En los estudios farmacocinéticos y toxicocinéticos, necesitamos recolectar una cierta cantidad de sangre en puntos de tiempo específicos en ratas para detectar la exposición al medicamento. Este estudio describe un método simple y eficiente para recolectar sangre de la vena subclavia en ratas en este protocolo. Esta técnica permite un muestreo repetido, oportuno y fácilmente identificable sin anestesia, y obtiene sangre de alta calidad a través de la recolección repetitiva de muestras.
Debe conocer la anatomía de la vena subclavia, la restricción capaz de la rata y la punta de la aguja. El método es arriesgado y requiere un profesional calificado. Para comenzar, encuentre el punto más bajo de la fosa triangular subclavia entre el cuello y la extremidad anterior en una rata.
Muévase aproximadamente de dos a tres milímetros hacia la cabeza y alcance el punto de la aguja en el sitio de recolección de sangre. Retire el vello con una afeitadora eléctrica. Para mantener la cabeza, el cuello y el pecho de la rata erguidos, agarre la piel de la parte posterior del cuello con una mano y exponga el sitio de inyección.
Enderezar la extremidad anterior en el lado del sitio de inyección para mantener su nivel. Mantenga la jeringa paralela a la cabeza de la rata con la otra mano e incline la jeringa hacia afuera de cinco a 10 grados, de modo que la punta esté inclinada hacia la dirección ventral. Inserte la aguja completamente en la cavidad anterior.
Retraiga la jeringa para mantener la presión negativa con el tubo. Mueva lentamente la aguja de profunda a poco profunda y retroceda por el mismo camino. Cuando la sangre haya entrado en la aguja de la jeringa, fije la posición de la aguja.
Dependiendo del peso y la salud de las ratas, controlar la cantidad máxima de sangre que se extraerá de acuerdo con las normas establecidas por el comité de cuidado y uso de animales de la institución. En ausencia de otros requisitos, no elimine más del 20% del volumen total de sangre del animal dentro de las 24 horas. Cuando se recoja suficiente muestra de sangre, retire inmediatamente la jeringa y prepárese para el tratamiento de sangre.
Presurice el sitio de inyección de la rata durante uno o dos minutos para detener el sangrado. Dado que el sitio de recolección está en la parte inferior del cuello, pellizque la piel de la vena subclavia para detener el sangrado presionándola. Retire la aguja de la jeringa y deséchela en el recipiente afilado para herramientas.
Transfiera lentamente la sangre de la jeringa a un tubo de 1.5 mililitros. Presione la jeringa contra la pared para evitar la formación de burbujas. Cierre la tapa del tubo de microcentrífuga y muévalo suavemente.
Mezcle bien la sangre con el anticoagulante dándole la vuelta al menos cinco veces. Dentro de los 120 minutos posteriores a la recolección del plasma, centrifugar la muestra de sangre entera a 2, 000 RCF durante 10 a 15 minutos a temperatura ambiente. Utilice una pistola de pipeta para transferir el plasma superior a un tubo de microcentrífuga nuevo.
No toque la cabeza de la pipeta con la parte inferior de la sangre entera. Deseche o vuelva a centrifugar el plasma contaminado con los glóbulos rojos. Las muestras de plasma recolectadas con precisión de la vena subclavia eran de color amarillo pálido translúcido.
La recolección inadecuada de sangre o la manipulación resultaron en hemólisis. Durante el primer muestreo, el peso corporal del animal macho fue de entre 268 y 297 gramos, y alrededor de 214 a 239 gramos para las hembras. Durante el último muestreo, el peso corporal del animal macho fue de entre 376 y 462 gramos, y alrededor de 254 a 300 gramos para las hembras.
Hubo un intervalo de 28 días entre la recolección de sangre toxicocinética. El peso corporal del animal aumentó constantemente cada semana, y la observación clínica fue normal. El método preciso de inserción de la aguja y el ángulo pueden garantizar una recolección de sangre sin problemas y evitar riesgos.
Esta operación requiere práctica repetida.
