Die Autoren haben keine Bestätigungen zu machen.

Alle Verfahren wurden von der Tongji Medical College Council auf Animal Care Ausschuss der Huazhong University of Science und Technology (Wuhan, China) genehmigt. Das Manuskript wurde nach Ankunft vorbereitet (Animal Research: Meldung von In Vivo Experimente) Richtlinien6.
1. Tierhaltung
<ol><li>Verwenden Sie Sprague-Dawley (SD) Ratten (n = 20, 10 Männer, 8 Wochen alte, 261, 291 g wiegen meine = 272.85 ±9.07 g) aus der experimentellen Tiere Mitte der Huazhong University of Science and Technology und pflegen Ratten gemäß dem Leitfaden für die Pflege und Nutzung der Versuchstiere, die von der US National Institute of Health (NIH Publikation Nr. 85-23, revidiert 1996) veröffentlicht</li>
	<li>Haus unter Standardbedingungen mit freiem Zugang zu Nahrungsmitteln und Trinkwasser. Halten Sie Ratten in 530 cm2 Käfige mit Holz-Rasur Bettwäsche. Haus zwei Ratten in jedem Käfig. Halten Sie alle Käfige für die Raumumgebung (keine Mikro-Isolierung oder belüfteten Käfighaltung) offen</li>
	<li>Stellen Sie sicher, im experimentellen Protokoll beteiligten Mitarbeiter regelmäßig die Ratten behandeln.</li>
	<li>Pflegen Sie Raumtemperatur zwischen 21 ° C und 23 ° C. Preise einer normalen salzarme Kost zu geben (0,3 % NaCl) während der gesamten Studie.</li>
</ol>2. Blut Inkasso
Hinweis: Das Sammelsystem für Vakuum Blut besteht aus einer Doppel-spitzen Nadel [22 G (0,7 mm x 25 mm)], ein Kunststoff-Halter und einer Reihe von Vakuum-Röhren (2 mL) mit Gummistopfen (Abbildung 1).
<ol><li>Legen Sie die Ratte in eine zurückhaltende Plastikhalter und waschen Sie die Rute mit Warmwasser (20-30 ° C), sichtbaren Schmutz oder Kot zu entfernen. Während ein Assistent die Rute in einer ausgefahrenen Position hält, wischen Sie die Rute mit 70 % Ethanol, und reinigen Sie mit Gaze, die Vene klar zu machen.</li>
	<li>Legen Sie die Nadelspitze 22 G Schmetterling in einer der seitlichen Schweif Venen (ca. 5 mm) an einer Stelle etwa 2-3 cm entfernt von der Schwanzspitze im Winkel von ca. 20° (Abbildung 2). Sammeln von Blut in das Vakuum Sammelröhrchen durch Einfügen der Kautschuk Ende der Schmetterling Nadel in das Vakuum Blutsammelröhrchen (Abbildung 3). Hinweis: Die maximale Sammlung Blutvolumen ist 1,2 mL-7.</li>
	<li>Nach der Blutentnahme die Nadel entfernen und vorsichtig Druck auf die Punktionsstelle mit Gaze für 15-30 s, um den Blutfluss zu stoppen. Dann lassen Sie die Ratte aus dem Kunststoff zurückhaltende Halter und zurückkehren Sie die Ratte zu seinen Käfig.</li>
	<li>Verwenden Sie Rohre, die EDTA als ein Antigerinnungsmittel enthalten, Blutplasma zu sammeln. Invertieren Sie das Rohr sanft mehrmals zu mischen Antikoagulans im Blut und die Proben auf Eis vertikal.</li>
	<li>Zentrifugieren Sie Probe Blutentnahmeröhrchen in einer gekühlten Zentrifuge bei 2.000 x g für 10 min, Plasma oder Serum zu trennen.</li>
	<li>Extrahieren Sie das Plasma/Serum, kümmert sich nicht um die roten und weißen Blutkörperchen Schichten stören. Verwenden Sie zum Sammeln von Blutserum Röhren ohne Antikoagulans. Beide Arten von Proben können sofort eingesetzt oder bei-80 ° C bis zu einem Jahr gelagert werden. Hinweis: Erfolgreiche Blutentnahme wurde definiert als jedes Mal 1,2 mL Blut zu erhalten. Maximale Punktion Zeit eingestellt wurde, drei Versuche, wenn das gesamte Blutvolumen niedriger als 1,2 mL nach der dritten Punktion war wurde definiert als eine fehlgeschlagene Blutentnahme. Die Dauer der Probenahme beginnt die Rute Vene Punktion zur Beseitigung der Schmetterling Nadel nach der Blutentnahme.</li>
	<li>
Sammeln Sie Blut zweimal innerhalb von zwei Wochen7.
	<ol>
<li>Zum Testen und überprüfen die Machbarkeit dieser Methode, trainieren Sie zwei Medizinstudenten (Anfänger) für 2 h vor dem Ausführen dieses Blut-Sammlung-Protokolls. Verwenden Sie zwanzig Ratten und zeichnen Sie Blut von 10 Ratten von 2 erfahrenen Fellows (Versuchsgruppe) und von 10 Ratten durch die 2 Medizinstudenten (Anfängergruppe) zu.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. statistische Analyse
<ol><li>Daten als ein Mittelwert ± Standardabweichung auszudrücken und analysieren mit SPSS Statistics 17. Ein α-Wert von 0,05 gewählt wurde, daher p < 0,05 wurde als statistisch signifikant angesehen.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Brown, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+collection+from+the+tail+of+a+rat.">Blood collection from the tail of a rat.</a> Lab Anim (NY). 35 (8), 24-25 (2006).</li><li>Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+sample+collection+in+small+laboratory+animals.">Blood sample collection in small laboratory animals.</a> J Pharmacol Pharmacother. 1 (2), 87-93 (2010).</li><li>Staszyk, C., Bohnet, W., Gasse, H., Hackbarth, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+vessels+of+the+rat+tail:+a+histological+re-examination+with+respect+to+blood+vessel+puncture+methods.">Blood vessels of the rat tail: a histological re-examination with respect to blood vessel puncture methods.</a> Lab Anim. 37 (2), 121-125 (2003).</li><li>Lee, G., Goosens, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sampling+blood+from+the+lateral+tail+vein+of+the+rat.">Sampling blood from the lateral tail vein of the rat.</a> J. Vis. Exp. (99), (2015).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> WHO Guidelines on Drawing Blood: Best Practices in Phlebotomy WHO Guidelines Approved by the Guidelines Review Committee. , (2010).</li><li>Kilkenny, C., Altman, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improving+bioscience+research+reporting:+ARRIVE-ing+at+a+solution.">Improving bioscience research reporting: ARRIVE-ing at a solution.</a> Lab Anim. 44 (4), 377-378 (2010).</li><li>Diehl, K. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+good+practice+guide+to+the+administration+of+substances+and+removal+of+blood,+including+routes+and+volumes.">A good practice guide to the administration of substances and removal of blood, including routes and volumes.</a> J Appl Toxicol. 21 (1), 15-23 (2001).</li><li>Eder, J. M., Cutter, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+device+for+collecting+cord+blood.">A new device for collecting cord blood.</a> Obstet Gynecol. 86 (5), 850-852 (1995).</li><li>Reynolds, B. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+a+new+device+for+blood+sampling+in+cats+with+a+vacuum+tube+collection+system+-+plasma+biochemistry,+haematology+and+practical+usage+assessment.">Comparison of a new device for blood sampling in cats with a vacuum tube collection system - plasma biochemistry, haematology and practical usage assessment.</a> J Feline Med Surg. 9 (5), 382-386 (2007).</li><li>Wiwanitkit, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+blood+specimens+from+plain+and+gel+vacuum+blood+collection+tubes.">Comparison of blood specimens from plain and gel vacuum blood collection tubes.</a> J Med Assoc Thai. 84 (5), 723-726 (2001).</li><li>Wollowitz, A., Bijur, P. E., Esses, D., John Gallagher, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+butterfly+needles+to+draw+blood+is+independently+associated+with+marked+reduction+in+hemolysis+compared+to+intravenous+catheter.">Use of butterfly needles to draw blood is independently associated with marked reduction in hemolysis compared to intravenous catheter.</a> Acad Emerg Med. 20 (11), 1151-1155 (2013).</li></ol>

