Os autores têm não há agradecimentos a fazer.

Todos os procedimentos foram aprovados pelo Conselho de faculdade médica de Tongji na Animal conta Comissão de Huazhong Universidade de ciência e tecnologia (Wuhan, China). O manuscrito foi preparado de acordo com a chegada (pesquisa Animal: relato de experimentos In Vivo ) orientações6.
1. produção animal
<ol><li>Usar ratos Sprague-Dawley (SD) (n = 20, 10 machos, 8 semanas de idade, pesando 261 para 291 g, quer dizer = 272.85 g de ±9.07) do centro de animais experimentais de Huazhong Universidade de ciência e tecnologia e manter ratos de acordo com o guia para o cuidado e o uso de Animais de laboratório, publicados por nos National Institute of Health (NIH publicação No.85-23, revista em 1996)</li>
	<li>Casa em condições normais, com livre acesso à comida e água potável. Mantém ratos em gaiolas de2 cm 530 com madeira-corte do fundamento. Casa de dois ratos em cada gaiola. Manter todas as gaiolas abertas para o ambiente da sala (não microisolamento ou enjaular ventilado)</li>
	<li>Assegure que o pessoal envolvido no protocolo experimental lidar regularmente com os ratos.</li>
	<li>Manter a temperatura entre 21 ° e 23 ° C. Dê uma dieta normal de sal-taxas (0,3% NaCl) ao longo do estudo.</li>
</ol>2. procedimento de coleta de sangue
Nota: O sistema de coleta de sangue do vácuo consiste de uma agulha de duas pontas [22g (0,7 x 25 mm)], um suporte de plástico e uma série de tubos de vácuo (2 mL) com rolhas de borracha (Figura 1).
<ol><li>Coloque o rato em um suporte plástico de restrição e lavar a cauda com água para remover qualquer sujeira visível ou fezes (20-30 ° C). Enquanto o assistente tem a cauda na posição estendida, limpar o rabo com etanol a 70% e limpar com gaze para esclarecer a veia.</li>
	<li>Inserir a ponta da agulha 22g borboleta em uma das veias da cauda lateral (cerca de 5 mm) em uma posição aproximadamente 2-3 cm da ponta da cauda em ângulo de aproximadamente 20 ° (Figura 2). Colher o sangue no tubo de vácuo de coleta por introduzindo a ponta de borracha da agulha borboleta no tubo de coleta de sangue do vácuo (Figura 3). Nota: O volume de sangue coleção máxima é de 1,2 mL7.</li>
	<li>Após a coleta de sangue, retirar a agulha e aplicar suavemente a pressão para o local de punção com gaze por 15-30 s para parar o fluxo de sangue. Em seguida, solte o rato do suporte plástico para restrição e retornar o rato para sua gaiola.</li>
	<li>Use tubos que contenham EDTA como anticoagulante para coleta de plasma de sangue. Inverta suavemente o tubo várias vezes para misturar anticoagulante no sangue e colocar as amostras no gelo verticalmente.</li>
	<li>Centrifuga os tubos de colheita de amostra de sangue numa centrifugadora refrigerada a 2.000 x g durante 10 minutos separar o soro ou plasma.</li>
	<li>Extraia o soro/plasma, tomando cuidado para não perturbar as camadas de células do sangue vermelho e branco. Para coletar o soro sanguíneo, use tubos sem anticoagulante. Ambos os tipos de amostra podem ser usados imediatamente, ou armazenados a-80 ° C por até um ano. Nota: Coleta de sangue bem sucedida foi definida como obter sangue de 1,2 mL cada vez. Tempo de punção máxima foi definido para três julgamentos, se o volume de sangue total foi inferior a 1,2 mL após a terceira punção, foi definido como uma coleção de sangue falhou. A duração da amostragem começa a partir de punção de veia da cauda para a remoção da agulha borboleta após a coleta de sangue.</li>
	<li>
Colete sangue duas vezes dentro de duas semanas7.
	<ol>
<li>Para testar e verificar a viabilidade deste método, trem de dois estudantes de medicina (iniciantes) 2 h antes de executar este protocolo de coleta de sangue. Use vinte ratos e tirar sangue de 10 ratos por 2 companheiros experientes (grupo experimental) e de 10 ratos por estudantes de medicina 2 (grupo de iniciante).</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. análise estatística
<ol><li>Dados como um valor médio ± desvio-padrão de expressar e analisar com SPSS estatística 17. Um valor α de 0,05 foi escolhido, portanto p < 0,05 foi considerado estatisticamente significativo.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Brown, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+collection+from+the+tail+of+a+rat.">Blood collection from the tail of a rat.</a> Lab Anim (NY). 35 (8), 24-25 (2006).</li><li>Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+sample+collection+in+small+laboratory+animals.">Blood sample collection in small laboratory animals.</a> J Pharmacol Pharmacother. 1 (2), 87-93 (2010).</li><li>Staszyk, C., Bohnet, W., Gasse, H., Hackbarth, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+vessels+of+the+rat+tail:+a+histological+re-examination+with+respect+to+blood+vessel+puncture+methods.">Blood vessels of the rat tail: a histological re-examination with respect to blood vessel puncture methods.</a> Lab Anim. 37 (2), 121-125 (2003).</li><li>Lee, G., Goosens, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sampling+blood+from+the+lateral+tail+vein+of+the+rat.">Sampling blood from the lateral tail vein of the rat.</a> J. Vis. Exp. (99), (2015).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> WHO Guidelines on Drawing Blood: Best Practices in Phlebotomy WHO Guidelines Approved by the Guidelines Review Committee. , (2010).</li><li>Kilkenny, C., Altman, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improving+bioscience+research+reporting:+ARRIVE-ing+at+a+solution.">Improving bioscience research reporting: ARRIVE-ing at a solution.</a> Lab Anim. 44 (4), 377-378 (2010).</li><li>Diehl, K. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+good+practice+guide+to+the+administration+of+substances+and+removal+of+blood,+including+routes+and+volumes.">A good practice guide to the administration of substances and removal of blood, including routes and volumes.</a> J Appl Toxicol. 21 (1), 15-23 (2001).</li><li>Eder, J. M., Cutter, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+device+for+collecting+cord+blood.">A new device for collecting cord blood.</a> Obstet Gynecol. 86 (5), 850-852 (1995).</li><li>Reynolds, B. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+a+new+device+for+blood+sampling+in+cats+with+a+vacuum+tube+collection+system+-+plasma+biochemistry,+haematology+and+practical+usage+assessment.">Comparison of a new device for blood sampling in cats with a vacuum tube collection system - plasma biochemistry, haematology and practical usage assessment.</a> J Feline Med Surg. 9 (5), 382-386 (2007).</li><li>Wiwanitkit, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+blood+specimens+from+plain+and+gel+vacuum+blood+collection+tubes.">Comparison of blood specimens from plain and gel vacuum blood collection tubes.</a> J Med Assoc Thai. 84 (5), 723-726 (2001).</li><li>Wollowitz, A., Bijur, P. E., Esses, D., John Gallagher, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+butterfly+needles+to+draw+blood+is+independently+associated+with+marked+reduction+in+hemolysis+compared+to+intravenous+catheter.">Use of butterfly needles to draw blood is independently associated with marked reduction in hemolysis compared to intravenous catheter.</a> Acad Emerg Med. 20 (11), 1151-1155 (2013).</li></ol>

