Yazarlar hiçbir bildirimleri yapmak için var.

Tüm yordamları kent tıbbi üniversite Konseyi hayvan bakımı Komitesi, Huazhong Üniversitesi bilim ve Teknoloji (Wuhan, Çin Halk Cumhuriyeti) tarafından kabul edildi. El yazması varış göre hazırlanmıştır (hayvan araştırma: In Vivo deneyler raporlama) yönergeleri6.
1. yetiştirme
<ol><li>Sprague-Dawley (SD) fareler kullanın (n = 20, 261-291 g ağırlığında 10 erkek, 8 haftalık, demek 272.85 ±9.07 g =) deneysel hayvan Merkezi Huazhong Üniversitesi bilim ve teknoloji ve bakımı ve kullanımı için rehber göre fareler korumak Laboratuvar hayvanlarının bize Ulusal Sağlık Enstitüsü tarafından (NIH yayın No.85-1996 revize 23,) yayınlandı</li>
	<li>Evin yiyecek ve içme suyu ücretsiz erişim standart koşullar altında. Fareler ahşap-tıraş ile 530 cm2 kafeslerde yatak takımları tutmak. Ev iki fareler her kafes içinde. Tüm kafesleri Oda ortamına (mikro-yalıtım veya havalandırılan caging) açık tut</li>
	<li>Deneysel iletişim kuralında yer alan personel, düzenli olarak fareler ele emin olun.</li>
	<li>Oda sıcaklık 21 ° C ve 23 ° c arasındaki sıcaklıklarda muhafaza Fiyatlar normal tuz diyet vermek (% 0,3 NaCl) çalışma boyunca.</li>
</ol>2. kan toplama yordamı
Not: Vakum kan toplama sistemi çift başlı iğne [22 G (0.7 mm x 25 mm)], plastik tutucu ve vakum tüpleri bu amaç ile kauçuk stoper (şekil 1) (2 mL) bir dizi oluşur.
<ol><li>Fareyi bir plastik yasaklama sahibi yerleştirin ve kuyruk herhangi bir görünür kir veya dışkı kaldırmak için sıcak (20-30 ° C) su ile yıkayın. Asistan kuyruk Genişletilmiş bir pozisyonda tutan iken, % 70 etanol ile kuyruk silin ve gazlı bez ile temizleyin ven yapmak için temiz.</li>
	<li>Bir pozisyonda yanal kuyruk damarlar (5 mm civarında) birini 22 G kelebek iğne ucunu takın yaklaşık 2-3 cm uzakta (Şekil 2) yaklaşık 20 ° açıyla kuyruk ucu. Kan vakum kan toplama tüpe (şekil 3) kelebek iğne kauçuk sonuna ekleyerek vakum toplama tüp içine toplamak. Not: 1.2 mL7maksimal koleksiyonu kan birimdir.</li>
	<li>Kan toplama sonra iğneyi çıkarın ve yavaşça kan akışını durdurmak 15-30 s için gazlı bez ile delik siteye basınç uygulayın. Sonra fare plastik yasaklama sahibinden yayın ve fareyi onun kafes için dönün.</li>
	<li>Kan plazması toplamak için bir antikoagülan olarak EDTA içeren tüpler kullanın. Yavaşça tüp birkaç kez kan antikoagülan karıştırın ve örnekleri buz üzerinde dikey olarak yerleştirmek için tersine çevirin.</li>
	<li>Plazma veya serum ayrı 10 min için 2.000 x g de soğutmalı santrifüj kan örnek koleksiyon tüplerde santrifüj kapasitesi.</li>
	<li>Plazma/serum, kırmızı ve beyaz kan hücresi katmanları bozmamaya dikkat çekici ayıklayın. Kan serumu toplamak için tüpler antikoagülan olmadan kullanın. Her iki tür örnek hemen kullanılan veya bir yıla kadar-80 ° C'de depolanan. Not: Başarılı kan toplama her zaman 1.2 mL kan alma olarak tanımlanmıştır. Maksimal ponksiyon zaman kuruldu toplam kan hacmi üçüncü delik sonra 1.2 mL düşük olsaydı üç denemeler için bu başarısız kan koleksiyonu olarak tanımlanmıştır. Örnekleme süresi kuyruk ven delik kelebek iğne kaldırıldıktan sonra kan toplama başlar.</li>
	<li>
İki hafta7içinde iki kez kan toplamak.
	<ol>
<li>Sınamak ve bu yöntemin fizibilite doğrulamak için bu kan toplama Protokolü gerçekleştirmeden önce iki tıp öğrencileri (yeni başlayanlar) için 2 h tren. 2 deneyimli arkadaşlar (deney grubu) tarafından 10 Rat ve 2 tıp öğrencileri (acemi grubu) tarafından 10 Rat kan ve yirmi fareler kullanın.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. istatistiksel analiz
<ol><li>Verileri ortalama değer ± standart sapma olarak ifade ve SPSS istatistik 17 ile analiz. Bir α değeri 0,05 seçildi, bu nedenle p < 0,05 olarak istatistiksel olarak anlamlı kabul.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Brown, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+collection+from+the+tail+of+a+rat.">Blood collection from the tail of a rat.</a> Lab Anim (NY). 35 (8), 24-25 (2006).</li><li>Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+sample+collection+in+small+laboratory+animals.">Blood sample collection in small laboratory animals.</a> J Pharmacol Pharmacother. 1 (2), 87-93 (2010).</li><li>Staszyk, C., Bohnet, W., Gasse, H., Hackbarth, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+vessels+of+the+rat+tail:+a+histological+re-examination+with+respect+to+blood+vessel+puncture+methods.">Blood vessels of the rat tail: a histological re-examination with respect to blood vessel puncture methods.</a> Lab Anim. 37 (2), 121-125 (2003).</li><li>Lee, G., Goosens, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sampling+blood+from+the+lateral+tail+vein+of+the+rat.">Sampling blood from the lateral tail vein of the rat.</a> J. Vis. Exp. (99), (2015).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> WHO Guidelines on Drawing Blood: Best Practices in Phlebotomy WHO Guidelines Approved by the Guidelines Review Committee. , (2010).</li><li>Kilkenny, C., Altman, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improving+bioscience+research+reporting:+ARRIVE-ing+at+a+solution.">Improving bioscience research reporting: ARRIVE-ing at a solution.</a> Lab Anim. 44 (4), 377-378 (2010).</li><li>Diehl, K. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+good+practice+guide+to+the+administration+of+substances+and+removal+of+blood,+including+routes+and+volumes.">A good practice guide to the administration of substances and removal of blood, including routes and volumes.</a> J Appl Toxicol. 21 (1), 15-23 (2001).</li><li>Eder, J. M., Cutter, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+device+for+collecting+cord+blood.">A new device for collecting cord blood.</a> Obstet Gynecol. 86 (5), 850-852 (1995).</li><li>Reynolds, B. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+a+new+device+for+blood+sampling+in+cats+with+a+vacuum+tube+collection+system+-+plasma+biochemistry,+haematology+and+practical+usage+assessment.">Comparison of a new device for blood sampling in cats with a vacuum tube collection system - plasma biochemistry, haematology and practical usage assessment.</a> J Feline Med Surg. 9 (5), 382-386 (2007).</li><li>Wiwanitkit, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+blood+specimens+from+plain+and+gel+vacuum+blood+collection+tubes.">Comparison of blood specimens from plain and gel vacuum blood collection tubes.</a> J Med Assoc Thai. 84 (5), 723-726 (2001).</li><li>Wollowitz, A., Bijur, P. E., Esses, D., John Gallagher, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+butterfly+needles+to+draw+blood+is+independently+associated+with+marked+reduction+in+hemolysis+compared+to+intravenous+catheter.">Use of butterfly needles to draw blood is independently associated with marked reduction in hemolysis compared to intravenous catheter.</a> Acad Emerg Med. 20 (11), 1151-1155 (2013).</li></ol>