Die Autoren haben nichts preisgeben

Der vorliegende Bericht beschreibt ein einfach zu erlernendes Blut Erfassungsmethode bei Ratten. Unsere Ergebnisse zeigten, dass diese Methode zum Sammeln von immer wieder einer großen Menge an Blut von Ratten machbar ist. Darüber hinaus könnte diese Methode leicht mit einer kurzfristigen Lernkurve gemeistert werden. Dieses Verfahren kann bei nicht narkotisierten Ratten durchgeführt werden und verursacht nur minimale Belastung für die Tiere.
Blut kann von Ratten an verschiedenen Orten gesammelt werden. Die Rute Ader ist eine erstklassige Lage für Blut-Probenahme-4. Es ist jedoch nicht immer einfach, genügend Blutvolumen aus der dünnen und niedrige Blut fließen Schweif Vene der Ratten zu erhalten. Das Sammelsystem für Vakuum Blut dient in der Regel für das Sammeln von Blutproben von Patienten in der täglichen klinischen Praxis. Dieses Vakuum Blut Sammelsystem hat für eine lange Zeit8,9,10in Patienten und Versuchstiere eingesetzt. Dieses System besteht aus einem Vakuum Blutsammelröhrchen mit Silikon beschichtete Innenrohr Wand und Butterfly-Nadel. Es stützte sich auf das Vakuum Unterdruck-Prinzip und ermöglicht die kontinuierliche Zeichnung des Blutes ohne das Risiko von Blut zu sammeln, das auch die Möglichkeit der Kontamination und Hämolyse11reduziert. Das Volumen der Blutprobe in der Katheter ist ca. 0,3 mL. Nach dem Rückzug der Nadelöhrs von der Rute Vene, fließt das Blut in den Katheter blockiert in der Vakuum-Sammelrohr durch den Unterdruck. Diese Methode gilt auch für die Blutentnahme von Ratten mit einem Gewicht von weniger als 100 g mit dem Einsatz von einer kleineren Punktionsnadel.
Dieses Blut-Sammlung-Methode hat mehrere Vorteile. Diese Prozedur bewirkt nur minimalen Verletzung an Ratten und Blutentnahme kann ohne den Einsatz von Anästhetika durchgeführt werden, damit der Einfluss der Stressantwort und Anästhetika auf die Blutprobe vermieden werden. Unsere Beobachtungen zeigten, dass Ratten ruhig in den dämpfenden Kunststoffhalter während des Verfahrens waren und es keine Todesfälle während dieser Experimente gab. Zweitens wiederholt jeder Blutentnahme oder zwei Tage ist möglich, wodurch häufige Entnahme von Blut mit ausreichend Volumen für verschiedene Zwecke. Schließlich, diese Methode ist leicht erlernbar und gemeistert wurde leicht von Anfängern nach einer kurzen (2 h) lernen, wie durch die ähnliche Erfolgsraten und Punktion Zeiten zwischen den experimentellen und Anfänger Gruppen in diesem Bericht. In einem früheren Bericht zeigten Lee Et Al. eine ähnliche Methode der Probenahme Blut aus der Vene seitliche Schweif der Ratte4. Unsere Methode ist einfacher als die von Lee Et Al. berichtet 4 , dass wir direkt die Punktionsnadel in die Rute Vene und das andere Ende des Schlauches einfügen direkt mit verbunden ist das Saugrohr für die Blutentnahme, ohne den Einsatz einer zusätzlichen Spritze und manuelle Aspiration von Blut und ohne die Notwendigkeit von "Milch Ing' die Vene Blut zu erleichtern. Blutentnahme mit diesem geschlossenen System verringert die Wahrscheinlichkeit von Blut. Verwendung von bewegungseinschränkenden Kunststoffhalter auch reduziert den Stress auf die Ratte und erleichtert die Fixierung der Rute.
Die folgenden zwei Schritte sind entscheidend für die erfolgreiche Anwendung dieser Methode. (1) erweitern Sie das Heck und vermeiden Sie die Bewegung der Rute zu; (2) vorsichtig Durchstechen der Vene in einem Winkel von 20° zu vermeiden Punktion durch die Vene und halten die Punktionsnadel in die Vene.
Zusammenfassend ist die angenommene Vakuum Blut Erhebungsmethoden bei Ratten sicher, machbar und leicht zu praktizieren. Diese Methode ermöglicht häufige Entnahme von Blut mit einer angemessenen Blutvolumen nicht betäubt Ratten entnommen.