Os autores não têm nada a divulgar

O presente relato descreve um método de coleta de sangue fácil de aprender em ratos. Nossos resultados mostraram que esse método é viável para repetidamente coletar um grande volume de sangue dos ratos. Além disso, esse método poderia ser facilmente dominado com uma curva de aprendizagem a curto prazo. Este procedimento pode ser realizado em ratos não anestesiados e só faz com que o mínimo de estresse para os animais.
Sangue pode ser coletadas de ratos em vários locais. A veia da cauda é uma excelente localização para amostragem de sangue4. No entanto, não sempre é fácil de obter suficiente volume de sangue da veia sangue fino e baixo fluxo cauda dos ratos. O sistema de coleta de sangue do vácuo é geralmente usado para coletar amostras de sangue dos pacientes na prática clínica diária. Este sistema de coleta de sangue do vácuo tem sido usado em pacientes e animais de pesquisa por um longo tempo8,9,10. Este sistema consiste de um tubo de coleta de sangue do vácuo com agulha de parede e borboleta silicone revestido tubo interno. Ele baseou-se no princípio da pressão negativa do vácuo e permite o desenho contínuo de sangue sem o risco de coleta de sangue, o que também reduz a chance de contaminação e a hemólise11. O volume da amostra de sangue no cateter é cerca de 0,3 mL. Depois de retirar a agulha da veia da cauda, o sangue bloqueado o cateter vai fluir no tubo de vácuo de coleta devido o vácuo. Este método também é aplicável para a coleta de sangue de ratos com menos de 100 g com o uso de uma agulha de punção menor.
Este método de coleta de sangue tem várias vantagens. Este procedimento só causa lesão mínima para ratos e coleta de sangue pode ser realizada sem o uso de anestésicos, assim a influência da resposta ao estresse e anestésicos sobre a amostra de sangue pode ser evitada. Nossas observações mostraram que ratos estavam quietos no suporte de plástico restrição durante o procedimento e havia sem mortes durante estas experiências. Em segundo lugar, repetido a coleta de sangue, cada um ou dois dias é possível, que permite a amostragem frequente de sangue com um volume adequado para vários fins de pesquisa. Finalmente, esse método é fácil de aprender e foi facilmente dominado por iniciantes após um período de aprendizagem de curta (2H), conforme indicado pelas taxas de sucesso semelhantes e punção vezes entre os grupos experimentais e iniciante neste relatório. Em um relatório anterior, Lee et al demonstraram um método similar de amostragem de sangue da veia lateral da cauda do rato4. Nosso método é mais simples do que o relatado por Lee et al . 4 em que nós diretamente inserir a agulha de punção da veia da cauda e a outra extremidade do tubo está diretamente ligado ao tubo de vácuo para coleta de sangue, sem o uso de uma seringa extra e aspiração manual do sangue e sem a necessidade de ' leite ing' a veia para facilitar o fluxo de sangue. Coleta de sangue com esse sistema fechado reduz a possibilidade de contaminação do sangue. Uso do plástico titular restrição também reduz o estresse para o rato e facilita a fixação da cauda.
As duas etapas seguintes são críticas para o sucesso da aplicação desse método. 1) estender a cauda e evitar o movimento da cauda; 2) suavemente punção da veia em um ângulo de 20 ° para evitar a punção na veia e manter a agulha de punção na veia.
Em conclusão, o método de coleta de sangue do vácuo adotado em ratos é segura, viável e fácil de prática. Esse método permite a amostragem frequente de sangue com um volume adequado de sangue obtido de ratos não anestesiados.