Yazarlar ifşa yoktur

Mevcut rapor Sıçanlarda bir öğrenmek kolay kan toplama yöntemini açıklar. Sonuçlarımız bu yöntem art arda sıçanlarından emir kan büyük miktarda toplamak için uygun olduğunu gösterdi. Ayrıca, bu yöntem kolayca kısa vadeli bir öğrenme eğrisi ile hakim. Bu yordam anestezi Rat gerçekleştirilebilir ve sadece hayvanlar için en az stres neden olur.
Kan üzerinden çeşitli yerlerde sıçanlar toplanabilir. Kuyruk damar kan örnekleme4için üstün bir konumdur. Ancak, her zaman yeterli kan hacmi ince ve düşük kan akışı kuyruk ven Rats'in elde etmek kolay değil. Vakum kan toplama sistemi genellikle günlük klinik pratikte hastalardan kan örnekleri toplamak için kullanılır. Bu vakum kan toplama sistemi hastalar ve araştırma hayvanlar için uzun süre8,9,10kullanılmıştır. Bu sistem bir vakum kan toplama tüp silikon kaplamalı iç tüp duvar ve kelebek iğne ile oluşur. Bu vakum negatif basınç ilkesine dayanıyordu ve kan da kirlenme ve hemoliz11olasılığını azaltır kan toplama, riski olmadan sürekli çiziminin sağlar. Kateter kan örneğinde yaklaşık 0.3 mL birimdir. İğne kuyruğu damar geri çekilmesi toplama Vakum tüplü vakum nedeniyle içine kateter bloke kan akacak. Bu yöntem aynı zamanda daha küçük bir delik iğne kullanımı ile daha az 100 gr ağırlığında fareler gelen kan toplamak için geçerlidir.
Bu kan toplama yöntemi birçok avantajı vardır. Bu yordam yalnızca en az yaralanma için fareler neden olur ve kan toplama anestezi kullanmadan yapılabilir, böylece kan örneği üzerinde stres tepkisi ve anestezi etkisi önlenebilir. Gözlemlerimiz fareler işlem sırasında plastik yasaklama tutucu sessiz edildi ve bu deneyler sırasında ölüm yok olduğunu gösterdi. İkincisi, tekrarlanan kan toplama her bir veya iki gün mümkün, çeşitli araştırma amaçlı sık örnekleme kan ile yeterli bir güç sağlar. Son olarak, bu yöntem öğrenmesi kolay ve kolayca yeni başlayanlar tarafından kısa (2 h) öğrenim süresinden sonra benzer başarı oranları ve ponksiyon kez bu raporda deneysel ve acemi gruplar arasında gösterildiği gibi hakim olmuş oldu. Bir önceki raporda, Lee ve ark. fare4yanal kuyruk damardan kan örnekleme, benzer bir yöntem gösterdi. Bizim yöntem Lee ve ark. tarafından bildirilen daha kolaydır 4 biz doğrudan kuyruk ven ve tüp diğer ucunu ponksiyon iğnesi eklemek o doğrudan bağlı kan, ilave bir şırınga kullanımı ve kan el ile aspirasyon olmadan ve gerek kalmadan toplamak için Vakum tüplü ' süt Ing' damar kan akışını kolaylaştırmak için. Bu kapalı sistem ile kan toplama kan kontaminasyon riskini azaltır. Plastik yasaklama tutucu kullanımı da fare stresi azaltır ve kuyruk fiksasyonu kolaylaştırır.
Aşağıdaki iki adımı bu yöntem başarılı uygulama için önemlidir. 1) kuyruk genişletmek ve kuyruk hareketi önlemek; 2) hafifçe ven ponksiyon yoluyla ven kaçının ve ponksiyon iğne damar içinde tutmak için 20 ° açılı delmek.
Sonuç olarak, kabul edilen vakum kan toplama yöntemi Sıçanlarda güvenli, uygun ve kolay uygulama. Bu yöntem, Sigara anestezi sıçanlarından emir elde bir yeterli kan hacmi ile kan sık örnekleme sağlar.