Die Blutabnahme von Ratten ist für eine Vielzahl von experimentellen Untersuchungen erforderlich. Techniken für die Blutentnahme aus der Ratte gehören Punktion des Herzens, Retro-Orbital Plexus, Halsschlagader, Stammvenen, Tail Blutgefäße, Halsschlagader, Bauchschlagader und Vena Cava. Die meisten Techniken (außer Stammvenen und Schweif Blutgefäß Punktion) erfordern Anästhesie1,2. Adern von den Rattenschwanz werden routinemäßig für Blutabnahme und vaskuläre Injektion punktiert. Nach der Behandlung der Rute mit warmem Wasser, sind die Blutgefäße gut geweitet und eignet sich für Manipulation, auch bei Ratten narkotisierten3.
Trotz der Entwicklung von neuen und verbesserten Techniken, um Blutproben im kleinen Labor Tiere2zu erhalten ist es nicht immer einfach, genügend Blut zu erhalten, bei der Probenahme von Kleintieren. Die Rute Ader von Ratten ist eine erstklassige Lage für Blut-Probenahme-4. Jedoch die Rute Vene ist dünn, damit es ist manchmal schwer zu durchstechen und würde sehr lange dauern, genügend Blut aufgrund seiner niedrigen Blutfluss zu bekommen. Blutentnahme über eine Absauganlage Rohr ist eine typische Methode in der täglichen klinischen Praxis. Dieses geschlossene System für Blut sammeln reduziert das Risiko einer direkten Kontakt mit Blut und hat es leichter gemacht, mehrere Proben von einem einzigen Venenpunktion5nehmen. Der vorliegende Bericht beschreibt eine einfache Rute Vene Blut Sampling-Methode in nicht betäubt Ratten mit Absauganlage für die Röhre. Diese Methode ist leicht zu beherrschen und kann verwendet werden, um eine große Menge an Blut wiederholt bei Ratten zu erhalten.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="634">
	<tbody>
		<tr height="71">
			<td height="71" style="height:71px;width:192px;">a double-pointed needle</td>
			<td style="width:244px;">Shanghai Kang Nong medical instrument co., LTD, China</td>
			<td style="width:120px;">22G&#160;</td>
			<td style="width:79px;">(0.7&#215;25mm)</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:192px;">vacuum tubes</td>
			<td style="width:244px;">Wuhan Zhi Yuan, medical science and technology co., LTD, China</td>
			<td style="width:120px;">2 ml</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:192px;">rat restraining holder&#160;</td>
			<td style="width:244px;">Shanghai Kang Nong medical instrument co., LTD, China</td>
			<td style="width:120px;">250g rat hoder model</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="140">
			<td height="140" style="height:140px;width:192px;">normal salt diet for rats</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td style="width:79px;">Rats received a normal salt diet (0.3% NaCl) throughout the study</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:192px;">SPSS software for statistical analysis</td>
			<td>SPSS Inc,&#160; Chicago; USA&#160;</td>
			<td style="width:120px;">Version 17.0.&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

repeated blood collection from tail vein of non-anesthetized rats with a vacuum blood collection system