Colheita de sangue de ratos é necessária para uma grande variedade de estudos experimentais. Técnicas para coleta de sangue de rato incluem a punção do coração, plexo retrô-orbital, veia jugular, veia safena, os vasos sanguíneos de cauda, artéria carótida, aorta abdominal e veia cava. A maioria das técnicas (exceto a veia safena e punção de vaso sanguíneo de cauda) requerem anestesia1,2. Veias da cauda do rato são rotineiramente perfuradas para amostragem de sangue e injeção vascular. Após ter tratado a cauda com água morna, os vasos sanguíneos são bem dilatada e apropriado para a manipulação, mesmo quando os ratos são anestesiados3.
Apesar do desenvolvimento de técnicas novas e melhoradas para obter amostras de sangue em animais de laboratório pequeno2, não sempre é fácil obter sangue suficiente quando a amostragem de pequenos animais. A veia da cauda de ratos é uma excelente localização para amostragem de sangue4. No entanto, a veia da cauda é fina, assim às vezes é difícil de perfurar e levaria muito tempo para obter sangue suficiente devido ao seu fluxo de sangue baixa. Coleta de sangue através de um sistema de tubo de vácuo extração é um método típico na prática clínica diária. Este sistema fechado para coleta de sangue, reduz o risco de exposição direta a sangue e tornou mais fácil de tirar amostras múltiplas de uma única punção venosa5. O presente relato descreve um método de amostragem de sangue de veia de cauda simples em ratos não anestesiados, usando o sistema de tubo de aspiração. Esse método é fácil de dominar e pode ser usado para obter um grande volume de sangue repetidamente em ratos.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="634">
	<tbody>
		<tr height="71">
			<td height="71" style="height:71px;width:192px;">a double-pointed needle</td>
			<td style="width:244px;">Shanghai Kang Nong medical instrument co., LTD, China</td>
			<td style="width:120px;">22G&#160;</td>
			<td style="width:79px;">(0.7&#215;25mm)</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:192px;">vacuum tubes</td>
			<td style="width:244px;">Wuhan Zhi Yuan, medical science and technology co., LTD, China</td>
			<td style="width:120px;">2 ml</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:192px;">rat restraining holder&#160;</td>
			<td style="width:244px;">Shanghai Kang Nong medical instrument co., LTD, China</td>
			<td style="width:120px;">250g rat hoder model</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="140">
			<td height="140" style="height:140px;width:192px;">normal salt diet for rats</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td style="width:79px;">Rats received a normal salt diet (0.3% NaCl) throughout the study</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:192px;">SPSS software for statistical analysis</td>
			<td>SPSS Inc,&#160; Chicago; USA&#160;</td>
			<td style="width:120px;">Version 17.0.&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

repeated blood collection from tail vein of non-anesthetized rats with a vacuum blood collection system

Sangue pode ser coletadas de ratos em um número de locais de amostragem. Por exemplo, a veia da cauda é uma excelente localização para amostragem de sangue. No entanto, a veia da cauda é fina, para que às vezes é difícil de perfurar. Além disso, a veia da cauda tem fluxo sanguíneo baixo e requer um tempo de amostragem longo para obter sangue suficiente. O presente relato descreve um método de amostragem de sangue simples, o método de coleta de sangue do vácuo, que geralmente é usado para obter amostras de sangue de pacientes, aqui usados para ratos não anestesiados. A ponta da agulha 22g borboleta foi inserida dentre as veias de cauda lateral, aproximadamente 2-3 cm da ponta da cauda em um ângulo de aproximadamente 20° e o sangue foi coletado no tubo de vácuo coleção inserindo o va o fim de borracha da agulha borboleta cuum tubo de coleta de sangue. Os presentes resultados experimentais mostram que a taxa de sucesso foi de 95% no grupo experimental e 90% no grupo iniciante. A taxa de sucesso e punção vezes foram semelhantes entre os dois grupos. A duração da amostragem foi significativamente menor no grupo experimental comparado ao grupo de iniciante. Em conclusão, este método de coleta de sangue do vácuo para amostragem sequencial de sangue da veia cauda de ratos não anestesiados é viável e fácil de aprender, que pode servir como uma alternativa confiável para outros convencionalmente usado técnicas de recolha de amostras de sangue para ratos.