Kan örnekleme fareler üzerinden çok çeşitli deneysel çalışmalar için gereklidir. Teknikleri için fareyi koleksiyonundan kan delik kalp, retro-orbital pleksus, juguler ven, Safen ven, kuyruk kan damarları, Karotid arter, abdominal aort ve vena kava içerir. (Safen ven ve kuyruk kan damarı ponksiyon) hariç çoğu teknikleri anestezi1,2gerektirir. Damarlar sıçan kuyruk rutin kan örnekleme ve vasküler enjeksiyon için delmiş. Hatta fareler imzalat3kuyruk sıcak su ile tedavi sonra kan damarlarının de dilate ve manipülasyon için uygun vardır.
Kan örnekleri küçük laboratuvar hayvanları2elde etmek için yeni ve gelişmiş teknikleri geliştirme rağmen her zaman ne zaman küçük hayvanlardan örnekleme yeterince kan elde etmek kolay değildir. Sıçan kuyruğu damar kan örnekleme4için üstün bir konumdur. Ancak, kuyruk ven ince, böylece bazen ponksiyon zordur ve onun düşük kan akımı nedeniyle yeterince kan almak için uzun bir zaman alacağını. Kan toplama bir vakum ekstraksiyon tüp sistemi üzerinden günlük klinik pratikte tipik bir yöntemdir. Bu kapalı sistem toplama kan kan doğrudan maruz kalma riskini azaltır ve birden çok örneği bir tek iz5kolaylaştırdı. Mevcut rapor içinde sigara anestezi rats vakum ekstraksiyon tüp sistemi kullanarak basit kuyruk damar kan örnekleme yöntemi açıklanır. Bu yöntem kolay usta ve kan Sıçanlarda art arda büyük miktarda elde etmek için kullanılabilir.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="634">
	<tbody>
		<tr height="71">
			<td height="71" style="height:71px;width:192px;">a double-pointed needle</td>
			<td style="width:244px;">Shanghai Kang Nong medical instrument co., LTD, China</td>
			<td style="width:120px;">22G&#160;</td>
			<td style="width:79px;">(0.7&#215;25mm)</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:192px;">vacuum tubes</td>
			<td style="width:244px;">Wuhan Zhi Yuan, medical science and technology co., LTD, China</td>
			<td style="width:120px;">2 ml</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:192px;">rat restraining holder&#160;</td>
			<td style="width:244px;">Shanghai Kang Nong medical instrument co., LTD, China</td>
			<td style="width:120px;">250g rat hoder model</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="140">
			<td height="140" style="height:140px;width:192px;">normal salt diet for rats</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td style="width:79px;">Rats received a normal salt diet (0.3% NaCl) throughout the study</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:192px;">SPSS software for statistical analysis</td>
			<td>SPSS Inc,&#160; Chicago; USA&#160;</td>
			<td style="width:120px;">Version 17.0.&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

repeated blood collection from tail vein of non-anesthetized rats with a vacuum blood collection system

Kan üzerinden örnekleme yerlerden de, fareler toplanabilir. Örneğin, kuyruk damar kan örnekleme için üstün bir konumdur. Ancak, böylece bazen ponksiyon zordur kuyruk ven incedir. Buna ek olarak, kuyruk ven düşük kan akışı ve yeterli kan almak için uzun örnekleme süresi gerekir. Mevcut rapor basit kan örnekleme yöntemi, genellikle burada sigara anestezi sıçanlara kullanılan hastalardan kan örneklerini almak için kullanılan vakum kan toplama yöntemi açıklanır. 22 G kelebek iğne ucu yaklaşık 2-3 cm yaklaşık 20 ° ve kan açılı kuyruk ucu vakum toplama tüp va kelebek iğne kauçuk sonuna ekleyerek toplanan yanal kuyruk damarlar birinin içine eklenmiş cuum kan toplama tüp. Mevcut deneysel sonuç başarı oranı % 95'deney grubu ve başlangıç grubunda % 90'ı olduğunu göstermek. Başarı oranı ve ponksiyon süreleri iki grup arasında benzer idi. Örnekleme süresi önemli ölçüde deneysel grup acemi grubuna göre daha kısa. Sonuç olarak, bu vakum kan toplama için sıralı kan örnekleme non - imzalat sıçan kuyruk damardan diğer güvenilir bir alternatif geleneksel kan örnekleme teknikleri için kullanılan hangi hizmet olabilir mümkün ve kolay öğrenmek, yöntemidir fareler.