Blut kann bei Ratten in einer Reihe von Probenahme Standorten abgeholt. Zum Beispiel ist die Rute Vene eine erstklassige Lage für die Blutabnahme. Allerdings ist die Rute Vene dünn, so, dass es manchmal schwer zu durchstechen. Darüber hinaus die Rute Vene hat geringe Durchblutung und erfordert eine lange Abtastzeit, ausreichend Blut zu bekommen. Der vorliegende Bericht beschreibt eine einfache Blut-Sampling-Methode, die Erfassungsmethode Vakuum Blut, das normalerweise verwendet wird, um Blutproben von Patienten, die hier verwendet für Ratten nicht betäubt zu erhalten. Die 22 G Schmetterling Nadelspitze wurde in einer der seitlichen Schweif Venen eingefügt, ca. 2-3 cm von der Spitze der Rute in einem Winkel von ca. 20° und Blut in das Vakuum Sammelröhrchen gesammelt wurden, indem man Kautschuk Ende der Schmetterling Nadel in die va Cuum Blutsammelröhrchen. Die vorliegenden experimentellen Ergebnisse zeigen, dass die Erfolgsquote bei 95 % in der experimentellen Gruppe und 90 % in der Anfängergruppe war. Die Erfolgsquote und Punktion Zeiten waren zwischen beiden Gruppen ähnlich. Die Dauer der Probenahme war deutlich kürzer in der experimentellen Gruppe im Vergleich zur Anfängergruppe. Zusammenfassend ist dieses Vakuum Blut Erfassungsmethode für sequentielle Blutentnahme aus der Vene Schweif nicht anästhesierten Ratten möglich und einfach zu erlernen, die könnte als eine zuverlässige Alternative zu konventionell Blut Stichprobenverfahren für verwendet dienen Ratten.

