation of Dendrites and Spines in the Mouse Cerebral Cortex and Hippocampus using In utero Electroporation

This article describes in detail a protocol to electroporate in utero the cerebral cortex and the hippocampus at E14.5 in mice. We also show that this is a valuable method to study dendrites and spines in these two cerebral regions.

Visualizzazione e manipolazione genetica di dendriti e spine nella corteccia cerebrale e nell&#39;ippocampo mouse utilizzando<em&gt; In utero</em&gt; Elettroporazione

In utero electroporation (IUE) has become a powerful technique to study the development of different regions of the embryonic nervous system 1-5. To date ...

Laser Capture Microdissection of Neurons from Differentiated Human Neuroprogenitor Cells in Culture

Neuroprogenitor cells (NPCs) isolated from the human fetal brain were expanded under proliferative conditions in the presence of epidermal growth factor (EGF) and fibroblast growth factor (FGF) to provide an abundant supply of cells. NPCs were differentiated in the presence of a new combination of nerve growth factor (NGF), brain-derived neurotrophic factor (BDNF), dibutyryl cAMP (DBC) and retinoic acid on dishes coated with poly-L-lysine and mouse laminin to obtain neuron-rich cultures. NPCs were also differentiated in the absence of neurotrophins, DBC and retinoic acid and in the presence of ciliary neurotrophic factor (CNTF) to yield astrocyte-rich cultures. Differentiated NPCs were characterized by immunofluorescence staining for a panel of neuronal markers including NeuN, synapsin, acetylcholinesterase, synaptophysin and GAP43. Glial fibrillary acidic protein (GFAP) and STAT3, astrocyte markers, were detected in 10-15% of differentiated NPCs. To facilitate cell-type specific molecular characterization, laser capture microdissection was performed to isolate neurons cultured on polyethylene naphthalate (PEN) membrane slides. The methods described in this study provide valuable tools to advance our understanding of the molecular mechanism of neurodegeneration.

Human neuroprogenitor cells (NPCs) were expanded under proliferating conditions. NPCs were differentiated into neuron-rich cultures in the presence of a combination of neurotrophins. Neuronal markers were detected by immunofluorescence staining. To isolate a pure population of neurons, NPCs were differentiated on PEN membrane slides and laser capture microdissection was performed.

Microdissezione laser di neuroni da cellule differenziate Neuroprogenitor umani in coltura

Neuroprogenitor cells (NPCs) isolated from the human fetal brain were expanded under proliferative conditions in the presence of epidermal growth factor ...

Measuring Oral Fatty Acid Thresholds, Fat Perception, Fatty Food Liking, and Papillae Density in Humans

Emerging evidence from a number of laboratories indicates that humans have the ability to identify fatty acids in the oral cavity, presumably via fatty acid receptors housed on taste cells. Previous research has shown that an individual&#39;s oral sensitivity to fatty acid, specifically oleic acid (C18:1) is associated with body mass index (BMI), dietary fat consumption, and the ability to identify fat in foods. We have developed a reliable and reproducible method to assess oral chemoreception of fatty acids, using a milk and C18:1 emulsion, together with an ascending forced choice triangle procedure. In parallel, a food matrix has been developed to assess an individual&#39;s ability to perceive fat, in addition to a simple method to assess fatty food liking. As an added measure tongue photography is used to assess papillae density, with higher density often being associated with increased taste sensitivity.

Oral chemoreception of fatty acids and the association with diet and fatty food preferences may enable the identification of mechanisms involved with the development of obesity and why dietary changes may be difficult for many individuals.

Misurazione orale acidi grassi Soglie, Fat Percezione, grasso alimentare Simpatia, e Papille densità di esseri umani

Emerging evidence from a number of laboratories indicates that humans have the ability to identify fatty acids in the oral cavity, presumably via fatty ...