Örnekleme süresi, vücut kitle ve iki grup kan toplama hacmi Kan her grupta iki hafta içinde iki kez 10 Rat (5 erkek) toplanmıştır. Her iki grup halinde ortalama vücut kitle benzer (272.00 ±9.66 g ve 273.70 ±8.87 g). Örnekleme süresi önemli ölçüde deneysel grup acemi grubuna kıyasla daha kısa (2.77 ±0.53 min 3.28 ±0.83 dakika, p vs < 0,05) (Tablo 1).
Başarı oranı ve kez iki grubun ponksiyon Başarı oranı % 95'i (19/20) deneysel grubunda ve %90 (18/20) Başlangıç grubunda yapıldı (p > 0.05). Ponksiyon kez iki grup arasında önemli ölçüde farklı değildi (1,50 ±0.61 min vs 1,85 ±0.75 dakika, p > 0.05) (Tablo 2). Bu sonuçları bu yöntemi öğrenmek kolaydır ve teknik eğitim için 2 h sonra hakim gösterir.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55852/55852fig1.jpg"> Resim 1 : 2 mL vakumlu kan toplama tüp (solda); 22 G kelebek iğne (Merkezi); plastik yasaklama tutucu (sağda). <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/55852/55852fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55852/55852fig2.jpg"> Resim 2 : İğne ucu yanal kuyruk damar içine (yaklaşık 5 mm) konumunda eklenmiş yaklaşık 20 ° açıyla kuyruk ucu uzak yaklaşık 2-3 cm. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/55852/55852fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55852/55852fig3.jpg"> Şekil 3 : Başarılı iz. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/55852/55852fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td colspan="5">Deney grubu</td>
			<td></td>
			<td colspan="5">Acemi grup</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td>Cinsiyet</td>
			<td>Vücut ağırlığı (g)</td>
			<td>Toplanan kan hacmi (mL)</td>
			<td>örnekleme süresi (dk)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Cinsiyet</td>
			<td>Vücut ağırlığı (g)</td>
			<td>Toplanan kan hacmi (mL)</td>
			<td>örnekleme süresi (dk)</td>
		</tr>
<tr>
<td>E1-1</td>
			<td>Erkek</td>
			<td>291</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.12</td>
			<td></td>
			<td>B1-1</td>
			<td>Erkek</td>
			<td>282</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.18</td>
		</tr>
<tr>
<td>E1-2</td>
			<td>Erkek</td>
			<td>291</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.73</td>
			<td></td>
			<td>B1-2</td>
			<td>Erkek</td>
			<td>282</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.18</td>
		</tr>
<tr>
<td>E2-1</td>
			<td>Erkek</td>
			<td>276</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.3</td>
			<td></td>
			<td>B2-1</td>
			<td>Erkek</td>
			<td>264</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3,73</td>
		</tr>
<tr>
<td>E2-2</td>
			<td>Erkek</td>
			<td>276</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.37</td>
			<td></td>
			<td>B2-2</td>
			<td>Erkek</td>
			<td>264</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.47</td>
		</tr>
<tr>
<td>E3-1</td>
			<td>Erkek</td>
			<td>267</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.73</td>
			<td></td>
			<td>B3-1</td>
			<td>Erkek</td>
			<td>265</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.52</td>
		</tr>
<tr>
<td>E3-2</td>
			<td>Erkek</td>
			<td>267</td>
			<td>1.0</td>
			<td>3.88</td>
			<td></td>
			<td>B3-2</td>
			<td>Erkek</td>
			<td>265</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.53</td>
		</tr>
<tr>
<td>E4-1</td>
			<td>Erkek</td>
			<td>263</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2,41</td>
			<td></td>
			<td>B4-1</td>
			<td>Erkek</td>
			<td>289</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.32</td>
		</tr>
<tr>
<td>E4-2</td>
			<td>Erkek</td>
			<td>263</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.52</td>
			<td></td>
			<td>B4-2</td>
			<td>Erkek</td>
			<td>289</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.62</td>
		</tr>
<tr>
<td>E5-1</td>
			<td>Erkek</td>
			<td>265</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3,61</td>
			<td></td>
			<td>B5-1</td>
			<td>Erkek</td>
			<td>277</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3,48</td>
		</tr>
<tr>
<td>E5-2</td>
			<td>Erkek</td>
			<td>265</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.42</td>
			<td></td>
			<td>B5-2</td>
			<td>Erkek</td>
			<td>277</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.12</td>
		</tr>
<tr>
<td>E6-1</td>
			<td>Erkek</td>
			<td>285</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3,33</td>
			<td></td>
			<td>B6-1</td>
			<td>Erkek</td>
			<td>274</td>
			<td>0,9</td>
			<td>4,87</td>
		</tr>
<tr>
<td>E6-2</td>
			<td>Erkek</td>
			<td>285</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.03</td>
			<td></td>
			<td>B6-2</td>
			<td>Erkek</td>
			<td>274</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.37</td>
		</tr>
<tr>
<td>E7-1</td>
			<td>Erkek</td>
			<td>271</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2,82</td>
			<td></td>
			<td>B7-1</td>
			<td>Erkek</td>
			<td>268</td>
			<td>1.0</td>
			<td>3,93</td>
		</tr>
<tr>
<td>E7-2</td>
			<td>Erkek</td>
			<td>271</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.42</td>
			<td></td>
			<td>B7-2</td>
			<td>Erkek</td>
			<td>268</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.82</td>
		</tr>
<tr>
<td>E8-1</td>
			<td>Erkek</td>
			<td>268</td>
			<td>1.2</td>
			<td>1.93</td>
			<td></td>
			<td>B8-1</td>
			<td>Erkek</td>
			<td>262</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2,07</td>
		</tr>
<tr>
<td>E8-2</td>
			<td>Erkek</td>
			<td>268</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3,05</td>
			<td></td>
			<td>B8-2</td>
			<td>Erkek</td>
			<td>262</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3,67</td>
		</tr>
<tr>
<td>E9-1</td>
			<td>Erkek</td>
			<td>273</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.52</td>
			<td></td>
			<td>B9-1</td>
			<td>Erkek</td>
			<td>281</td>
			<td>1.2</td>
			<td>4.38</td>
		</tr>
<tr>
<td>E9-2</td>
			<td>Erkek</td>
			<td>273</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3,17</td>
			<td></td>
			<td>B9-2</td>
			<td>Erkek</td>
			<td>281</td>
			<td>1.2</td>
			<td>4.57</td>
		</tr>
<tr>
<td>E10-1</td>
			<td>Erkek</td>
			<td>261</td>
			<td>1.2</td>
			<td>1,82</td>
			<td></td>
			<td>B10-1</td>
			<td>Erkek</td>
			<td>275</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.53</td>
		</tr>
<tr>
<td>E10-2</td>
			<td>Erkek</td>
			<td>261</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3,25</td>
			<td></td>
			<td>B10-2</td>
			<td>Erkek</td>
			<td>275</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.28</td>
		</tr>
<tr>
<td>Ortalama</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>2,77</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>3,28</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="11">Tr-1: ilk kan toplama için deneysel grubundaki fareleri seri numarası.</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="11">En-2: deney grubu ikinci kan koleksiyonu için de, fareler seri numarası.</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="11">Bn-1: ilk kan toplama için Başlangıç grubundaki fareleri seri numarası.</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="11">Bn-2: ikinci kan toplama için Başlangıç grubundaki fareleri seri numarası.</td>
		</tr>
</tbody></table>Tablo 1: Kan sonuçlarını deney grubu hem de başlangıç grubunda toplanan.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td></td>
			<td>Kan toplama kez</td>
			<td>Ortalama ponksiyon kez</td>
			<td>Bir zaman delik</td>
			<td>İki kez ponksiyon</td>
			<td>Üç kez ponksiyon</td>
			<td>Başarısız oldu</td>
			<td>Başarı oranı</td>
		</tr>
<tr>
<td>Deney grubu</td>
			<td>20</td>
			<td>1,50 ±0.61</td>
			<td>11</td>
			<td>8</td>
			<td>0</td>
			<td>1</td>
			<td>% 95</td>
		</tr>
<tr>
<td>Acemi grup</td>
			<td>20</td>
			<td>1,85 ±0.75</td>
			<td>7</td>
			<td>9</td>
			<td>2</td>
			<td>2</td>
			<td>% 90</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="6">Bir zaman ponksiyon: başarılı kan toplandıktan sonra ilk ponksiyon farelerle sayısı</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="6">İki kez ponksiyon: başarılı kan toplandıktan sonra ikinci delik farelerle sayısı</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="6">Üç kez ponksiyon: başarılı kan toplandıktan sonra üçüncü delik farelerle sayısı</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="5">Başarısız oldu: başarısız kan toplandıktan sonra üçüncü delik farelerle olan</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
</tbody></table>Tablo 2: Karşılaştırma ponksiyon kez ve deney grubu ve acemi grup başarı oranları.