Dauer der Probenahme, Körpermasse und Blut Auffangvolumen der beiden Gruppen Blut wurde zweimal innerhalb von zwei Wochen in jeder Gruppe aus 10 Ratten (5 Rüden) gesammelt. Der mittlere Body Mass in beiden Gruppen war ähnlich (272,00 ±9.66 g und 273.70 ±8.87 g). Probenahme von Dauer war deutlich kürzer in der experimentellen Gruppe im Vergleich zur Anfängergruppe (2,77 ±0.53 min vs. 3,28 ±0.83 min, p < 0,05) (Tabelle 1).
Erfolg bewerten und Zeiten der beiden Gruppen zu durchbohren Die Erfolgsquote betrug 95 % (19/20) in der experimentellen Gruppe und 90 % (18/20) in der Anfängergruppe (p > 0.05). Punktion Zeiten unterschieden sich nicht signifikant zwischen den beiden Gruppen (1,50 ±0.61 min vs. 1,85 ±0.75 min, p > 0,05) (Tabelle 2). Diese Ergebnisse deuten darauf hin, diese Methode ist leicht zu erlernen und die Technik könnte nach dem Training für 2 h bewältigt werden.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55852/55852fig1.jpg"> Abbildung 1 : 2 mL Vakuum Blut Sammelrohr (links), 22 G Schmetterling Nadel (Mitte); der zurückhaltende Kunststoffhalter (rechts). <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/55852/55852fig1large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55852/55852fig2.jpg"> Abbildung 2 : Die Nadelspitze in die seitlichen Schweif Vene (ca. 5 mm) an der Position eingefügt wurde etwa 2-3 cm entfernt von der Schwanzspitze im Winkel von ca. 20°. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/55852/55852fig2large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55852/55852fig3.jpg"> Abbildung 3 : Erfolgreiche Venenpunktion. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/55852/55852fig3large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td colspan="5">Experimentelle Gruppe</td>
			<td></td>
			<td colspan="5">Anfängergruppe</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td>Geschlecht</td>
			<td>Gewicht (g)</td>
			<td>Gesammelte Blutvolumen (mL)</td>
			<td>Probenahme-Dauer (min.)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Geschlecht</td>
			<td>Gewicht (g)</td>
			<td>Gesammelte Blutvolumen (mL)</td>
			<td>Probenahme-Dauer (min.)</td>
		</tr>
<tr>
<td>E1-1</td>
			<td>Männlich</td>
			<td>291</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.12</td>
			<td></td>
			<td>B1-1</td>
			<td>Männlich</td>
			<td>282</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.18</td>
		</tr>
<tr>
<td>E1-2</td>
			<td>Männlich</td>
			<td>291</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.73</td>
			<td></td>
			<td>B1-2</td>
			<td>Männlich</td>
			<td>282</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.18</td>
		</tr>
<tr>
<td>E2-1</td>
			<td>Männlich</td>
			<td>276</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.3</td>
			<td></td>
			<td>B2-1</td>
			<td>Männlich</td>
			<td>264</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3,73</td>
		</tr>
<tr>
<td>E2-2</td>
			<td>Männlich</td>
			<td>276</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2,37</td>
			<td></td>
			<td>B2-2</td>
			<td>Männlich</td>
			<td>264</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.47</td>
		</tr>
<tr>
<td>E3-1</td>
			<td>Männlich</td>
			<td>267</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.73</td>
			<td></td>
			<td>B3-1</td>
			<td>Männlich</td>
			<td>265</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.52</td>
		</tr>
<tr>
<td>E3-2</td>
			<td>Männlich</td>
			<td>267</td>
			<td>1.0</td>
			<td>3.88</td>
			<td></td>
			<td>B3-2</td>
			<td>Männlich</td>
			<td>265</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.53</td>
		</tr>
<tr>
<td>E4-1</td>
			<td>Männlich</td>
			<td>263</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.41</td>
			<td></td>
			<td>B4-1</td>
			<td>Männlich</td>
			<td>289</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.32</td>
		</tr>
<tr>
<td>E4-2</td>
			<td>Männlich</td>
			<td>263</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.52</td>
			<td></td>
			<td>B4-2</td>
			<td>Männlich</td>
			<td>289</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.62</td>
		</tr>
<tr>
<td>E5-1</td>
			<td>Männlich</td>
			<td>265</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.61</td>
			<td></td>
			<td>B5-1</td>
			<td>Männlich</td>
			<td>277</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.48</td>
		</tr>
<tr>
<td>E5-2</td>
			<td>Männlich</td>
			<td>265</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.42</td>
			<td></td>
			<td>B5-2</td>
			<td>Männlich</td>
			<td>277</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.12</td>
		</tr>
<tr>
<td>E6-1</td>
			<td>Weiblich</td>
			<td>285</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.33</td>
			<td></td>
			<td>B6-1</td>
			<td>Weiblich</td>
			<td>274</td>
			<td>0,9</td>
			<td>4,87</td>
		</tr>
<tr>
<td>E6-2</td>
			<td>Weiblich</td>
			<td>285</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.03</td>
			<td></td>
			<td>B6-2</td>
			<td>Weiblich</td>
			<td>274</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.37</td>
		</tr>
<tr>
<td>E7-1</td>
			<td>Weiblich</td>
			<td>271</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.82</td>
			<td></td>
			<td>B7-1</td>
			<td>Weiblich</td>
			<td>268</td>
			<td>1.0</td>
			<td>3.93</td>
		</tr>
<tr>
<td>E7-2</td>
			<td>Weiblich</td>
			<td>271</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.42</td>
			<td></td>
			<td>B7-2</td>
			<td>Weiblich</td>
			<td>268</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3,82</td>
		</tr>
<tr>
<td>E8-1</td>
			<td>Weiblich</td>
			<td>268</td>
			<td>1.2</td>
			<td>1.93</td>
			<td></td>
			<td>B8-1</td>
			<td>Weiblich</td>
			<td>262</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.07</td>
		</tr>
<tr>
<td>E8-2</td>
			<td>Weiblich</td>
			<td>268</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.05</td>
			<td></td>
			<td>B8-2</td>
			<td>Weiblich</td>
			<td>262</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3,67</td>
		</tr>
<tr>
<td>E9-1</td>
			<td>Weiblich</td>
			<td>273</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.52</td>
			<td></td>
			<td>B9-1</td>
			<td>Weiblich</td>
			<td>281</td>
			<td>1.2</td>
			<td>4.38</td>
		</tr>
<tr>
<td>E9-2</td>
			<td>Weiblich</td>
			<td>273</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.17</td>
			<td></td>
			<td>B9-2</td>
			<td>Weiblich</td>
			<td>281</td>
			<td>1.2</td>
			<td>4.57</td>
		</tr>
<tr>
<td>E10-1</td>
			<td>Weiblich</td>
			<td>261</td>
			<td>1.2</td>
			<td>1,82</td>
			<td></td>
			<td>B10-1</td>
			<td>Weiblich</td>
			<td>275</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.53</td>
		</tr>
<tr>
<td>E10-2</td>
			<td>Weiblich</td>
			<td>261</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.25</td>
			<td></td>
			<td>B10-2</td>
			<td>Weiblich</td>
			<td>275</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.28</td>
		</tr>
<tr>
<td>Durchschnitt</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>2,77</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>3.28</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="11">En-1: Seriennummer der Ratten in der experimentellen Gruppe zur ersten Blutentnahme.</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="11">En-2: Seriennummer der Ratten in der experimentellen Gruppe zur zweiten Blutentnahme.</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="11">BN-1: Seriennummer der Ratten in der Anfängergruppe für die erste Blutentnahme.</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="11">BN-2: Seriennummer der Ratten in der Anfängergruppe für die zweite Blutentnahme.</td>
		</tr>
</tbody></table>Tabelle 1: Ergebnisse des Blutes in der experimentellen Gruppe und der Anfängergruppe gesammelt.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td></td>
			<td>Blut-Abholzeiten</td>
			<td>Durchschnittliche Punktion Zeiten</td>
			<td>Ein Zeit-Punktion</td>
			<td>Zwei Mal Punktion</td>
			<td>Drei Mal Punktion</td>
			<td>Fehler beim</td>
			<td>Erfolgsquote</td>
		</tr>
<tr>
<td>Experimentelle Gruppe</td>
			<td>20</td>
			<td>1,50 ±0.61</td>
			<td>11</td>
			<td>8</td>
			<td>0</td>
			<td>1</td>
			<td>95 %</td>
		</tr>
<tr>
<td>Anfängergruppe</td>
			<td>20</td>
			<td>1.85 ±0.75</td>
			<td>7</td>
			<td>9</td>
			<td>2</td>
			<td>2</td>
			<td>90 %</td>
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<td colspan="6">Ein Zeit-Punktion: Anzahl von Ratten mit erfolgreichen Blutentnahme nach der ersten Punktion</td>
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<td colspan="6">Zwei Mal Punktion: Anzahl von Ratten mit erfolgreichen Blutentnahme nach der zweiten Punktion</td>
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<td colspan="6">Drei Mal Punktion: Anzahl von Ratten mit erfolgreichen Blutentnahme nach der dritten Punktion</td>
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<td colspan="5">Fehler: Anzahl der Ratten mit fehlgeschlagenen Blutentnahme nach der dritten Punktion</td>
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</tbody></table>Tabelle 2: Vergleich der Punktion Zeiten und Erfolgsraten von der Versuchsgruppe und die Anfängergruppe.

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Repeated Blood Collection from Tail Vein of Non-Anesthetized Rats with a Vacuum Blood Collection System

Hier beschreiben wir eine einfache Rute Vene Blut Sampling-Methode in nicht betäubt Ratten mit einer Absauganlage Rohr. Diese Methode verringert das Risiko der direkten Kontakt mit Blut und vereinfacht, wobei mehrere Proben aus einem einzigen Venenpunktion.