Protocol for Three-dimensional Confocal Morphometric Analysis of Astrocytes

As glial cells in the brain, astrocytes have diverse functional roles in the central nervous system. In the presence of harmful stimuli, astrocytes modify their functional and structural properties, a condition called reactive astrogliosis. Here, a protocol for assessment of the morphological properties of astrocytes is presented. This protocol includes quantification of 12 different parameters i.e. the surface area and volume of the tissue covered by an astrocyte (astrocyte territory), the entire astrocyte including branches, cell body, and nucleus, as well as total length and number of branches, the intensity of fluorescence immunoreactivity of antibodies used for astrocyte detection, and astrocyte density (number/1,000 &#181;m2). For this purpose three-dimensional (3D) confocal microscopic images were created, and 3D image analysis software such as Volocity 6.3 was used for measurements. Rat brain tissue exposed to amyloid beta1-40 (A&#946;1-40) with or without a therapeutic&#160;intervention was used to present the method. This protocol can also be used for 3D morphometric analysis of other cells from either in vivo or in vitro conditions.

Astrocytes in the CNS change their functional and structural properties in response to harmful stimuli. This report presents a protocol for assessment of three-dimensional astrocyte morphology in diseased conditions or after therapeutic interventions.

Protocollo per tridimensionale confocale morfometrica Analisi di astrociti

As glial cells in the brain, astrocytes have diverse functional roles in the central nervous system. In the presence of harmful stimuli, astrocytes modify ...

Peering at Brain Polysomes with Atomic Force Microscopy

The translational machinery, i.e., the polysome or polyribosome, is one of the biggest and most complex cytoplasmic machineries in cells. Polysomes, formed by ribosomes, mRNAs, several proteins and non-coding RNAs, represent integrated platforms where translational controls take place. However, while the ribosome has been widely studied, the organization of polysomes is still lacking comprehensive understanding. Thus much effort is required in order to elucidate polysome organization and any novel mechanism of translational control that may be embedded. Atomic force microscopy (AFM) is a type of scanning probe microscopy that allows the acquisition of 3D images at nanoscale resolution. Compared to electron microscopy (EM) techniques, one of the main advantages of AFM is that it can acquire thousands of images both in air and in solution, enabling the sample to be maintained under near physiological conditions without any need for staining and fixing procedures. Here, a detailed protocol for the accurate purification of polysomes from mouse brain and their deposition on mica substrates is described. This protocol enables polysome imaging in air and liquid with AFM and their reconstruction as three-dimensional objects. Complementary to cryo-electron microscopy (cryo-EM), the proposed method can be conveniently used for systematically analyzing polysomes and studying their organization.

While ribosome structure has been extensively characterized, the organization of polysomes is still understudied. To overcome this lack of knowledge, we present here a detailed preparation protocol for accurate imaging of mammalian polysomes by atomic force microscopy (AFM) in air and liquid.

Scrutando Cervello polisomi con microscopia a forza atomica

The translational machinery, i.e., the polysome or polyribosome, is one of the biggest and most complex cytoplasmic machineries in cells. Polysomes, ...

Protocol for Isolating the Mouse Circle of Willis

The cerebral arterial circle (circulus arteriosus cerebri) or circle of Willis (CoW) is a circulatory anastomosis surrounding the optic chiasma and hypothalamus that supplies blood to the brain and surrounding structures. It has been implicated in several cerebrovascular disorders, including cerebral amyloid angiopathy (CAA)-associated vasculopathies, intracranial atherosclerosis and intracranial aneurysms. Studies of the molecular mechanisms underlying these diseases for the identification of novel drug targets for their prevention require animal models. Some of these models may be transgenic, whereas others will involve isolation of the cerebro-vasculature, including the CoW.The method described here is suitable for CoW isolation in any mouse lineage and has considerable potential for screening (expression of genes, protein production, posttranslational protein modifications, secretome analysis, etc.) studies on the large vessels of the mouse cerebro-vasculature. It can also be used for ex vivo studies, by adapting the organ bath system developed for isolated mouse olfactory arteries.

We describe here a reproducible protocol for isolating the mouse circle of Willis.

Protocollo per isolare il circolo di Willis mouse

The cerebral arterial circle (circulus arteriosus cerebri) or circle of Willis (CoW) is a circulatory anastomosis surrounding the optic chiasma and ...

An Objective and Reproducible Test of Olfactory Learning and Discrimination in Mice

Olfaction is the predominant sensory modality in mice and influences many important behaviors, including foraging, predator detection, mating, and parenting. Importantly, mice can be trained to associate novel odors with specific behavioral responses to provide insight into olfactory circuit function. This protocol details the procedure for training mice on a Go/No-Go operant learning task. In this approach, mice are trained on hundreds of automated trials daily for 2&#8211;4 weeks and can then be tested on novel Go/No-Go odor pairs to assess olfactory discrimination, or be used for studies on how odor learning alters the structure or function of the olfactory circuit. Additionally, the mouse olfactory bulb (OB) features ongoing integration of adult-born neurons. Interestingly, olfactory learning increases both the survival and synaptic connections of these adult-born neurons. Therefore, this protocol can be combined with other biochemical, electrophysiological, and imaging techniques to study learning and activity-dependent factors that mediate neuronal survival and plasticity.