Watch this Scientific Journal Video about Repeated Blood Collection from Tail Vein of Non-Anesthetized Rats with a Vacuum Blood Collection System at JoVE.com

Repeated Blood Collection from Tail Vein of Non-Anesthetized Rats with a Vacuum Blood Collection System

Burada, bir vakum ekstraksiyon tüp sistemi kullanarak olmayan anestezi Sıçanlarda basit kuyruk damar kan örnekleme yöntemi açıklanmaktadır. Bu yöntem kan doğrudan maruz kalma riskini azaltır ve tek bir iz birden çok örnekleri alarak basitleştirir.

Kuyruk damar anestezi sıçan bir vakum kan toplama sistemi ile kan koleksiyonundan tekrarlanan

Blood can be collected from rats in a number of sampling locations. For instance, the tail vein is a superior location for blood sampling. However, the ...

repeated-blood-collection-from-tail-vein-non-anesthetized-rats-with

Research

JoVE Journal

Medicine

35.4K Görüntüleme.  Jianghan University. Burada, bir vakum ekstraksiyon tüp sistemi kullanarak olmayan anestezi Sıçanlarda basit kuyruk damar kan örnekleme yöntemi açıklanmaktadır. Bu yöntem kan doğrudan maruz kalma riskini azaltır ve tek bir iz birden çok örnekleri alarak basitleştirir.