Wiederholte Blutentnahme aus Tail Vene nicht betäubt Ratten mit einem Vakuum Blut-Sammelsystem

Blood can be collected from rats in a number of sampling locations. For instance, the tail vein is a superior location for blood sampling. However, the ...

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Research

JoVE Journal

Medicine

35.4K Aufrufe.  Jianghan University. Hier beschreiben wir eine einfache Rute Vene Blut Sampling-Methode in nicht betäubt Ratten mit einer Absauganlage Rohr. Diese Methode verringert das Risiko der direkten Kontakt mit Blut und vereinfacht, wobei mehrere Proben aus einem einzigen Venenpunktion.

Serie: Repeated Blood Collection from Tail Vein of Non-Anesthetized Rats with a Vacuum Blood Collection System

Collection Protocol for Human Pancreas

This dissection and sampling procedure was developed for the Network for Pancreatic Organ Donors with Diabetes (nPOD) program to standardize preparation of pancreas recovered from cadaveric organ donors. The pancreas is divided into 3 main regions (head, body, tail) followed by serial transverse sections throughout the medial to lateral axis. Alternating sections are used for fixed paraffin and fresh frozen blocks and remnant samples are minced for snap frozen sample preparations, either with or without RNAse inhibitors, for DNA, RNA, or protein isolation. The overall goal of the pancreas dissection procedure is to sample the entire pancreas while maintaining anatomical orientation.
Endocrine cell heterogeneity in terms of islet composition, size, and numbers is reported for human islets compared to rodent islets 1. The majority of human islets from the pancreas head, body and tail regions are composed of insulin-containing &beta;-cells followed by lower proportions of glucagon-containing &alpha;-cells and somatostatin-containing &delta;-cells. Pancreatic polypeptide-containing PP cells and ghrelin-containing epsilon cells are also present but in small numbers. In contrast, the uncinate region contains islets that are primarily composed of pancreatic polypeptide-containing PP cells 2. These regional islet variations arise from developmental differences. The pancreas develops from the ventral and dorsal pancreatic buds in the foregut and after rotation of the stomach and duodenum, the ventral lobe moves and fuses with the dorsal 3. The ventral lobe forms the posterior portion of the head including the uncinate process while the dorsal lobe gives rise to the rest of the organ. Regional pancreatic variation is also reported with the tail region having higher islet density compared to other regions and the dorsal lobe-derived components undergoing selective atrophy in type 1 diabetes4,5.
Additional organs and tissues are often recovered from the organ donors and include pancreatic lymph nodes, spleen and non-pancreatic lymph nodes. These samples are recovered with similar formats as for the pancreas with the addition of isolation of cryopreserved cells. When the proximal duodenum is included with the pancreas, duodenal mucosa may be collected for paraffin and frozen blocks and minced snap frozen preparations.

This video demonstrates a dissection procedure for processing human pancreas into multiple storage formats. Anatomical orientation is maintained throughout the pancreatic regions to allow definition of regional islet composition and density.

Sammlung Protokoll zur menschlichen Pankreas

This dissection and sampling procedure was developed for the Network for Pancreatic Organ Donors with Diabetes (nPOD) program to standardize preparation ...

Forschung

Medizin

Dried Blood Spot Collection of Health Biomarkers to Maximize Participation in Population Studies

Biomarkers are directly-measured biological indicators of disease, health, exposures, or other biological information. In population and social sciences, biomarkers need to be easy to obtain, transport, and analyze. Dried Blood Spots meet this need, and can be collected in the field with high response rates. These elements are particularly important in longitudinal study designs including interventions where attrition is critical to avoid, and high response rates improve the interpretation of results. Dried Blood Spot sample collection is simple, quick, relatively painless, less invasive then venipuncture, and requires minimal field storage requirements (i.e.&#160;samples do not need to be immediately frozen and can be stored for a long period of time in a stable freezer environment before assay). The samples can be analyzed for a variety of different analytes, including cholesterol, C-reactive protein, glycosylated hemoglobin, numerous cytokines, and other analytes, as well as provide genetic material. DBS collection is depicted as employed in several recent studies.

Biomarkers are directly-measured biological indicators of disease or health. In population and social sciences, biomarkers need to be easy to obtain, transport, and analyze. Dried Blood Spot (DBS) collection meets this need, can be collected in the field with high response rates&#160;and analyzed for a variety of biomarkers.

Trockenblut Sammlung von Gesundheits-Biomarker zur Teilnahme am Bevölkerungsstudien maximieren

Biomarkers are directly-measured biological indicators of disease, health, exposures, or other biological information. In population and social sciences, ...

Collection, Isolation, and Flow Cytometric Analysis of Human Endocervical Samples

Despite the public health importance of mucosal pathogens (including HIV), relatively little is known about mucosal immunity, particularly at the female genital tract (FGT). Because heterosexual transmission now represents the dominant mechanism of HIV transmission, and given the continual spread of sexually transmitted infections (STIs), it is critical to understand the interplay between host and pathogen at the genital mucosa. The substantial gaps in knowledge around FGT immunity are partially due to the difficulty in successfully collecting and processing mucosal samples. In order to facilitate studies with sufficient sample size, collection techniques must be minimally invasive and efficient. To this end, a protocol for the collection of cervical cytobrush samples and subsequent isolation of cervical mononuclear cells (CMC) has been optimized. Using ex vivo flow cytometry-based immunophenotyping, it is possible to accurately and reliably quantify CMC lymphocyte/monocyte population frequencies and phenotypes. This technique can be coupled with the collection of cervical-vaginal lavage (CVL), which contains soluble immune mediators including cytokines, chemokines and anti-proteases, all of which can be used to determine the anti- or pro-inflammatory environment in the vagina.