Duração da amostragem, massa corporal e volume de coleta de sangue dos dois grupos Sangue foi coletado de 10 ratos (5 machos) duas vezes dentro de duas semanas em cada grupo. A massa média do corpo em ambos os grupos foi semelhante (272,00 ±9.66 e ±8.87 273.70 g). Duração de amostragem foi significativamente menor no grupo experimental comparado ao grupo iniciante (2.77 min ±0.53 vs 3,28 ±0.83 min, p < 0,05) (tabela 1).
Sucesso rate e punção vezes dos dois grupos A taxa de sucesso foi de 95% (19/20) no grupo experimental e 90% (18/20) no grupo iniciante (p > 0,05). Vezes de punção não foram significativamente diferentes entre os dois grupos (1.50 min ±0.61 vs 1,85 ±0.75 min, p > 0,05) (tabela 2). Estes resultados indicam que esse método é fácil de aprender, e a técnica poderia ser dominada após o treinamento por 2 h.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55852/55852fig1.jpg"> Figura 1 : tubo de coleta de sangue do vácuo 2 mL (à esquerda); agulha tipo borboleta 22g (centro); o suporte plástico de restrição (à direita). <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/55852/55852fig1large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55852/55852fig2.jpg"> Figura 2 : a ponta da agulha foi inserida na veia lateral da cauda (cerca de 5 mm) na posição aproximadamente 2-3 cm da ponta da cauda em ângulo de aproximadamente 20 °. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/55852/55852fig2large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55852/55852fig3.jpg"> Figura 3 : Punção venosa sucesso. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/55852/55852fig3large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td colspan="5">Grupo experimental</td>
			<td></td>
			<td colspan="5">Grupo iniciante</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td>Sexo</td>
			<td>Peso (g)</td>
			<td>Volume de sangue coletado (mL)</td>
			<td>duração da amostragem (min)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Sexo</td>
			<td>Peso (g)</td>
			<td>Volume de sangue coletado (mL)</td>
			<td>duração da amostragem (min)</td>
		</tr>
<tr>
<td>E1-1</td>
			<td>macho</td>
			<td>291</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.12</td>
			<td></td>
			<td>B1-1</td>
			<td>macho</td>
			<td>282</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.18</td>
		</tr>
<tr>
<td>E1-2</td>
			<td>macho</td>
			<td>291</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2,73</td>
			<td></td>
			<td>B1-2</td>
			<td>macho</td>
			<td>282</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.18</td>
		</tr>
<tr>
<td>E2-1</td>
			<td>macho</td>
			<td>276</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.3</td>
			<td></td>
			<td>B2-1</td>
			<td>macho</td>
			<td>264</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3,73</td>
		</tr>
<tr>
<td>E2-2</td>
			<td>macho</td>
			<td>276</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.37</td>
			<td></td>
			<td>B2-2</td>
			<td>macho</td>
			<td>264</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.47</td>
		</tr>
<tr>
<td>E3-1</td>
			<td>macho</td>
			<td>267</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2,73</td>
			<td></td>
			<td>B3-1</td>
			<td>macho</td>
			<td>265</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.52</td>
		</tr>
<tr>
<td>E3-2</td>
			<td>macho</td>
			<td>267</td>
			<td>1.0</td>
			<td>3,88</td>
			<td></td>
			<td>B3-2</td>
			<td>macho</td>
			<td>265</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.53</td>
		</tr>
<tr>
<td>E4-1</td>
			<td>macho</td>
			<td>263</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.41</td>
			<td></td>
			<td>B4-1</td>
			<td>macho</td>
			<td>289</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.32</td>
		</tr>
<tr>
<td>E4-2</td>
			<td>macho</td>
			<td>263</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2,52</td>
			<td></td>
			<td>B4-2</td>
			<td>macho</td>
			<td>289</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.62</td>
		</tr>
<tr>
<td>E5-1</td>
			<td>macho</td>
			<td>265</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.61</td>
			<td></td>
			<td>B5-1</td>
			<td>macho</td>
			<td>277</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.48</td>
		</tr>
<tr>
<td>E5-2</td>
			<td>macho</td>
			<td>265</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.42</td>
			<td></td>
			<td>B5-2</td>
			<td>macho</td>
			<td>277</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.12</td>
		</tr>
<tr>
<td>E6-1</td>
			<td>fêmea</td>