Video: Repeated Blood Collection from Tail Vein of Non-Anesthetized Rats with a Vacuum Blood Collection System

Collection Protocol for Human Pancreas

This dissection and sampling procedure was developed for the Network for Pancreatic Organ Donors with Diabetes (nPOD) program to standardize preparation of pancreas recovered from cadaveric organ donors. The pancreas is divided into 3 main regions (head, body, tail) followed by serial transverse sections throughout the medial to lateral axis. Alternating sections are used for fixed paraffin and fresh frozen blocks and remnant samples are minced for snap frozen sample preparations, either with or without RNAse inhibitors, for DNA, RNA, or protein isolation. The overall goal of the pancreas dissection procedure is to sample the entire pancreas while maintaining anatomical orientation.
Endocrine cell heterogeneity in terms of islet composition, size, and numbers is reported for human islets compared to rodent islets 1. The majority of human islets from the pancreas head, body and tail regions are composed of insulin-containing &beta;-cells followed by lower proportions of glucagon-containing &alpha;-cells and somatostatin-containing &delta;-cells. Pancreatic polypeptide-containing PP cells and ghrelin-containing epsilon cells are also present but in small numbers. In contrast, the uncinate region contains islets that are primarily composed of pancreatic polypeptide-containing PP cells 2. These regional islet variations arise from developmental differences. The pancreas develops from the ventral and dorsal pancreatic buds in the foregut and after rotation of the stomach and duodenum, the ventral lobe moves and fuses with the dorsal 3. The ventral lobe forms the posterior portion of the head including the uncinate process while the dorsal lobe gives rise to the rest of the organ. Regional pancreatic variation is also reported with the tail region having higher islet density compared to other regions and the dorsal lobe-derived components undergoing selective atrophy in type 1 diabetes4,5.
Additional organs and tissues are often recovered from the organ donors and include pancreatic lymph nodes, spleen and non-pancreatic lymph nodes. These samples are recovered with similar formats as for the pancreas with the addition of isolation of cryopreserved cells. When the proximal duodenum is included with the pancreas, duodenal mucosa may be collected for paraffin and frozen blocks and minced snap frozen preparations.

This video demonstrates a dissection procedure for processing human pancreas into multiple storage formats. Anatomical orientation is maintained throughout the pancreatic regions to allow definition of regional islet composition and density.

İnsan Pankreas için Toplama Protokolü

This dissection and sampling procedure was developed for the Network for Pancreatic Organ Donors with Diabetes (nPOD) program to standardize preparation ...

Tıp

Dried Blood Spot Collection of Health Biomarkers to Maximize Participation in Population Studies

Biomarkers are directly-measured biological indicators of disease, health, exposures, or other biological information. In population and social sciences, biomarkers need to be easy to obtain, transport, and analyze. Dried Blood Spots meet this need, and can be collected in the field with high response rates. These elements are particularly important in longitudinal study designs including interventions where attrition is critical to avoid, and high response rates improve the interpretation of results. Dried Blood Spot sample collection is simple, quick, relatively painless, less invasive then venipuncture, and requires minimal field storage requirements (i.e.&#160;samples do not need to be immediately frozen and can be stored for a long period of time in a stable freezer environment before assay). The samples can be analyzed for a variety of different analytes, including cholesterol, C-reactive protein, glycosylated hemoglobin, numerous cytokines, and other analytes, as well as provide genetic material. DBS collection is depicted as employed in several recent studies.

Biomarkers are directly-measured biological indicators of disease or health. In population and social sciences, biomarkers need to be easy to obtain, transport, and analyze. Dried Blood Spot (DBS) collection meets this need, can be collected in the field with high response rates&#160;and analyzed for a variety of biomarkers.

Sağlık Biyomarkörler Kan Toplama Noktası Nüfus Etütleri Katılımını özdeyiş Kurutulmuş

Biomarkers are directly-measured biological indicators of disease, health, exposures, or other biological information. In population and social sciences, ...

Collection, Isolation, and Flow Cytometric Analysis of Human Endocervical Samples

Despite the public health importance of mucosal pathogens (including HIV), relatively little is known about mucosal immunity, particularly at the female genital tract (FGT). Because heterosexual transmission now represents the dominant mechanism of HIV transmission, and given the continual spread of sexually transmitted infections (STIs), it is critical to understand the interplay between host and pathogen at the genital mucosa. The substantial gaps in knowledge around FGT immunity are partially due to the difficulty in successfully collecting and processing mucosal samples. In order to facilitate studies with sufficient sample size, collection techniques must be minimally invasive and efficient. To this end, a protocol for the collection of cervical cytobrush samples and subsequent isolation of cervical mononuclear cells (CMC) has been optimized. Using ex vivo flow cytometry-based immunophenotyping, it is possible to accurately and reliably quantify CMC lymphocyte/monocyte population frequencies and phenotypes. This technique can be coupled with the collection of cervical-vaginal lavage (CVL), which contains soluble immune mediators including cytokines, chemokines and anti-proteases, all of which can be used to determine the anti- or pro-inflammatory environment in the vagina.

The use of cytobrush sampling to collect lymphocytes and monocytes from the endocervix is a minimally invasive technique that provides samples for analysis of female genital tract immunity. In this protocol, we describe the collection of cytobrush samples and immune cell isolation for flow cytometry assays.