The use of cytobrush sampling to collect lymphocytes and monocytes from the endocervix is a minimally invasive technique that provides samples for analysis of female genital tract immunity. In this protocol, we describe the collection of cytobrush samples and immune cell isolation for flow cytometry assays.

Sammlung, Isolierung, und Durchflusszytometrische Analyse der Menschen Endozervikale Proben

Despite the public health importance of mucosal pathogens (including HIV), relatively little is known about mucosal immunity, particularly at the female ...

Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

Clinically, thrombolytic therapy with use of recombinant tissue plasminogen activator (tPA) remains the most effective treatment for acute ischemic stroke. However, the use of tPA is limited by its narrow therapeutic window and by increased risk of hemorrhagic transformation. There is an urgent need to develop suitable stroke models to study new thrombolytic agents and strategies for treatment of ischemic stroke. At present, two major types of ischemic stroke models have been developed in rats and mice: intraluminal suture MCAO and embolic MCAO. Although MCAO models via the intraluminal suture technique have been widely used in mechanism-driven stroke research, these suture models do not mimic the clinical situation and are not suitable for thrombolytic studies. Among these models, the embolic MCAO model closely mimics human ischemic stroke and is suitable for preclinical investigation of thrombolytic therapy. This embolic model was first developed in rats by Overgaard et al.1 in 1992 and further characterized by Zhang et al. in 19972. Although embolic MCAO has gained increasing attention, there are technical problems faced by many laboratories. To meet increasing needs for thrombolytic research, we present a highly reproducible model of embolic MCAO in the rat, which can develop a predictable infarct volume within the MCA territory. In brief, a modified PE-50 tube is gently advanced from the external carotid artery (ECA) into the lumen of the internal carotid artery (ICA) until the tip of the catheter reaches the origin of the MCA. Through the catheter, a single homologous blood clot is placed at the origin of the MCA. To identify the success of MCA occlusion, regional cerebral blood flow was monitored, neurological deficits and infarct volumes were measured. The techniques presented in this paper should help investigators to overcome technical problems for establishing this model for stroke research.

Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

In this paper, we demonstrate a standard method for producing an embolic middle cerebral artery occlusion with homologous blood clots (fibrin-rich) in adult rat. This model closely mimics human ischemic stroke and is suitable for preclinical study of thrombolytic therapy for ischemic stroke.

Embolischen mittleren Hirnarterie Okklusion (MCAO) für ischämischen Schlaganfall mit homologen Blutgerinnsel in Ratten

Clinically, thrombolytic therapy with use of recombinant tissue plasminogen activator (tPA) remains the most effective treatment for acute ischemic ...

Routine Screening Method for Microparticles in Platelet Transfusions

Platelet inventory management based on screening microparticle content in platelet concentrates is a new quality improvement initiative for hospital blood banks. Cells fragment off microparticles (MP) when they are stressed. Blood and blood components may contain cellular fragments from a variety of cells, most notably from activated platelets. When performing their roles as innate immune cells and major players in coagulation and hemostasis, platelets change shape and generate microparticles. With dynamic light scattering (DLS)-based microparticle detection, it is possible to differentiate activated (high microparticle) from non-activated (low microparticle) platelets in transfusions, and optimize the use of this scarce blood product. Previous research suggests that providing non-activated platelets for prophylactic use in hematology-oncology patients could reduce their risk of becoming refractory and improve patient care. The goal of this screening method is to routinely differentiate activated from non-activated platelets. The method described here outlines the steps to be performed for routine platelet inventory management in a hospital blood bank: obtaining a sample from a platelet transfusion, loading the sample into the capillary for DLS measurement, performing the DLS test to identify microparticles, and using the reported microparticle content to identify activated platelets.

Platelet inventory management based on screening microparticle content in platelet concentrates is a new quality improvement initiative in hospital blood banks. The goal is to differentiate activated from non-activated platelets to optimize the use of platelets. Providing non-activated platelets to hematology-oncology patients might reduce their high risk to become refractory.

Routine-Screening Methode für Mikropartikel in Thrombozytentransfusionen

Platelet inventory management based on screening microparticle content in platelet concentrates is a new quality improvement initiative for hospital blood ...

Subclavian Vein Puncture As an Alternative Method of Blood Sample Collection in Rats

Blood collection with enough blood volume is essential in animal experiments. Blood collection from the tail vein of rats is popular and less stressful compared to other more aggressive methods such as retro-orbital plexus sample collection. However, this blood collection method is sometimes limited by an unsatisfactory success rate. Here, we introduce a method for blood collection through the subclavian vein puncture. The subclavian vein is located just under the clavicle and this vein is large enough to fulfill the volume requirements of blood collection. Our results show that this method is safe and applicable for blood collection sampling with the required blood volume. Blood collection through the subclavian vein puncture could serve as an alternative blood collection method in case of failed tail vein blood sampling in rats.

Here, we present a protocol to collect blood samples from the rat subclavian vein.

Vene subclavia Punktion als eine Alternative Methode zur Probe Blutentnahme bei Ratten

Blood collection with enough blood volume is essential in animal experiments. Blood collection from the tail vein of rats is popular and less stressful ...