			<td>285</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.33</td>
			<td></td>
			<td>B6-1</td>
			<td>fêmea</td>
			<td>274</td>
			<td>0.9</td>
			<td>4,87</td>
		</tr>
<tr>
<td>E6-2</td>
			<td>fêmea</td>
			<td>285</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.03</td>
			<td></td>
			<td>B6-2</td>
			<td>fêmea</td>
			<td>274</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.37</td>
		</tr>
<tr>
<td>E7-1</td>
			<td>fêmea</td>
			<td>271</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2,82</td>
			<td></td>
			<td>B7-1</td>
			<td>fêmea</td>
			<td>268</td>
			<td>1.0</td>
			<td>3,93</td>
		</tr>
<tr>
<td>E7-2</td>
			<td>fêmea</td>
			<td>271</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.42</td>
			<td></td>
			<td>B7-2</td>
			<td>fêmea</td>
			<td>268</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.82</td>
		</tr>
<tr>
<td>E8-1</td>
			<td>fêmea</td>
			<td>268</td>
			<td>1.2</td>
			<td>1.93</td>
			<td></td>
			<td>B8-1</td>
			<td>fêmea</td>
			<td>262.</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2,07</td>
		</tr>
<tr>
<td>E8-2</td>
			<td>fêmea</td>
			<td>268</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.05</td>
			<td></td>
			<td>B8-2</td>
			<td>fêmea</td>
			<td>262.</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3,67</td>
		</tr>
<tr>
<td>E9-1</td>
			<td>fêmea</td>
			<td>273</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2,52</td>
			<td></td>
			<td>B9-1</td>
			<td>fêmea</td>
			<td>281</td>
			<td>1.2</td>
			<td>4.38</td>
		</tr>
<tr>
<td>E9-2</td>
			<td>fêmea</td>
			<td>273</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.17</td>
			<td></td>
			<td>B9-2</td>
			<td>fêmea</td>
			<td>281</td>
			<td>1.2</td>
			<td>4,57</td>
		</tr>
<tr>
<td>E10-1</td>
			<td>fêmea</td>
			<td>261</td>
			<td>1.2</td>
			<td>1.82</td>
			<td></td>
			<td>B10-1</td>
			<td>fêmea</td>
			<td>275</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.53</td>
		</tr>
<tr>
<td>E10-2</td>
			<td>fêmea</td>
			<td>261</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3,25</td>
			<td></td>
			<td>B10-2</td>
			<td>fêmea</td>
			<td>275</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.28</td>
		</tr>
<tr>
<td>Média</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>2,77</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>3.28</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="11">Pt-1: número de série dos ratos no grupo experimental para a primeira coleta de sangue.</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="11">Pt-2: número de série dos ratos no grupo experimental para a segunda coleta de sangue.</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="11">BN-1: número de série dos ratos no grupo de iniciante para a primeira coleta de sangue.</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="11">BN-2: número de série dos ratos no grupo de iniciante para a segunda coleta de sangue.</td>
		</tr>
</tbody></table>Tabela 1: Resultados de sangue coletados no grupo experimental e o grupo de iniciante.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td></td>
			<td>Tempos de coleta de sangue</td>
			<td>Tempos médios de punção</td>
			<td>Uma punção de tempo</td>
			<td>Duas vezes da punctura</td>
			<td>Três vezes da punctura</td>
			<td>Falhou</td>
			<td>Taxa de sucesso</td>
		</tr>
<tr>
<td>Grupo experimental</td>
			<td>20</td>
			<td>±0.61 1.50</td>
			<td>11</td>
			<td>8</td>
			<td>0</td>
			<td>1</td>
			<td>95%</td>
		</tr>
<tr>
<td>Grupo iniciante</td>
			<td>20</td>
			<td>±0.75 1,85</td>
			<td>7</td>
			<td>9</td>
			<td>2</td>
			<td>2</td>
			<td>90%</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
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<td colspan="6">Uma punção de tempo: número de ratos com coleta de sangue bem sucedido após a primeira punção</td>
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<td colspan="6">Duas vezes punção: número de ratos com coleta de sangue bem sucedido após a segunda punção</td>
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<tr>
<td colspan="6">Três vezes punção: número de ratos com coleta de sangue bem sucedido após a terceira punção</td>
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<tr>
<td colspan="5">Falha: número de ratos com falha de coleta de sangue após a terceira punção</td>
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		</tr>
</tbody></table>Tabela 2: Comparação entre os tempos de punção e taxas de sucesso do grupo experimental e do grupo de iniciante.