Toplama, İzolasyon, ve İnsan endoservikal Akışı Sitometrik Analizi

Despite the public health importance of mucosal pathogens (including HIV), relatively little is known about mucosal immunity, particularly at the female ...

Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

Clinically, thrombolytic therapy with use of recombinant tissue plasminogen activator (tPA) remains the most effective treatment for acute ischemic stroke. However, the use of tPA is limited by its narrow therapeutic window and by increased risk of hemorrhagic transformation. There is an urgent need to develop suitable stroke models to study new thrombolytic agents and strategies for treatment of ischemic stroke. At present, two major types of ischemic stroke models have been developed in rats and mice: intraluminal suture MCAO and embolic MCAO. Although MCAO models via the intraluminal suture technique have been widely used in mechanism-driven stroke research, these suture models do not mimic the clinical situation and are not suitable for thrombolytic studies. Among these models, the embolic MCAO model closely mimics human ischemic stroke and is suitable for preclinical investigation of thrombolytic therapy. This embolic model was first developed in rats by Overgaard et al.1 in 1992 and further characterized by Zhang et al. in 19972. Although embolic MCAO has gained increasing attention, there are technical problems faced by many laboratories. To meet increasing needs for thrombolytic research, we present a highly reproducible model of embolic MCAO in the rat, which can develop a predictable infarct volume within the MCA territory. In brief, a modified PE-50 tube is gently advanced from the external carotid artery (ECA) into the lumen of the internal carotid artery (ICA) until the tip of the catheter reaches the origin of the MCA. Through the catheter, a single homologous blood clot is placed at the origin of the MCA. To identify the success of MCA occlusion, regional cerebral blood flow was monitored, neurological deficits and infarct volumes were measured. The techniques presented in this paper should help investigators to overcome technical problems for establishing this model for stroke research.

Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

In this paper, we demonstrate a standard method for producing an embolic middle cerebral artery occlusion with homologous blood clots (fibrin-rich) in adult rat. This model closely mimics human ischemic stroke and is suitable for preclinical study of thrombolytic therapy for ischemic stroke.

Sıçanlar Homolog Kan pıhtısı ile İskemik İnme emboli Orta Serebral Arter Tıkanıklığı (MCAO)

Clinically, thrombolytic therapy with use of recombinant tissue plasminogen activator (tPA) remains the most effective treatment for acute ischemic ...

Routine Screening Method for Microparticles in Platelet Transfusions

Platelet inventory management based on screening microparticle content in platelet concentrates is a new quality improvement initiative for hospital blood banks. Cells fragment off microparticles (MP) when they are stressed. Blood and blood components may contain cellular fragments from a variety of cells, most notably from activated platelets. When performing their roles as innate immune cells and major players in coagulation and hemostasis, platelets change shape and generate microparticles. With dynamic light scattering (DLS)-based microparticle detection, it is possible to differentiate activated (high microparticle) from non-activated (low microparticle) platelets in transfusions, and optimize the use of this scarce blood product. Previous research suggests that providing non-activated platelets for prophylactic use in hematology-oncology patients could reduce their risk of becoming refractory and improve patient care. The goal of this screening method is to routinely differentiate activated from non-activated platelets. The method described here outlines the steps to be performed for routine platelet inventory management in a hospital blood bank: obtaining a sample from a platelet transfusion, loading the sample into the capillary for DLS measurement, performing the DLS test to identify microparticles, and using the reported microparticle content to identify activated platelets.

Platelet inventory management based on screening microparticle content in platelet concentrates is a new quality improvement initiative in hospital blood banks. The goal is to differentiate activated from non-activated platelets to optimize the use of platelets. Providing non-activated platelets to hematology-oncology patients might reduce their high risk to become refractory.

Trombosit transfüzyonları Microparticles için yöntem eleme rutin

Platelet inventory management based on screening microparticle content in platelet concentrates is a new quality improvement initiative for hospital blood ...

Subclavian Vein Puncture As an Alternative Method of Blood Sample Collection in Rats

Blood collection with enough blood volume is essential in animal experiments. Blood collection from the tail vein of rats is popular and less stressful compared to other more aggressive methods such as retro-orbital plexus sample collection. However, this blood collection method is sometimes limited by an unsatisfactory success rate. Here, we introduce a method for blood collection through the subclavian vein puncture. The subclavian vein is located just under the clavicle and this vein is large enough to fulfill the volume requirements of blood collection. Our results show that this method is safe and applicable for blood collection sampling with the required blood volume. Blood collection through the subclavian vein puncture could serve as an alternative blood collection method in case of failed tail vein blood sampling in rats.

Here, we present a protocol to collect blood samples from the rat subclavian vein.

Subklaviyan ven ponksiyon kan örnek fareleri koleksiyonunda alternatif bir yöntem olarak

Blood collection with enough blood volume is essential in animal experiments. Blood collection from the tail vein of rats is popular and less stressful ...