Simultaneous Electrocardiography Recording and Invasive Blood Pressure Measurement in Rats

For studies related to cardiovascular physiology or pathophysiology, blood pressure (BP) and electrocardiography are basic observational parameters. Research focusing on cardiovascular disease models, potential cardiovascular therapeutic targets or pharmaceutical agents requires assessment of systemic arterial pressure and heart rhythm changes. In situations where radio telemetry systems are not available or affordable, the technique of femoral artery cannulation is an alternative way to obtain intra-arterial pressure waveform recordings and systemic BP measurements. This technique is economical and can be performed with standard equipment in animal facilities. However, invasive arterial pressure recording requires cannulation of small arteries, which can be a challenging surgical skill. Here, we present step-by-step protocols for femoral artery cannulation procedures. Key procedures include the calibration of the data acquisition system, tissue dissection and femoral artery cannulation, and setup of the arterial cannulation system for pressure recording. Surface electrocardiography recording procedures are also included. We also present examples of BP recordings from normotensive and hypertensive rats. This protocol allows reliable direct recordings of systemic BP with simultaneous electrocardiography.

Here, we describe a setup for simultaneous recording of electrocardiography and intra-arterial blood pressure (BP) in experimental rats, which can be done with standard equipment in animal facilities and can be applied to physiological or pharmacological studies to investigate pathogenic or therapeutic mechanisms in cardiovascular medicine.

Gleichzeitige Elektrokardiographie Aufnahme und Invasive Blut Druckmessung bei Ratten

For studies related to cardiovascular physiology or pathophysiology, blood pressure (BP) and electrocardiography are basic observational parameters. ...

A New Best Practice for Validating Tail Vein Injections in Rat with Near-infrared-Labeled Agents

Intravenous (IV) administration of agents into the tail vein of rats can be both difficult and inconsistent. Optimizing tail vein injections is a key part of many experimental procedures where reagents need to be introduced directly into the bloodstream. Unwittingly, the injection can be subcutaneous, possibly altering the scientific outcomes. Utilizing a nanoemulsion-based biological probe with an incorporated near-infrared fluorescent (NIRF) dye, this method offers the capability of imaging a successful tail vein injection in vivo. With the use of a NIRF imager, images are taken before and after the injection of the agent. An acceptable IV injection is then qualitatively or quantitatively determined based on the intensity of the NIRF signal at the site of injection.

Here we present a method to validate tail vein injections in rats by utilizing near-infrared fluorescence imaging data from dyes incorporated into agents or biological probes. The tail is imaged before and after the injection, the fluorescent signal is quantified, and an assessment of the injection quality is made.

Neue bewährte Methode zur Validierung von Tail Vene Injektionen in Ratte mit nahe-Infrarot-Label Agenten

Intravenous (IV) administration of agents into the tail vein of rats can be both difficult and inconsistent. Optimizing tail vein injections is a key part ...

Blood Collection Through Subclavian Vein Puncture in Mice

The mouse is the foremost mammalian model for studying human disease and human health. However, blood sample collection from mice is challenging in research work. Tail blood collection is a popular method when a small amount of blood sample is needed. Orbital artery could be considered if a large amount of blood is needed but this blood collection method has ethical issues. Formerly, we demonstrated the feasibility and safety of blood sample collection through subclavian vein puncture in rats, and here we investigate whether this method could be used in mice. We report that this method is safe and practical for blood collection in mice. Blood collection through the subclavian vein puncture in mice can be a convenient method in daily research works.

Here, we present a protocol to take blood samples from the subclavian vein of mice.

Blutentnahme durch Subclavian-Vein-Punktion in Mäusen

The mouse is the foremost mammalian model for studying human disease and human health. However, blood sample collection from mice is challenging in ...

Simultaneous Flow Cytometric Characterization of Multiple Cell Types Retrieved from Mouse Brain/Spinal Cord Through Different Homogenization Methods

Recent advances in viral vector and nanomaterial sciences have opened the way for new cutting-edge approaches to investigate or manipulate the central nervous system (CNS). However, further optimization of these technologies would benefit from methods allowing rapid and streamline determination of the extent of CNS and cell-specific targeting upon administration of viral vectors or nanoparticles in the body. Here, we present a protocol that takes advantage of the high throughput and multiplexing capabilities of flow cytometry to allow a straightforward quantification of different cell subtypes isolated from mouse brain or spinal cord, namely microglia/macrophages, lymphocytes, astrocytes, oligodendrocytes, neurons and endothelial cells. We apply this approach to highlight critical differences between two tissue homogenization methods in terms of cell yield, viability and composition. This could instruct the user to choose the best method depending on the cell type(s) of interest and the specific application. This method is not suited for analysis of anatomical distribution, since the tissue is homogenized to generate a single-cell suspension. However, it allows to work with viable cells and it can be combined with cell-sorting, opening the way for several applications that could expand the repertoire of tools in the hands of the neuroscientist, ranging from establishment of primary cultures derived from pure cell populations, to gene-expression analyses and biochemical or functional assays on well-defined cell subtypes in the context of neurodegenerative diseases, upon pharmacological treatment or gene therapy.

We present a flow cytometry method to identify simultaneously different cell types retrieved from mouse brain or spinal cord. This method could be exploited to isolate or characterize pure cell populations in neurodegenerative diseases or to quantify the extent of cell targeting upon in vivo administration of viral vectors or nanoparticles.

Gleichzeitige zytometrische Charakterisierung mehrerer Zelltypen, die durch verschiedene Homogenisierungsmethoden aus dem Maushirn/Spinalcord abgerufen wurden

Recent advances in viral vector and nanomaterial sciences have opened the way for new cutting-edge approaches to investigate or manipulate the central ...