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Repeated Blood Collection from Tail Vein of Non-Anesthetized Rats with a Vacuum Blood Collection System

Aqui, descrevemos um método de amostragem de sangue de veia de cauda simples em ratos não anestesiados, usando um sistema de tubo de aspiração. Este método reduz o risco de exposição direta a sangue e simplifica a recolha de amostras múltiplas de uma única punção venosa.

Repetiu a coleta de sangue da veia da cauda de ratos não anestesiados com um sistema de coleta de sangue do vácuo

Blood can be collected from rats in a number of sampling locations. For instance, the tail vein is a superior location for blood sampling. However, the ...

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Research

JoVE Journal

Medicine

35.4K visualizações.  Jianghan University. Aqui, descrevemos um método de amostragem de sangue de veia de cauda simples em ratos não anestesiados, usando um sistema de tubo de aspiração. Este método reduz o risco de exposição direta a sangue e simplifica a recolha de amostras múltiplas de uma única punção venosa.

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Collection Protocol for Human Pancreas

This dissection and sampling procedure was developed for the Network for Pancreatic Organ Donors with Diabetes (nPOD) program to standardize preparation of pancreas recovered from cadaveric organ donors. The pancreas is divided into 3 main regions (head, body, tail) followed by serial transverse sections throughout the medial to lateral axis. Alternating sections are used for fixed paraffin and fresh frozen blocks and remnant samples are minced for snap frozen sample preparations, either with or without RNAse inhibitors, for DNA, RNA, or protein isolation. The overall goal of the pancreas dissection procedure is to sample the entire pancreas while maintaining anatomical orientation.
Endocrine cell heterogeneity in terms of islet composition, size, and numbers is reported for human islets compared to rodent islets 1. The majority of human islets from the pancreas head, body and tail regions are composed of insulin-containing &beta;-cells followed by lower proportions of glucagon-containing &alpha;-cells and somatostatin-containing &delta;-cells. Pancreatic polypeptide-containing PP cells and ghrelin-containing epsilon cells are also present but in small numbers. In contrast, the uncinate region contains islets that are primarily composed of pancreatic polypeptide-containing PP cells 2. These regional islet variations arise from developmental differences. The pancreas develops from the ventral and dorsal pancreatic buds in the foregut and after rotation of the stomach and duodenum, the ventral lobe moves and fuses with the dorsal 3. The ventral lobe forms the posterior portion of the head including the uncinate process while the dorsal lobe gives rise to the rest of the organ. Regional pancreatic variation is also reported with the tail region having higher islet density compared to other regions and the dorsal lobe-derived components undergoing selective atrophy in type 1 diabetes4,5.
Additional organs and tissues are often recovered from the organ donors and include pancreatic lymph nodes, spleen and non-pancreatic lymph nodes. These samples are recovered with similar formats as for the pancreas with the addition of isolation of cryopreserved cells. When the proximal duodenum is included with the pancreas, duodenal mucosa may be collected for paraffin and frozen blocks and minced snap frozen preparations.

This video demonstrates a dissection procedure for processing human pancreas into multiple storage formats. Anatomical orientation is maintained throughout the pancreatic regions to allow definition of regional islet composition and density.

Protocolo de Coleta para Pâncreas Humano

This dissection and sampling procedure was developed for the Network for Pancreatic Organ Donors with Diabetes (nPOD) program to standardize preparation ...

Medicina

Dried Blood Spot Collection of Health Biomarkers to Maximize Participation in Population Studies

Biomarkers are directly-measured biological indicators of disease, health, exposures, or other biological information. In population and social sciences, biomarkers need to be easy to obtain, transport, and analyze. Dried Blood Spots meet this need, and can be collected in the field with high response rates. These elements are particularly important in longitudinal study designs including interventions where attrition is critical to avoid, and high response rates improve the interpretation of results. Dried Blood Spot sample collection is simple, quick, relatively painless, less invasive then venipuncture, and requires minimal field storage requirements (i.e.&#160;samples do not need to be immediately frozen and can be stored for a long period of time in a stable freezer environment before assay). The samples can be analyzed for a variety of different analytes, including cholesterol, C-reactive protein, glycosylated hemoglobin, numerous cytokines, and other analytes, as well as provide genetic material. DBS collection is depicted as employed in several recent studies.

Biomarkers are directly-measured biological indicators of disease or health. In population and social sciences, biomarkers need to be easy to obtain, transport, and analyze. Dried Blood Spot (DBS) collection meets this need, can be collected in the field with high response rates&#160;and analyzed for a variety of biomarkers.

Secas Coleta de Sangue Mancha de Biomarcadores de saúde para maximizar a participação em Estudos Populacionais

Biomarkers are directly-measured biological indicators of disease, health, exposures, or other biological information. In population and social sciences, ...

Collection, Isolation, and Flow Cytometric Analysis of Human Endocervical Samples

Despite the public health importance of mucosal pathogens (including HIV), relatively little is known about mucosal immunity, particularly at the female genital tract (FGT). Because heterosexual transmission now represents the dominant mechanism of HIV transmission, and given the continual spread of sexually transmitted infections (STIs), it is critical to understand the interplay between host and pathogen at the genital mucosa. The substantial gaps in knowledge around FGT immunity are partially due to the difficulty in successfully collecting and processing mucosal samples. In order to facilitate studies with sufficient sample size, collection techniques must be minimally invasive and efficient. To this end, a protocol for the collection of cervical cytobrush samples and subsequent isolation of cervical mononuclear cells (CMC) has been optimized. Using ex vivo flow cytometry-based immunophenotyping, it is possible to accurately and reliably quantify CMC lymphocyte/monocyte population frequencies and phenotypes. This technique can be coupled with the collection of cervical-vaginal lavage (CVL), which contains soluble immune mediators including cytokines, chemokines and anti-proteases, all of which can be used to determine the anti- or pro-inflammatory environment in the vagina.

The use of cytobrush sampling to collect lymphocytes and monocytes from the endocervix is a minimally invasive technique that provides samples for analysis of female genital tract immunity. In this protocol, we describe the collection of cytobrush samples and immune cell isolation for flow cytometry assays.

Coleção, isolamento e Citometria de Fluxo de Análise de Amostras endocervix Humano

Despite the public health importance of mucosal pathogens (including HIV), relatively little is known about mucosal immunity, particularly at the female ...

Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

Clinically, thrombolytic therapy with use of recombinant tissue plasminogen activator (tPA) remains the most effective treatment for acute ischemic stroke. However, the use of tPA is limited by its narrow therapeutic window and by increased risk of hemorrhagic transformation. There is an urgent need to develop suitable stroke models to study new thrombolytic agents and strategies for treatment of ischemic stroke. At present, two major types of ischemic stroke models have been developed in rats and mice: intraluminal suture MCAO and embolic MCAO. Although MCAO models via the intraluminal suture technique have been widely used in mechanism-driven stroke research, these suture models do not mimic the clinical situation and are not suitable for thrombolytic studies. Among these models, the embolic MCAO model closely mimics human ischemic stroke and is suitable for preclinical investigation of thrombolytic therapy. This embolic model was first developed in rats by Overgaard et al.1 in 1992 and further characterized by Zhang et al. in 19972. Although embolic MCAO has gained increasing attention, there are technical problems faced by many laboratories. To meet increasing needs for thrombolytic research, we present a highly reproducible model of embolic MCAO in the rat, which can develop a predictable infarct volume within the MCA territory. In brief, a modified PE-50 tube is gently advanced from the external carotid artery (ECA) into the lumen of the internal carotid artery (ICA) until the tip of the catheter reaches the origin of the MCA. Through the catheter, a single homologous blood clot is placed at the origin of the MCA. To identify the success of MCA occlusion, regional cerebral blood flow was monitored, neurological deficits and infarct volumes were measured. The techniques presented in this paper should help investigators to overcome technical problems for establishing this model for stroke research.

Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

In this paper, we demonstrate a standard method for producing an embolic middle cerebral artery occlusion with homologous blood clots (fibrin-rich) in adult rat. This model closely mimics human ischemic stroke and is suitable for preclinical study of thrombolytic therapy for ischemic stroke.

Embolic artéria cerebral média Oclusão (MCAO) para Acidente Vascular Cerebral Isquêmico com homólogos Coágulos de sangue em ratos

Clinically, thrombolytic therapy with use of recombinant tissue plasminogen activator (tPA) remains the most effective treatment for acute ischemic ...

Routine Screening Method for Microparticles in Platelet Transfusions

Platelet inventory management based on screening microparticle content in platelet concentrates is a new quality improvement initiative for hospital blood banks. Cells fragment off microparticles (MP) when they are stressed. Blood and blood components may contain cellular fragments from a variety of cells, most notably from activated platelets. When performing their roles as innate immune cells and major players in coagulation and hemostasis, platelets change shape and generate microparticles. With dynamic light scattering (DLS)-based microparticle detection, it is possible to differentiate activated (high microparticle) from non-activated (low microparticle) platelets in transfusions, and optimize the use of this scarce blood product. Previous research suggests that providing non-activated platelets for prophylactic use in hematology-oncology patients could reduce their risk of becoming refractory and improve patient care. The goal of this screening method is to routinely differentiate activated from non-activated platelets. The method described here outlines the steps to be performed for routine platelet inventory management in a hospital blood bank: obtaining a sample from a platelet transfusion, loading the sample into the capillary for DLS measurement, performing the DLS test to identify microparticles, and using the reported microparticle content to identify activated platelets.

Platelet inventory management based on screening microparticle content in platelet concentrates is a new quality improvement initiative in hospital blood banks. The goal is to differentiate activated from non-activated platelets to optimize the use of platelets. Providing non-activated platelets to hematology-oncology patients might reduce their high risk to become refractory.

Método de triagem para micropartículas em transfusões de plaquetas de rotina

Platelet inventory management based on screening microparticle content in platelet concentrates is a new quality improvement initiative for hospital blood ...

Subclavian Vein Puncture As an Alternative Method of Blood Sample Collection in Rats

Blood collection with enough blood volume is essential in animal experiments. Blood collection from the tail vein of rats is popular and less stressful compared to other more aggressive methods such as retro-orbital plexus sample collection. However, this blood collection method is sometimes limited by an unsatisfactory success rate. Here, we introduce a method for blood collection through the subclavian vein puncture. The subclavian vein is located just under the clavicle and this vein is large enough to fulfill the volume requirements of blood collection. Our results show that this method is safe and applicable for blood collection sampling with the required blood volume. Blood collection through the subclavian vein puncture could serve as an alternative blood collection method in case of failed tail vein blood sampling in rats.

Here, we present a protocol to collect blood samples from the rat subclavian vein.

Punção da veia subclávia como um método alternativo de coleta de amostra de sangue em ratos

Blood collection with enough blood volume is essential in animal experiments. Blood collection from the tail vein of rats is popular and less stressful ...