Simultaneous Electrocardiography Recording and Invasive Blood Pressure Measurement in Rats

For studies related to cardiovascular physiology or pathophysiology, blood pressure (BP) and electrocardiography are basic observational parameters. Research focusing on cardiovascular disease models, potential cardiovascular therapeutic targets or pharmaceutical agents requires assessment of systemic arterial pressure and heart rhythm changes. In situations where radio telemetry systems are not available or affordable, the technique of femoral artery cannulation is an alternative way to obtain intra-arterial pressure waveform recordings and systemic BP measurements. This technique is economical and can be performed with standard equipment in animal facilities. However, invasive arterial pressure recording requires cannulation of small arteries, which can be a challenging surgical skill. Here, we present step-by-step protocols for femoral artery cannulation procedures. Key procedures include the calibration of the data acquisition system, tissue dissection and femoral artery cannulation, and setup of the arterial cannulation system for pressure recording. Surface electrocardiography recording procedures are also included. We also present examples of BP recordings from normotensive and hypertensive rats. This protocol allows reliable direct recordings of systemic BP with simultaneous electrocardiography.

Here, we describe a setup for simultaneous recording of electrocardiography and intra-arterial blood pressure (BP) in experimental rats, which can be done with standard equipment in animal facilities and can be applied to physiological or pharmacological studies to investigate pathogenic or therapeutic mechanisms in cardiovascular medicine.

Eşzamanlı elektrokardiyografi kayıt ve invaziv kan basınç ölçüm sıçanlarda

For studies related to cardiovascular physiology or pathophysiology, blood pressure (BP) and electrocardiography are basic observational parameters. ...

A New Best Practice for Validating Tail Vein Injections in Rat with Near-infrared-Labeled Agents

Intravenous (IV) administration of agents into the tail vein of rats can be both difficult and inconsistent. Optimizing tail vein injections is a key part of many experimental procedures where reagents need to be introduced directly into the bloodstream. Unwittingly, the injection can be subcutaneous, possibly altering the scientific outcomes. Utilizing a nanoemulsion-based biological probe with an incorporated near-infrared fluorescent (NIRF) dye, this method offers the capability of imaging a successful tail vein injection in vivo. With the use of a NIRF imager, images are taken before and after the injection of the agent. An acceptable IV injection is then qualitatively or quantitatively determined based on the intensity of the NIRF signal at the site of injection.

Here we present a method to validate tail vein injections in rats by utilizing near-infrared fluorescence imaging data from dyes incorporated into agents or biological probes. The tail is imaged before and after the injection, the fluorescent signal is quantified, and an assessment of the injection quality is made.

Kuyruk ven enjeksiyonları sıçan-kızılötesi-etiketli ajanlar ile doğrulamak için yeni bir en iyi yöntem

Intravenous (IV) administration of agents into the tail vein of rats can be both difficult and inconsistent. Optimizing tail vein injections is a key part ...

Blood Collection Through Subclavian Vein Puncture in Mice

The mouse is the foremost mammalian model for studying human disease and human health. However, blood sample collection from mice is challenging in research work. Tail blood collection is a popular method when a small amount of blood sample is needed. Orbital artery could be considered if a large amount of blood is needed but this blood collection method has ethical issues. Formerly, we demonstrated the feasibility and safety of blood sample collection through subclavian vein puncture in rats, and here we investigate whether this method could be used in mice. We report that this method is safe and practical for blood collection in mice. Blood collection through the subclavian vein puncture in mice can be a convenient method in daily research works.

Here, we present a protocol to take blood samples from the subclavian vein of mice.

Farelerde subclavian ven delinme yoluyla kan toplama

The mouse is the foremost mammalian model for studying human disease and human health. However, blood sample collection from mice is challenging in ...

Simultaneous Flow Cytometric Characterization of Multiple Cell Types Retrieved from Mouse Brain/Spinal Cord Through Different Homogenization Methods

Recent advances in viral vector and nanomaterial sciences have opened the way for new cutting-edge approaches to investigate or manipulate the central nervous system (CNS). However, further optimization of these technologies would benefit from methods allowing rapid and streamline determination of the extent of CNS and cell-specific targeting upon administration of viral vectors or nanoparticles in the body. Here, we present a protocol that takes advantage of the high throughput and multiplexing capabilities of flow cytometry to allow a straightforward quantification of different cell subtypes isolated from mouse brain or spinal cord, namely microglia/macrophages, lymphocytes, astrocytes, oligodendrocytes, neurons and endothelial cells. We apply this approach to highlight critical differences between two tissue homogenization methods in terms of cell yield, viability and composition. This could instruct the user to choose the best method depending on the cell type(s) of interest and the specific application. This method is not suited for analysis of anatomical distribution, since the tissue is homogenized to generate a single-cell suspension. However, it allows to work with viable cells and it can be combined with cell-sorting, opening the way for several applications that could expand the repertoire of tools in the hands of the neuroscientist, ranging from establishment of primary cultures derived from pure cell populations, to gene-expression analyses and biochemical or functional assays on well-defined cell subtypes in the context of neurodegenerative diseases, upon pharmacological treatment or gene therapy.

We present a flow cytometry method to identify simultaneously different cell types retrieved from mouse brain or spinal cord. This method could be exploited to isolate or characterize pure cell populations in neurodegenerative diseases or to quantify the extent of cell targeting upon in vivo administration of viral vectors or nanoparticles.

Farklı Homojenizasyon Yöntemleri ile Fare Beyin/Omurilikten Alınan Çoklu Hücre Tiplerinin Eşzamanlı Akış Sitometrik Karakterizasyonu

Recent advances in viral vector and nanomaterial sciences have opened the way for new cutting-edge approaches to investigate or manipulate the central ...