Here, we train mice on an associative learning task to test odor discrimination. This protocol also allows for studies on learning-induced structural changes in the brain.

Una prova oggettiva e riproducibile di apprendimento olfattivo e discriminazione nei topi

Olfaction is the predominant sensory modality in mice and influences many important behaviors, including foraging, predator detection, mating, and ...

Where You Cut Matters: A Dissection and Analysis Guide for the Spatial Orientation of the Mouse Retina from Ocular Landmarks

Accurately and reliably identifying spatial orientation of the isolated mouse retina is important for many studies in visual neuroscience, including the analysis of density and size gradients of retinal cell types, the direction tuning of direction-selective ganglion cells, and the examination of topographic degeneration patterns in some retinal diseases. However, there are many different ocular dissection methods reported in the literature that are used to identify and label retinal orientation in the mouse retina. While the method of orientation used in such studies is often overlooked, not reporting how retinal orientation is determined can cause discrepancies in the literature and confusion when attempting to compare data between studies. Superficial ocular landmarks such as corneal burns are commonly used but have recently been shown to be less reliable than deeper landmarks such as the rectus muscles, the choroid fissure, or the s-opsin gradient. Here, we provide a comprehensive guide for the use of deep ocular landmarks to accurately dissect and document the spatial orientation of an isolated mouse retina. We have also compared the effectiveness of two s-opsin antibodies and included a protocol for s-opsin immunohistochemistry. Because orientation of the retina according to the s-opsin gradient requires retinal reconstruction with Retistruct software and rotation with custom code, we have presented the important steps required to use both of these programs. Overall, the goal of this protocol is to deliver a reliable and repeatable set of methods for accurate retinal orientation that is adaptable to most experimental protocols. An overarching goal of this work is to standardize retinal orientation methods for future studies.

This protocol provides a comprehensive dissection and analysis guide for the use of deep ocular landmarks, s-opsin immunohistochemistry, Retistruct, and custom code to accurately and reliably orient the isolated mouse retina in anatomical space.

Dove si taglia materia: Una dissezione e analisi guida per l'orientamento spaziale della Retina di topo da oculare luoghi d'interesse

Accurately and reliably identifying spatial orientation of the isolated mouse retina is important for many studies in visual neuroscience, including the ...

Chronic Implantation of Whole-cortical Electrocorticographic Array in the Common Marmoset

Electrocorticography (ECoG) allows the monitoring of electrical field potentials from the cerebral cortex with high spatiotemporal resolution. Recent development of thin, flexible ECoG electrodes has enabled conduction of stable recordings of large-scale cortical activity. We have developed a whole-cortical ECoG array for the common marmoset. The array continuously covers almost the entire lateral surface of cortical hemisphere, from the occipital pole to the temporal and frontal poles, and it captures whole-cortical neural activity in one shot. This protocol describes a chronic implantation procedure of the array in the epidural space of the marmoset brain. Marmosets have two advantages regarding ECoG recordings, one being the homologous organization of anatomical structures in humans and macaques, including frontal, parietal, and temporal complexes. The other advantage is that the marmoset brain is lissencephalic and contains a large number of complexes, which are more difficult to access in macaques with ECoG, that are exposed to the brain surface.These features allow direct access to most cortical areas beneath the surface of the brain. This system provides an opportunity to investigate global cortical information processing with high resolutions at a sub-millisecond order in time and millimeter order in space.

We have developed a whole-cortical electrocorticographic array for the common marmoset that continuously covers almost the entire lateral surface of cortex, from the occipital pole to the temporal and frontal poles. This protocol describes a chronic implantation procedure of the array in the epidural space of the marmoset brain.

Impianto cronico di tutto-corticale Electrocorticographic Array nel Marmoset comune

Electrocorticography (ECoG) allows the monitoring of electrical field potentials from the cerebral cortex with high spatiotemporal resolution. Recent ...