Simultaneous Electrocardiography Recording and Invasive Blood Pressure Measurement in Rats

For studies related to cardiovascular physiology or pathophysiology, blood pressure (BP) and electrocardiography are basic observational parameters. Research focusing on cardiovascular disease models, potential cardiovascular therapeutic targets or pharmaceutical agents requires assessment of systemic arterial pressure and heart rhythm changes. In situations where radio telemetry systems are not available or affordable, the technique of femoral artery cannulation is an alternative way to obtain intra-arterial pressure waveform recordings and systemic BP measurements. This technique is economical and can be performed with standard equipment in animal facilities. However, invasive arterial pressure recording requires cannulation of small arteries, which can be a challenging surgical skill. Here, we present step-by-step protocols for femoral artery cannulation procedures. Key procedures include the calibration of the data acquisition system, tissue dissection and femoral artery cannulation, and setup of the arterial cannulation system for pressure recording. Surface electrocardiography recording procedures are also included. We also present examples of BP recordings from normotensive and hypertensive rats. This protocol allows reliable direct recordings of systemic BP with simultaneous electrocardiography.

Here, we describe a setup for simultaneous recording of electrocardiography and intra-arterial blood pressure (BP) in experimental rats, which can be done with standard equipment in animal facilities and can be applied to physiological or pharmacological studies to investigate pathogenic or therapeutic mechanisms in cardiovascular medicine.

Gravação simultânea de eletrocardiografia e sangue invasiva pressão medida em ratos

For studies related to cardiovascular physiology or pathophysiology, blood pressure (BP) and electrocardiography are basic observational parameters. ...

A New Best Practice for Validating Tail Vein Injections in Rat with Near-infrared-Labeled Agents

Intravenous (IV) administration of agents into the tail vein of rats can be both difficult and inconsistent. Optimizing tail vein injections is a key part of many experimental procedures where reagents need to be introduced directly into the bloodstream. Unwittingly, the injection can be subcutaneous, possibly altering the scientific outcomes. Utilizing a nanoemulsion-based biological probe with an incorporated near-infrared fluorescent (NIRF) dye, this method offers the capability of imaging a successful tail vein injection in vivo. With the use of a NIRF imager, images are taken before and after the injection of the agent. An acceptable IV injection is then qualitatively or quantitatively determined based on the intensity of the NIRF signal at the site of injection.

Here we present a method to validate tail vein injections in rats by utilizing near-infrared fluorescence imaging data from dyes incorporated into agents or biological probes. The tail is imaged before and after the injection, the fluorescent signal is quantified, and an assessment of the injection quality is made.

Nova prática recomendada para validar a cauda veia injeções no rato com agentes próximo-infravermelho-rotulado

Intravenous (IV) administration of agents into the tail vein of rats can be both difficult and inconsistent. Optimizing tail vein injections is a key part ...

Blood Collection Through Subclavian Vein Puncture in Mice

The mouse is the foremost mammalian model for studying human disease and human health. However, blood sample collection from mice is challenging in research work. Tail blood collection is a popular method when a small amount of blood sample is needed. Orbital artery could be considered if a large amount of blood is needed but this blood collection method has ethical issues. Formerly, we demonstrated the feasibility and safety of blood sample collection through subclavian vein puncture in rats, and here we investigate whether this method could be used in mice. We report that this method is safe and practical for blood collection in mice. Blood collection through the subclavian vein puncture in mice can be a convenient method in daily research works.

Here, we present a protocol to take blood samples from the subclavian vein of mice.

Coleta de sangue por punção da veia subclávia em camundongos

The mouse is the foremost mammalian model for studying human disease and human health. However, blood sample collection from mice is challenging in ...

Simultaneous Flow Cytometric Characterization of Multiple Cell Types Retrieved from Mouse Brain/Spinal Cord Through Different Homogenization Methods

Recent advances in viral vector and nanomaterial sciences have opened the way for new cutting-edge approaches to investigate or manipulate the central nervous system (CNS). However, further optimization of these technologies would benefit from methods allowing rapid and streamline determination of the extent of CNS and cell-specific targeting upon administration of viral vectors or nanoparticles in the body. Here, we present a protocol that takes advantage of the high throughput and multiplexing capabilities of flow cytometry to allow a straightforward quantification of different cell subtypes isolated from mouse brain or spinal cord, namely microglia/macrophages, lymphocytes, astrocytes, oligodendrocytes, neurons and endothelial cells. We apply this approach to highlight critical differences between two tissue homogenization methods in terms of cell yield, viability and composition. This could instruct the user to choose the best method depending on the cell type(s) of interest and the specific application. This method is not suited for analysis of anatomical distribution, since the tissue is homogenized to generate a single-cell suspension. However, it allows to work with viable cells and it can be combined with cell-sorting, opening the way for several applications that could expand the repertoire of tools in the hands of the neuroscientist, ranging from establishment of primary cultures derived from pure cell populations, to gene-expression analyses and biochemical or functional assays on well-defined cell subtypes in the context of neurodegenerative diseases, upon pharmacological treatment or gene therapy.

We present a flow cytometry method to identify simultaneously different cell types retrieved from mouse brain or spinal cord. This method could be exploited to isolate or characterize pure cell populations in neurodegenerative diseases or to quantify the extent of cell targeting upon in vivo administration of viral vectors or nanoparticles.

Caracterização citométrica de fluxo simultâneo de múltiplos tipos de células recuperadas do cérebro do camundongo/medula espinhal através de diferentes métodos de homogeneização

Recent advances in viral vector and nanomaterial sciences have opened the way for new cutting-edge approaches to investigate or manipulate the central ...